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血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达及功能研究
被引量：
2
1
作者
余自强
董宁征
+4 位作者
白霞
祝怀平
季顺东
江淼
阮长耿
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2005年第2期304-308,共5页
为了深入研究血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ(glycoprotein Ⅵ,GPⅥ)功能及筛选特异性抑制剂,利用基因重 组技术体外表达GPⅥ胞外区片段。采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA,构建表达载体pET-20b(+)-GP Ⅵ,转化大肠杆茵BL21(DE3)pLysS,经IPTG...
为了深入研究血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ(glycoprotein Ⅵ,GPⅥ)功能及筛选特异性抑制剂,利用基因重 组技术体外表达GPⅥ胞外区片段。采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA,构建表达载体pET-20b(+)-GP Ⅵ,转化大肠杆茵BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA Resin纯化、复性;使用Western blot方 法鉴定重组蛋白性质;采用胶原结合试验测定重组蛋白的胶原结合能力。结果表明,经测序证明PCR扩增产物与 GPⅥ胞外区cDNA序列完全一致;酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b(+)-GPⅥ;原核细胞经诱导表达后 出现新的相对分子量32 kD蛋白条带,诱导产物以包涵体形式存在;Western blot分析表明重组蛋白可与抗Penta- His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合;胶原结合试验表明重组蛋白拥有较好的生物学功能。结论:正确构建了GPⅥ 表达载体并成功表达重组蛋白,纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性和生物学活性。
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关键词
血小板
血小板胶原受体
血小板
糖蛋白Ⅵ
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职称材料
题名
血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达及功能研究
被引量：
2
1
作者
余自强
董宁征
白霞
祝怀平
季顺东
江淼
阮长耿
机构
苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所
安徽省立医院
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2005年第2期304-308,共5页
基金
苏州大学附属第一医院血液病学'135工程'重点学科开放课题基金资助
文摘
为了深入研究血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ(glycoprotein Ⅵ,GPⅥ)功能及筛选特异性抑制剂,利用基因重 组技术体外表达GPⅥ胞外区片段。采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA,构建表达载体pET-20b(+)-GP Ⅵ,转化大肠杆茵BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA Resin纯化、复性;使用Western blot方 法鉴定重组蛋白性质;采用胶原结合试验测定重组蛋白的胶原结合能力。结果表明,经测序证明PCR扩增产物与 GPⅥ胞外区cDNA序列完全一致;酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b(+)-GPⅥ;原核细胞经诱导表达后 出现新的相对分子量32 kD蛋白条带,诱导产物以包涵体形式存在;Western blot分析表明重组蛋白可与抗Penta- His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合;胶原结合试验表明重组蛋白拥有较好的生物学功能。结论:正确构建了GPⅥ 表达载体并成功表达重组蛋白,纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性和生物学活性。
关键词
血小板
血小板胶原受体
血小板
糖蛋白Ⅵ
Keywords
platelet
platalet collagen receptor
glycoprotein Ⅵ
分类号
R331.143 [医药卫生—人体生理学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达及功能研究
余自强
董宁征
白霞
祝怀平
季顺东
江淼
阮长耿
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2005
2
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