流式细胞术在检测血小板无力症中的意义 被引量：3

1

作者 韩悦 王兆钺 +4 位作者 王爱青 张威 赵益明 朱明清 阮长耿 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期238-240,共3页

血小板上含有丰富的GPⅡ-Ⅲa,在血小板聚集时,GPⅡb-Ⅲa复合物上的纤维蛋白原受体与纤维蛋白原结合。血小板无力症(Glanzmann’s thrombasthenia,GT)患者是GPⅡb-Ⅲa复合物的质或量的缺陷所致血小板聚集异常。通常用聚丙烯酸胺凝胶电泳(... 血小板上含有丰富的GPⅡ-Ⅲa,在血小板聚集时,GPⅡb-Ⅲa复合物上的纤维蛋白原受体与纤维蛋白原结合。血小板无力症(Glanzmann’s thrombasthenia,GT)患者是GPⅡb-Ⅲa复合物的质或量的缺陷所致血小板聚集异常。通常用聚丙烯酸胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western印迹等方法检测膜糖蛋白,但操作烦琐、费时费试剂。流式细胞术(FCM)及特异性单机的应用使血小板膜GP检测有了新突破,特别是纤维蛋白原结合试验使变异型GT的诊断成为可能。我们用FCM检测12例GT患者及其家属的血小板膜GP及纤维蛋白原结合并与SDS-PAGE和Western印迹做比较,以探索FCM方法对GT诊断的价值和意义。 展开更多

关键词 血小板无力症 流式细胞术 血小板 糖蛋白 纤维蛋白原

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遗传性血小板无力症的发病机制及产前诊断 被引量：1

2

作者 李建琴 王兆钺 +2 位作者 胡绍燕 赵小娟 曹丽娟 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期132-135,共4页

目的探讨血小板无力症（GT）的基因测序与产前诊断。方法采集1例表型GT患儿、父母及1例正常对照者的静脉血,患儿母亲腹中孕23周胎儿的脐带血和羊水,及其出生2 d时的静脉血。检测患儿、患儿父母、胎儿脐血及正常对照者的血凝常规和血小... 目的探讨血小板无力症（GT）的基因测序与产前诊断。方法采集1例表型GT患儿、父母及1例正常对照者的静脉血,患儿母亲腹中孕23周胎儿的脐带血和羊水,及其出生2 d时的静脉血。检测患儿、患儿父母、胎儿脐血及正常对照者的血凝常规和血小板聚集试验;流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白（GP）Ⅱb和GPⅢa的表达;微卫星技术确定胎儿脐血是否被母体细胞污染;PCR技术扩增患儿及其父母,以及胎儿及出生2 d静脉血GPⅡb、GPⅢa所有外显子以及外显子和内含子交界区,扩增产物直接测序。结果二磷酸腺苷（ADP）不能诱导患儿的血小板发生聚集,胎儿脐血中ADP诱导的血小板最大聚集率约为正常人一半,患儿父母和胎儿出生2 d的ADP诱导的血小板最大聚集率与正常血小板聚集率相当。患儿血小板膜表面GPⅡb、GPⅢa的的平均荧光强度（Mn X）分别约为正常对照的10%及0,而患儿父母、胎儿脐血和胎儿出生2 d的Mn X分别为正常对照的90%以上和30%-50%。羊水胎儿脱落细胞和脐血DNA微卫星分析证实胎儿羊水、脐血未被母体细胞污染;基因分析结果显示,患儿GPⅢa 6号外显子A38293→C和9号外显子G42186→A的杂合突变,导致GPⅢa His281→Tyr和Cys400→Pro氨基酸的杂合改变。这两个突变分别来源于父亲和母亲。羊水胎儿脱落细胞、脐血或出生2 d静脉血中只有1个GPⅢa9号外显子G42186→A的杂合突变。结论 GT患儿GPⅢa的基因为双重杂合突变;胎儿出生后确证为GPⅢa基因杂合突变。 展开更多

关键词 血小板无力症 微卫星分析 糖蛋白Ⅱb/Ⅲa基因 产前诊断

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一种新的GP Ⅱb基因540A缺失移码突变引起的血小板无力症

3

作者 蹇在伏 唐发清 +2 位作者 陈方平 解勤之 王光平 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期165-168,共4页

目的:为了明确1例血小板无力症患者发生的分子机制。方法:用40对引物对血小板无力症患者GPⅡb/Ⅲa(αIIbβ3)基因的45个外显子序列及其剪切点进行全长扩增,用SSCP-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对扩增产物进行基因突变筛选,将筛选出的PCR产物... 目的:为了明确1例血小板无力症患者发生的分子机制。方法:用40对引物对血小板无力症患者GPⅡb/Ⅲa(αIIbβ3)基因的45个外显子序列及其剪切点进行全长扩增,用SSCP-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对扩增产物进行基因突变筛选,将筛选出的PCR产物进行直接测序。结果:患者GPⅡb基因Exon4的PCR产物经SSCP-聚丙烯酰胺凝胶电泳后出现异常条带,PCR产物直接测序显示GPⅡb基因540A缺失导致后面的氨基酸编码发生移码突变。结论:GPⅡb基因540A缺失发生移码突变是GPⅡb基因的一种新突变,是血小板无力症发病的分子基础之一。 展开更多

关键词 血小板无力症 GPⅡb/Ⅲaa 基因突变

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妊娠合并血小板无力症1例

4

作者 王秀丽 孙丽洲 张国英 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期632-633,共2页

关键词 血小板无力症 妊娠 持续阴道流血 输血治疗 血常规检查 病例报告 下腹坠胀 月经规律

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遗传性血小板无力症发病机制及治疗进展 被引量：6

5

作者 高敏 苏庸春 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期486-489,共4页

遗传性血小板无力症是一种遗传性血小板功能障碍性疾病,由于血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa数量或结构异常,导致血小板对多种诱聚剂反应不良。临床表现为自幼反复发生的自发性出血,且常伴终生。本病属罕见遗传性疾病,尚无统一的根治性治疗措... 遗传性血小板无力症是一种遗传性血小板功能障碍性疾病,由于血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa数量或结构异常,导致血小板对多种诱聚剂反应不良。临床表现为自幼反复发生的自发性出血,且常伴终生。本病属罕见遗传性疾病,尚无统一的根治性治疗措施。文章对遗传性血小板无力症的发病机制及治疗进展作一综述。 展开更多

关键词 血小板 遗传性血小板无力症 发病机制 基因突变 治疗

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介入栓塞术治疗血小板无力症子宫出血一例 被引量：1

6

作者 安潇 王精兵 +3 位作者 王悍 王麟川 高礼强 史晶莹 《介入放射学杂志》 CSCD 2008年第11期836-836,共1页

临床资料 患者女，26岁。以“月经量过多1d”于2007年11月22日入院。患者出生时即因出血倾向而诊断为先天性血小板无力症（glanzmann thrombasthenia，GT），幼年时曾有胃出血病史，自初潮起每次月经均量多，曾4次黄体破裂。入院查RBC2... 临床资料 患者女，26岁。以“月经量过多1d”于2007年11月22日入院。患者出生时即因出血倾向而诊断为先天性血小板无力症（glanzmann thrombasthenia，GT），幼年时曾有胃出血病史，自初潮起每次月经均量多，曾4次黄体破裂。入院查RBC2．71×10^12／LHb 76g／L，PC 236×109／L．PI、10．20s，INR0．98，APTT 26．10s，FIB 2．39g／L， 展开更多

关键词 动脉栓塞 血小板无力症 子宫出血

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遗传性血小板无力症洁治后牙龈出血1例 被引量：2

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作者 班建东 齐凤娜 +5 位作者 冯向辉 侯燕 刘涛 周传奇 李军科 王宏伟 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期690-691,共2页

血小板无力症是由于Ⅱb/Ⅲa数量或结构异常,导致血小板对多种诱聚剂反应不良的少见遗传病。本文报道1例遗传性血小板无力症患者洁治后出血不止的病例。

关键词 血小板无力症 牙龈出血 洁治 血小板输注 氨甲环酸

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CRISPR/Cas9技术构建的ITGA2B c.2659C>T(p.Q887X)无义突变的血小板无力症小鼠模型对血小板功能的影响

8

作者 杨飞 江淼 +6 位作者 林赠华 谢展利 马珍妮 杨力 刘红 王兆钺 周鹭 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期559-564,共6页

目的:用CRISPR/Cas9技术构建稳定表达的ITGA2B c.2659C>T (p.Q887X)无义突变的血小板无力症小鼠模型,并对其血小板膜表面糖蛋白αIIbβ3的功能做进一步研究。方法:根据ITGA2B基因信息设计并合成针对c.2659C位置的供体寡核苷酸和g RN... 目的:用CRISPR/Cas9技术构建稳定表达的ITGA2B c.2659C>T (p.Q887X)无义突变的血小板无力症小鼠模型,并对其血小板膜表面糖蛋白αIIbβ3的功能做进一步研究。方法:根据ITGA2B基因信息设计并合成针对c.2659C位置的供体寡核苷酸和g RNA载体并进行体外转录。将g RNA和Cas9 m RNA与供体寡核苷酸共注射到受精卵,并送回到代孕鼠输卵管中。鼠出生后进行PCR基因分型和序列分析,获得阳性F0鼠。阳性F0鼠分别与野生型鼠配繁一代,获得经PCR和测序验证的F1代杂合型点突变GT小鼠,而后F1代小鼠通过彼此交配得到纯合型点突变GT小鼠以及对照组WT小鼠。通过检测小鼠鼠尾出血时间和隐静脉出血时间、血小板聚集功能、血小板表面αIIbβ3的表达和功能,对该小鼠模型的表型进一步验证。结果:小鼠鼠尾出血实验表明,GT小鼠割尾后的出血时间较WT小鼠明显延长(P<0.01)。小鼠隐静脉出血实验与鼠尾出血实验结果一致,即割断隐静脉后,GT小鼠的出血时间较WT小鼠明显延长(P<0.01)。在胶原、凝血酶、二磷酸腺苷诱导的血小板聚集实验中,GT小鼠血小板聚集率较WT小鼠有明显降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05),表明GT小鼠血小板聚集功能受到明显抑制。流式结果显示,GT小鼠血小板表面αIIbβ3的表达量较WT小鼠明显下降(P<0.01),在凝血酶刺激后,诱导活化的血小板与纤维蛋白原的结合量较WT小鼠明显减少(P<0.01)。纤维蛋白原铺展实验结果显示,GT小鼠的血小板在纤维蛋白原上的铺展面积较WT小鼠显著缩小(P<0.05)。结论:应用CRISPR/Cas9技术成功建立了ITGA2B c.2659C>T (p.Q887X)无义突变的GT小鼠模型。该小鼠模型血小板聚集功能缺陷,符合血小板无力症的表现。 展开更多

关键词 小鼠模型 血小板无力症 CRISPR/Cas9

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1例血小板无力症行子宫次全切除术的护理

9

作者 赫宇微 杜彬 阎丹 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期477-478,共2页

依据血小板无力症的临床特点 ,结合临床工作 。

关键词 血小板无力症 护理

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血小板无力症并发黄体破裂伴失血性休克1例 被引量：2

10

作者 康馥莉 周文君 黄家珍 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期79-80,共2页

1病例报告患者,24岁,因性交后下腹痛8小时于2020年6月8日入院。末次月经2020年5月18日,平素月经规律,周期29~30天,经期3~5天,1个周期可用10~15片卫生巾不等。

关键词 末次月经 平素月经规律 血小板无力症 病例报告 卫生巾 下腹痛 性交后

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血小板无力症与GPⅢa基因表达

11

作者 蒋纪恺 安永睦 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 1996年第3期209-211,共3页

血小板无力症是遗传性出血性疾病，因血小板膜糖蛋白（ＧＰ）Ⅲｂ／Ⅲａ基因异常造成ＧＰⅡｂ／Ⅲａ缺失，而使血小板缺乏凝聚能力。应用逆转录ＰＣＲ（ＲＴ—ＰＣＲ）技术，对一例血小板无力症患者进行基因表达分析表明６ＰⅢａ的翻译... 血小板无力症是遗传性出血性疾病，因血小板膜糖蛋白（ＧＰ）Ⅲｂ／Ⅲａ基因异常造成ＧＰⅡｂ／Ⅲａ缺失，而使血小板缺乏凝聚能力。应用逆转录ＰＣＲ（ＲＴ—ＰＣＲ）技术，对一例血小板无力症患者进行基因表达分析表明６ＰⅢａ的翻译水平异常；提示ＧＰⅢａｍＲＮＡ未被翻译表达是ＧＰⅢａ缺失的原因之一。 展开更多

关键词 血小板无力症 糖蛋白GPⅢα

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血小板膜糖蛋白αⅡbA477P(A446P)突变对αⅡbβ3复合物表达的影响(英文)

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作者 袁小瑜 陈方平 +4 位作者 夏昆 付敢 蹇在伏 解勤之 王光平 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期712-717,共6页

目的:探讨血小板膜糖蛋白αⅡbA477P(A446P)突变对αⅡbβ3蛋白表达的影响。方法:用重叠延伸PCR法对正常的αⅡb-pcDNA3.1+质粒载体进行体外定点诱变,构建了αⅡbA477P突变质粒载体;经体外真核细胞COS-7细胞转染试验后,从转录水平、蛋... 目的:探讨血小板膜糖蛋白αⅡbA477P(A446P)突变对αⅡbβ3蛋白表达的影响。方法:用重叠延伸PCR法对正常的αⅡb-pcDNA3.1+质粒载体进行体外定点诱变,构建了αⅡbA477P突变质粒载体;经体外真核细胞COS-7细胞转染试验后,从转录水平、蛋白质水平和膜表面复合物水平检测突变体在真核细胞内的表达。结果:突变的αⅡbA477P(A446P)基因在真核细胞内有转录,Western印迹显示细胞内有αⅡb蛋白的表达,但突变αⅡbA477P(A446P)β3复合物在细胞膜表面的表达量仅为正常αⅡbβ3复合物的12.95%。结论:αⅡbA477P(A446P)显著降低了αⅡbβ3复合物在细胞膜表面的表达,其机制可能是该位点的突变干扰了αⅡb和β3正常结合或者影响了αⅡb蛋白的正常构型。 展开更多

关键词 血小板无力症 整联蛋白αⅡbβ3 β-螺旋 突变 表达

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整合素αⅡbβ3缺陷对血小板由内到外信号传导的影响

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作者 唐雪元 陈方平 +4 位作者 蹇在伏 王光平 解勤之 赵谢兰 刘巍 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期207-210,共4页

目的 :探讨整合素αⅡbβ3缺陷对血小板由内到外信号传导的影响。方法 :采用DNA序列分析、流式细胞术、RT PCR和Westernblotting等检测细胞中转染cDNA的存在、表达及细胞结合PAC 1、纤维蛋白原 (fibrinogen ,Fb)的能力。结果 :血小板无... 目的 :探讨整合素αⅡbβ3缺陷对血小板由内到外信号传导的影响。方法 :采用DNA序列分析、流式细胞术、RT PCR和Westernblotting等检测细胞中转染cDNA的存在、表达及细胞结合PAC 1、纤维蛋白原 (fibrinogen ,Fb)的能力。结果 :血小板无力症 (GT)患者整合素αⅡbβ3明显低下 ,且血小板在ADP激活后不能结合PAC 1,转染β3和αⅡb(突变αⅡbR995A 或正常αⅡb)cDNA的CHO细胞株分别表达αⅡbR995A β3和αⅡbβ3,并且突变株中国仓鼠卵巢细胞(Chinesehamsterovary ,CHO)细胞αⅡb基因 30外显子上第 30 77和 30 78位碱基由CG突变为GC ,导致第 995位精氨酸被替换为丙氨酸 ;在未活化的情况下 ,αⅡbβ3CHO细胞几乎不结合PAC 1,但能结合Fb ,而αⅡbR995Aβ3CHO细胞能结合PAC 1,且Fb明显增加。结论 :αⅡbR995A 突变能诱导血小板内到外信号传导 ,使αⅡbR995Aβ3表现为激活型受体 ;而GT患者却因整合素αⅡbβ3缺陷使αⅡbβ3介导的血小板由内到外信号传导受阻 ,使该GT患者表现出血小板聚集异常。 展开更多

关键词 整合素αⅡbβ3 血小板无力症 信号传递 实验研究 抗血小板治疗

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绿色荧光蛋白(GFP)融合于人整合蛋白α_(Ⅱb)C端不影响α_(Ⅱb) β_3复合物在CHO细胞正常表达 被引量：1

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作者 付斌 傅敢 +3 位作者 陈方平 刘巍 黄细莲 肖广芬 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期182-187,共6页

本研究选择αⅡb作为靶蛋白观察绿色荧光蛋白(GFP)标记对αⅡbβ,复合物生物合成过程和表达的影响。 从人αⅡb表达载体p3.1-2b中经PCR扩增的αⅡb基因全长cDNA,插入表达载体pEGFP-N1中构建αⅡbGFP融合蛋 白表达载体,测序正确后利用脂... 本研究选择αⅡb作为靶蛋白观察绿色荧光蛋白(GFP)标记对αⅡbβ,复合物生物合成过程和表达的影响。 从人αⅡb表达载体p3.1-2b中经PCR扩增的αⅡb基因全长cDNA,插入表达载体pEGFP-N1中构建αⅡbGFP融合蛋 白表达载体,测序正确后利用脂质体将重组质粒与表达人整合蛋白β3亚基的真核表达质粒p3.1-3a共转染CHO 细胞,对转染后细胞用Western blot方法鉴定αⅡbGFP基因在CHO细胞中的表达并用激光共聚焦显微镜确定融合 蛋白的细胞内定位。结果表明:经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒, Western blot证明转基因CHO细胞有人αⅡbGFP基因的表达,融合蛋白细胞内定位研究显示αⅡbGFP可以由内质网 转运至高尔基体。结论:成功构建了人αⅡbGFP融合蛋白真核表达载体;GFP融合于αⅡbC端不影响αⅡbβ3复合物 在CHO细胞的正常表达。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 整合蛋白αⅡb αⅡbβ3复合物 CHO细胞 血小板无力症

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rAAV2-GPⅡb/GPⅢa载体构建和体外表达、功能实验 被引量：2

15

作者 王凯 彭建强 +1 位作者 陈方平 吴小兵 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期369-374,共6页

为了研究rAAV载体介导的血小板无力症基因治疗的可行性,构建了由CMV启动子调控的rAAV2-Ⅱb、rAAV2-Ⅲa病毒载体,并采用多种方法验证了rAAV2-Ⅱb和rAAV2-Ⅲa病毒载体在真核细胞中的表达能力,其中包括用RT-RCR方法检测BHK-21细胞感染24小... 为了研究rAAV载体介导的血小板无力症基因治疗的可行性,构建了由CMV启动子调控的rAAV2-Ⅱb、rAAV2-Ⅲa病毒载体,并采用多种方法验证了rAAV2-Ⅱb和rAAV2-Ⅲa病毒载体在真核细胞中的表达能力,其中包括用RT-RCR方法检测BHK-21细胞感染24小时(MOI=1×105v.g/cell)后目的基因在mRNA水平的表达,用流式细胞术的方法检测不同MOI和目的基因表达之间的量效关系,采用Westernblot的方法检测BHK-21细胞感染48小时后(MOI=1×105v.g/cell)目的基因在蛋白水平的表达,用免疫荧光法检测BHK-21细胞感染48小时后(MOI=105v.g/cell)目的基因在细胞表面的表达,以及应用PAC-I结合试验验证所表达的GPⅡb/Ⅲa蛋白功能。结果表明,在MOI=1×105v.g/cell条件下,在BHK-21细胞感染24小时后即可在mRNA水平上检测到目的基因的表达,在48小时可在蛋白水平检测到目的基因的表达;在一定剂量范围内目的基因的表达量随着MOI的增加而增加,但MOI过高反而使表达量下降,目的基因表达产物活化之后能与PAC-I结合,并具有正常的生物学活性。结论:rAAV2载体能有效地介导GPⅡb、GPⅢa基因在真核细胞内表达,所表达的产物都具有正常的生物学活性,此结果为rAAV2载体在血小板无力症基因治疗中的应用打下了基础。 展开更多

关键词 腺相关病毒载体 血小板无力症 血小板膜糖蛋白GPⅡb/GPⅢa

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