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抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B单克隆抗体的制备及其特性鉴定
被引量：
2
1
作者
陈琦
曹慧
+3 位作者
张海燕
高哓飞
王芬
李厚达
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期556-558,共3页
目的： 制备抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B（GPA/GPB）的单克隆抗体（mAb）, 并进行特性鉴定.方法： 用人“O”型血红细胞作为免疫源, 免疫BALB/c小鼠.采用淋巴细胞杂交瘤技术制备mAb, 用谱红细胞筛选阳性克隆; 采用直接、间接血凝试验...
目的： 制备抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B（GPA/GPB）的单克隆抗体（mAb）, 并进行特性鉴定.方法： 用人“O”型血红细胞作为免疫源, 免疫BALB/c小鼠.采用淋巴细胞杂交瘤技术制备mAb, 用谱红细胞筛选阳性克隆; 采用直接、间接血凝试验检测杂交瘤细胞培养上清及腹水中mAb的效价.分别用快速定性试纸和酶处理红细胞检测mAb的Ig亚类及抗原表位.用Western blot鉴定抗GPA/GPB mAb的特异性.结果： 获得4株分泌抗M、1株抗N及3株抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株.杂交瘤细胞培养上清mAb的效价介于1×2^-4 ～1×2^-8之间, 腹水mAb的效价在1×2^-7 ～1×2^-12之间.除1株mAb 1C1C9C4为IgM外, 其他7株mAb均为IgG.通过杂交瘤细胞培养上清与谱红细胞的反应格局, 结合mAb抗原表位的检测, 确定4株和1株mAb可分别特异性结合于GPA的M、N抗原表位; 另3株mAb 6D7C9、7C9H4和7C9G11 与“O”型血红细胞膜的Western blot结果显示, 均可结合GPA、GPB蛋白.结论： 成功地建立了4株分泌抗M、1株分泌抗N及3株分泌抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株, 可用于MNSs血型系统的研究及鉴定, 并为制备双功能抗体用于病毒、肿瘤疾病的诊断和治疗打下了坚实的基础.
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关键词
MN
血型
系统
血型
糖蛋白
A
血型糖蛋白b
谱红细胞
单克隆抗体
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职称材料
一种鉴定MNSs红细胞血型单克隆抗体类型的方法的建立
2
作者
陈琦
曹慧
+2 位作者
张海燕
高晓飞
李厚达
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期419-422,共4页
为鉴定MNSs血型单克隆细胞株6D7C9分泌的抗体类型,通过克隆、亚克隆、细胞转染等分子生物学技术建立了血型糖蛋白GPA、GPB的异源表达系统,并将其作为抗原,通过ELISA、Western印迹法确定6D7C9分泌的McAb.结果显示,RT-PCR技术成功克隆获得...
为鉴定MNSs血型单克隆细胞株6D7C9分泌的抗体类型,通过克隆、亚克隆、细胞转染等分子生物学技术建立了血型糖蛋白GPA、GPB的异源表达系统,并将其作为抗原,通过ELISA、Western印迹法确定6D7C9分泌的McAb.结果显示,RT-PCR技术成功克隆获得了GPA、GPB血型糖蛋白编码基因,通过分别构建其重组逆转录病毒表达载体pEGZ/GPA及pEGZ/GPB,转染包装细胞293T,再感染L929细胞,经zeocin筛选2周后,RT-PCR及流式细胞仪分析证实,L929/GPA和L929/GPB转基因细胞中分别有GPA、GPB目的基因的转录和蛋白表达.用稳定高表达GPA、GPB的转基因细胞通过ELISA和Western印迹法证实单克隆细胞株6D7C9分泌的是抗GPA/GPBMcAb.本研究成功地建立了血型糖蛋白GPA、GPB的异源表达系统,为MNSs血型McAb的检测及GPA、GPB蛋白的功能学研究奠定了基础.
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关键词
血型
糖蛋白
A
血型糖蛋白b
单克隆抗体
基因表达
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职称材料
题名
抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B单克隆抗体的制备及其特性鉴定
被引量：
2
1
作者
陈琦
曹慧
张海燕
高哓飞
王芬
李厚达
机构
扬州大学医学院生理学教研室
扬州大学实验动物中心
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期556-558,共3页
基金
国家科技部中小企业技术创新基金项目(04C26223200112)
文摘
目的： 制备抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B（GPA/GPB）的单克隆抗体（mAb）, 并进行特性鉴定.方法： 用人“O”型血红细胞作为免疫源, 免疫BALB/c小鼠.采用淋巴细胞杂交瘤技术制备mAb, 用谱红细胞筛选阳性克隆; 采用直接、间接血凝试验检测杂交瘤细胞培养上清及腹水中mAb的效价.分别用快速定性试纸和酶处理红细胞检测mAb的Ig亚类及抗原表位.用Western blot鉴定抗GPA/GPB mAb的特异性.结果： 获得4株分泌抗M、1株抗N及3株抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株.杂交瘤细胞培养上清mAb的效价介于1×2^-4 ～1×2^-8之间, 腹水mAb的效价在1×2^-7 ～1×2^-12之间.除1株mAb 1C1C9C4为IgM外, 其他7株mAb均为IgG.通过杂交瘤细胞培养上清与谱红细胞的反应格局, 结合mAb抗原表位的检测, 确定4株和1株mAb可分别特异性结合于GPA的M、N抗原表位; 另3株mAb 6D7C9、7C9H4和7C9G11 与“O”型血红细胞膜的Western blot结果显示, 均可结合GPA、GPB蛋白.结论： 成功地建立了4株分泌抗M、1株分泌抗N及3株分泌抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株, 可用于MNSs血型系统的研究及鉴定, 并为制备双功能抗体用于病毒、肿瘤疾病的诊断和治疗打下了坚实的基础.
关键词
MN
血型
系统
血型
糖蛋白
A
血型糖蛋白b
谱红细胞
单克隆抗体
Keywords
MN
b
lood group
glycophorin A
glycophorin
b
panel erythrocyte
mA
b
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
一种鉴定MNSs红细胞血型单克隆抗体类型的方法的建立
2
作者
陈琦
曹慧
张海燕
高晓飞
李厚达
机构
扬州大学医学院生理学教研室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期419-422,共4页
文摘
为鉴定MNSs血型单克隆细胞株6D7C9分泌的抗体类型,通过克隆、亚克隆、细胞转染等分子生物学技术建立了血型糖蛋白GPA、GPB的异源表达系统,并将其作为抗原,通过ELISA、Western印迹法确定6D7C9分泌的McAb.结果显示,RT-PCR技术成功克隆获得了GPA、GPB血型糖蛋白编码基因,通过分别构建其重组逆转录病毒表达载体pEGZ/GPA及pEGZ/GPB,转染包装细胞293T,再感染L929细胞,经zeocin筛选2周后,RT-PCR及流式细胞仪分析证实,L929/GPA和L929/GPB转基因细胞中分别有GPA、GPB目的基因的转录和蛋白表达.用稳定高表达GPA、GPB的转基因细胞通过ELISA和Western印迹法证实单克隆细胞株6D7C9分泌的是抗GPA/GPBMcAb.本研究成功地建立了血型糖蛋白GPA、GPB的异源表达系统,为MNSs血型McAb的检测及GPA、GPB蛋白的功能学研究奠定了基础.
关键词
血型
糖蛋白
A
血型糖蛋白b
单克隆抗体
基因表达
Keywords
glycophorin A
glycophorin
b
monoclonal anti
b
ody
gene expression
分类号
Q987.2 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B单克隆抗体的制备及其特性鉴定
陈琦
曹慧
张海燕
高哓飞
王芬
李厚达
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
一种鉴定MNSs红细胞血型单克隆抗体类型的方法的建立
陈琦
曹慧
张海燕
高晓飞
李厚达
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
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