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从噬菌体随机十二肽库中筛选新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶模拟表位 被引量：3
1
作者 孙林 焦新安 +4 位作者 刘文博 潘志明 黄金林 彭大新 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期428-431,共4页
以生物素标记的抗新城疫病毒(NDV)血凝素＿神经氨酸酶(HN)的单抗M22为分子探针,从噬菌体随机12肽库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位。经过三轮亲和筛选,得到了四个能与单抗M22反应的阳性噬菌体单克隆,分别为CLONE11、17、18、20... 以生物素标记的抗新城疫病毒(NDV)血凝素＿神经氨酸酶(HN)的单抗M22为分子探针,从噬菌体随机12肽库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位。经过三轮亲和筛选,得到了四个能与单抗M22反应的阳性噬菌体单克隆,分别为CLONE11、17、18、20。竞争ELISA试验表明,CLONE20与M22的结合能被新城疫弱毒株LaSota特异性抑制,抑制率达67 3%。经测序,获得CLONE20的插入序列为SWFHHHQARAPM,同源性分析认为WF和QAR在HN的抗原性中起重要作用。动物试验结果表明,CLONE20能诱导SPF鸡产生一定水平的具有血凝抑制活性的特异抗体。以上结果显示SWFHHHQARAPM是具有免疫原性的HN抗原模拟表位。 展开更多
关键词 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶 单克隆抗体 亲和筛选 模拟表位
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鸭新城疫病毒河北分离株血凝素-神经氨酸酶蛋白基因序列分析
2
作者 陈立功 张芳 +5 位作者 董兵 翟文栋 刘聚祥 李妹玲 李玲 任玉红 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期81-85,118,共6页
为研究新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）的遗传变异特性,对NDV HB/1/05/Dk株的血凝素-神经氨酸酶（haemagglutinin-neuraminidase protein,HN）蛋白基因进行了扩增、测序和遗传进化分析。结果表明：该病毒的HN基因长2 002bp,... 为研究新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）的遗传变异特性,对NDV HB/1/05/Dk株的血凝素-神经氨酸酶（haemagglutinin-neuraminidase protein,HN）蛋白基因进行了扩增、测序和遗传进化分析。结果表明：该病毒的HN基因长2 002bp,含有1个长为1 716bp的完整开放阅读框架（Open reading frame,ORF）,编码571个氨基酸,符合强毒株的特征。同源性分析表明,该毒株的HN基因与35株参考毒株间的核苷酸和氨基酸的同源性分别为71.8%-99.1%和83.4%-98.9%。遗传进化分析表明,该毒株与基因VIId亚型参考毒株关系较近,属同一分支,与疫苗株B1、LaSota、Mukteswar株和I类毒株关系较远。因此,须加强河北省水禽NDV的监测。 展开更多
关键词 新城疫病毒 鸭 血凝素-神经氨酸酶蛋白 序列分析
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中国大陆H7N9禽流感病毒流行病学特征及血凝素和神经氨酸酶的分子进化 被引量：15
3
作者 李鹏媛 徐浩 +4 位作者 顾豪高 马蒙蒙 陆家海 郝元涛 张定梅 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期932-940,共9页
【目的】对中国大陆人感染H7N9禽流感的流行病学特征进行描述分析，并对不同地区、不同时间、不同宿主来源的H7N9禽流感血凝素及神经氨酸酶基因进行分子进化分析，为H7N9禽流感的科学防控提供依据。【方法】汇总各公开网站发布的人感染H... 【目的】对中国大陆人感染H7N9禽流感的流行病学特征进行描述分析，并对不同地区、不同时间、不同宿主来源的H7N9禽流感血凝素及神经氨酸酶基因进行分子进化分析，为H7N9禽流感的科学防控提供依据。【方法】汇总各公开网站发布的人感染H7N9禽流感病例信息，分析人感染H7N9禽流感的流行病学特点；从Genbank筛选H7N9禽流感毒株的核酸序列及氨基酸序列。利用MEGE5．0、Bioedit等软件构建进化树，分析核苷酸及所编码蛋白关键位点的变异情况。【结果】全国共报告451例人感染H7N9禽流感病例，病死率为19．96％，男女性别比约为2．25：1；60岁以上（含60岁）病例占全部病例的45．76％；浙江，广东，江苏，上海四省市报告病例较多；2013年4月前后和2014年1月至2月为两个发病高峰。进化树显示H7N9禽流感毒株分为美洲来源支和欧亚来源支，分离的时间地点越接近进化关系越近。自韩国2011年野鸟中分离的H7N9毒株的NA基因与中国2013年及2014年分离的H7N9毒株NA基因进化关系较近。广东第一例人H7N9禽流感的NA基因与2013年5月分离自山东环境中的H7N9禽流感的NA基因及2013年4月来自浙江人感染H7N9禽流感的NA基因的同源性较高。所有人感染H7N9毒株NA茎区69～73位缺失了QISNT序列。【结论】老人及男性是感染H7N9禽流感的高危人群，冬春季是疫情高发期。病例集中分布于东南沿海地区。分子进化分析表明H7N9禽流感毒株有时间和空间的聚集性。时间空间距离越短则进化关系越接近。广东地区H7N9禽流感病毒可能是北方的候鸟迁徙所致，中国H7N9毒株NA片段可能来自韩国禽类携带的毒株。人感染H7N9禽流感病毒的毒力及耐药性尚未发生变异。NA茎区69—73位缺失QISNT序列可能与该病毒具有感染人类的能力有关。 展开更多
关键词 禽流感 H7N9 进化 血凝素 神经氨酸酶
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2017年江苏省H3N2流感病毒血凝素与神经氨酸酶分子特征及耐药性分析 被引量：11
4
作者 王慎骄 祁贤 +5 位作者 邓斐 彭杰夫 余慧燕 秦圆方 戴启刚 鲍倡俊 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第12期1254-1258,共5页
目的流行性感冒(简称流感)耐药性监测目前已成为流感防控中的一项重要组成部分。文中旨在分析江苏省2017年H3N2亚型流感病毒基因变异及耐药性情况。方法从江苏省13个流感监测点流感毒株中选取17株H3N2亚型毒株,其中12株为2017年夏季高... 目的流行性感冒(简称流感)耐药性监测目前已成为流感防控中的一项重要组成部分。文中旨在分析江苏省2017年H3N2亚型流感病毒基因变异及耐药性情况。方法从江苏省13个流感监测点流感毒株中选取17株H3N2亚型毒株,其中12株为2017年夏季高峰期分离株,4株为非高峰期分离株,1株为2016年度分离株(作为1株参考株)。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对H3N2亚型流感毒株进行序列测定,从全球共享流感序列网站GISAID下载构建甲型H3N2亚型流感毒株HA(血凝素)系统进化树的骨架参考序列,使用MAGE7.0软件进行序列比对和系统进化分析。通过神经氨酸酶(NA)抑制试验,分析病毒耐药情况。结果16株病毒HA和NA基因核苷酸相似性分别为98.9%~99.6%、99.2%~99.3%,同源性较高。HA进化树分析显示,16株分离株中15株位于3C.2a分支,13株病毒3个C3.2a1分支关键位点(N171K、I406V和G484E)未发生变化,另外3株毒株关键位点发生变异,1株毒株发生该标志性氨基酸变异,1株毒株发生(N121K、T135K)的免疫相关突变。与2017-2018年度疫苗株推荐株A/HongKong/4801/2014相比,16株分离株抗原位点突变包括:A138S 1株,R142K 2株,R142K、R261Q 9株,R142KS144R、R261Q 1株,R142K、S144K、R261Q 1株。16株病毒的NA片段分析未发现NA耐药位点。基因型和表型分析表明,16株H3N2亚型流感毒株对抗流感药物奥司他韦及扎那米韦均敏感,均发现与M2基因耐药有关A30T、S31N分子位点的改变。结论2017年江苏H3N2亚型流行株HA和NA基因表现出异质性特点及发生基因重配现象,随着H3N2流感病毒变异持续发生,应密切监测病毒遗传进化和耐药基因的变化情况。 展开更多
关键词 流感病毒 H3N2亚型 血凝素 神经氨酸酶 基因特性 耐药性分析
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江苏省2013年甲型H1N1(09pdm)流感病毒血凝素和神经氨酸酶分子特征分析 被引量：14
5
作者 资海荣 郭艳 +5 位作者 邓斐 余慧燕 王慎骄 汤奋扬 祁贤 卫平民 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期812-822,共11页
目的 ：分析江苏省2013年甲型H1N1（09pdm）流感病毒血凝素（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）变异情况,分析其遗传进化特征。方法 ：按照流感样病例定义,收集江苏省各哨点医院流感样病例标本,阳性样本经病毒分离培... 目的 ：分析江苏省2013年甲型H1N1（09pdm）流感病毒血凝素（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）变异情况,分析其遗传进化特征。方法 ：按照流感样病例定义,收集江苏省各哨点医院流感样病例标本,阳性样本经病毒分离培养及亚型鉴定。选取2013年不同时间段、不同地区具有代表性的14株甲型H1N1（09pdm）阳性毒株,利用特异性引物扩增HA、NA基因,测序并分析其遗传进化特征。结果 ：14株分离毒株与疫苗株A/California/07/2009（H1N1）的HA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为97.6%~98.4%和96.5%~98.0%。NA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为98.4%~98.9%和97.0%~98.5%。遗传进化分析表明,14株分离株HA和NA基因分属于不同的进化谱系。分子特征表现为HA氨基酸序列出现D114N、K300E、E516K的变异,NA分子特征表现为N44S位点变异。从2013年左右开始甲型H1N1（09pdm）流感基因多样性增加;通过FEL模型得到一个正向压力选择HA氨基酸位点310,一个正向压力选择NA氨基酸位点4,通过REL模型得到9个正向压力选择HA氨基酸位点179、180、239、301、303、310、311、312、313（含位点310）,5个正向压力选择NA氨基酸位点4、23、52、287、374（含位点4）。HA蛋白具有9个潜在糖基化位点,7个位于HA1上,2个位于HA2上;NA蛋白共有9个潜在糖基化位点。14株分离毒株在NA蛋白酶活性中心及周围辅助位点上均未发现变异。结论：2013年江苏省甲型H1N1（09pdm）流感HA、NA基因变异加快,遗传多样性增加,未来的遗传进化值得进一步关注。 展开更多
关键词 甲型H1N1(09pdm) 血凝素 神经氨酸酶 分子特征
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表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建 被引量：7
6
作者 乔传玲 乔传玲 +8 位作者 于康震 于康震 贾永清 刘明 刘明 孟庆文 孟庆文 田国彬 唐秀英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期178-,共1页
血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ... 血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ鸡胚尿囊毒ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ扩增完整的ＮＡ ｃＤＮＡ基因，将其克隆到载体ｐＳＹ５３８中的禽痘病毒早晚期启动子 ＬＰ２ＥＰ２的下游，然后再将含有启动子的 ＮＡ基因片段亚克隆到已有的ＡＩＶＨＡ基因重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＬａｃＺ）中，构建了ＨＡ、ＮＡ双重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＮＡ＋ＬａｃＺ），将它与禽痘病毒疫苗株Ｓ－ＦＰＶ－０１７共转染鸡胚成纤维细胞，在Ｘ－ｇａｌ存在的条件下，经蓝斑筛选、六选蚀斑纯化、ＰＣＲ鉴定等，结果表明已获得一株能同时稳定表达ＨＡ和ＮＡ蛋白的重组禽痘病毒，为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 神经氨酸酶基因 重组禽痘病毒
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黄连-厚朴药对9个配伍比例对抑制神经氨酸酶活性的影响 被引量：7
7
作者 陈高 吴巧凤 +1 位作者 张小霞 严云良 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1394-1397,共4页
目的探索黄连-厚朴药对9个配伍比例(0∶1、1∶5、2∶5、2∶3、1∶1、3∶2、5∶2、5∶1、1∶0)对抑制神经氨酸酶活性的影响。方法底物荧光检测法测定不同配伍比例药对对神经氨酸酶的抑制活性,非线性回归法确定量效曲线参数,建立三维响应... 目的探索黄连-厚朴药对9个配伍比例(0∶1、1∶5、2∶5、2∶3、1∶1、3∶2、5∶2、5∶1、1∶0)对抑制神经氨酸酶活性的影响。方法底物荧光检测法测定不同配伍比例药对对神经氨酸酶的抑制活性,非线性回归法确定量效曲线参数,建立三维响应曲面模型,响应面法分析配伍比例与抑制作用的关系。结果各配伍比例药对对神经氨酸酶均有抑制活性,在1∶1时作用最强。配伍比例在0.55∶1~1.11∶1时,药对表现出明显的协同作用(作用强度-0.800),而其他配伍比例下协同作用较弱,或产生相加甚至拮抗作用。结论该方法可为黄连-厚朴药对治疗流感时配伍比例的选择提供依据。 展开更多
关键词 黄连-厚朴药对 配伍比例 神经氨酸酶 抑制作用 响应面法
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河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因特征分析 被引量：6
8
作者 僧明华 杨凯朝 +2 位作者 王文慧 赵升 徐瑾 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2021年第6期859-865,共7页
目的:分析河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的分子进化特征,为流感防控提供科学依据。方法:对河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒核酸检测阳性的流感样病例(ILI)咽拭子标本进行病毒分离,对分离到的22... 目的:分析河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的分子进化特征,为流感防控提供科学依据。方法:对河南省2019~2020年H3N2亚型流感病毒核酸检测阳性的流感样病例(ILI)咽拭子标本进行病毒分离,对分离到的22株H3N2型流感病毒株进行HA和NA基因测序,使用生物信息学软件分析其分子特征。结果:河南省H3N2亚型流感病毒分离株的HA基因和NA基因与当年度推荐疫苗株的核苷酸同源性分别为96.6%~96.8%、98.1%~98.6%。HA和NA进化树分析显示,22株分离株属于3C.2a1b分支,虽与当年推荐疫苗株同属于3C.2a分支,但差异较大。HA基因共发生32处氨基酸突变,涉及A、B、E共3个抗原决定簇的4个氨基酸位点变异和2个病毒特异性识别受体结合位点变异。NA基因共发生21处氨基酸突变,其中共同突变8处,未发现耐药位点突变。潜在N-糖基化位点预测结果显示,HA基因在142NWT、149NGT、174NYT位点存在缺失或增加,NA基因在329NDS位点存在缺失。结论:2019~2020年河南省H3N2亚型流感病毒株的HA基因和NA基因与当年推荐的疫苗株存在较大差异,出现了抗原漂移。 展开更多
关键词 H3N2亚型流感 血凝素 神经氨酸酶 河南省
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猪流感病毒H1N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量：3
9
作者 张烨 于在江 +5 位作者 唐启慧 陈禹保 辛丽 陈永坤 陈清轩 舒跃龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期162-167,共6页
克隆、表达和鉴定猪流感病毒H1N1 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆猪流感病毒H1N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重... 克隆、表达和鉴定猪流感病毒H1N1 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆猪流感病毒H1N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短),pET32a(+)/NA(截短),pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/Rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果显示,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western blotting试验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。本研究成功克隆和表达了猪流感病毒H1N1 HA、NA基因序列,为猪流感病毒H1N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流感病毒H1N1 血凝素 神经氨酸酶 克隆表达
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流感病毒H3N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量：1
10
作者 张烨 于在江 +5 位作者 黄捷勤 唐启慧 陈禹保 辛丽 陈永坤 舒跃龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期213-218,共6页
克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表... 克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短),pET32a(+)/NA(截短),pGEX4T-1/HA,转化大肠杆菌BL21/Rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果显示,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western blotting试验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。成功克隆和表达了流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,可为流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供参考。 展开更多
关键词 流感病毒H3N2 血凝素 神经氨酸酶 克隆表达
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中国鸭源H5N6 AIV血凝素和神经氨酸酶基因特征及遗传进化分析 被引量：1
11
作者 陈翠腾 万春和 +6 位作者 陈珍 朱春华 傅光华 施少华 蔡国漳 刘斌琼 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2020年第1期21-27,共7页
为明确中国鸭源H5N6 AIV的HA和NA基因特征及其遗传变异情况,研究选取了NCBI流感病毒资源库里的32株具有完整ORF编码区的中国鸭源H5N6 AIV的HA和NA基因序列,利用分子生物学软件分析其HA和NA基因特征及其遗传进化情况。结果显示,中国鸭源H... 为明确中国鸭源H5N6 AIV的HA和NA基因特征及其遗传变异情况,研究选取了NCBI流感病毒资源库里的32株具有完整ORF编码区的中国鸭源H5N6 AIV的HA和NA基因序列,利用分子生物学软件分析其HA和NA基因特征及其遗传进化情况。结果显示,中国鸭源H5N6 AIV的HA裂解位点有REKRRKR↓G、RERRRKR↓G和KEKRRKR↓G三种类型,HA有6个潜在的N-糖基化位点,其中第182、222、224位氨基酸依次为N、Q、G,具有与禽源唾液酸α-2,3受体结合的特性,然而HA发生了S123P/T、T156A、S223R氨基酸位点突变,部分毒株发生了I151T氨基酸位点突变;HA基因核苷酸遗传进化分析显示,中国鸭源H5N6 AIV遗传进化上均处于clade2.3.4.4分支,并进一步进化出Ⅰ和Ⅱ两个亚分支。部分中国鸭源H5N6 AIV NA第59~69位缺失11个氨基酸,中国鸭源H5N6 AIV NA基因遗传进化上分为两个大的分支,分别对应NA基因颈部缺失型和完整型两种类型;NA颈部完整型的NA有6个潜在的N-糖基化位点,NA颈部缺失型的NA由于第59~69位氨基酸的缺失,导致其第67位丢失了一个N-糖基化位点。研究为中国鸭源H5N6 AIV的生物学特性和遗传进化特征研究奠定基础。 展开更多
关键词 鸭 H5N6亚型禽流感病毒 血凝素 神经氨酸酶 基因特征 遗传进化
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6-羟多巴损伤黑质导致迷走神经背核乙酰胆碱转移酶和酪氨酸羟化酶表达变化 被引量：2
12
作者 连辉 蔡青青 王志勇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第17期1754-1757,共4页
目的观察6-羟多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)损伤大鼠黑质后迷走神经背核(dorsal motor nucleus ofthe vagus,10N)中乙酰胆碱转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)含量的变化。方法 16只SD... 目的观察6-羟多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)损伤大鼠黑质后迷走神经背核(dorsal motor nucleus ofthe vagus,10N)中乙酰胆碱转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)含量的变化。方法 16只SD大鼠根据随机数字表分为6-OHDA大鼠组和对照组。6-OHDA大鼠组双侧黑质(substantia nigra,SN)内注射6-OHDA,对照组双侧SN内注射等体积的生理盐水。6周后断头取脑,Nissl染色观察SN和10N中的Nissl小体,免疫荧光和免疫印迹检测SN内TH和10N内ChAT与TH的表达。结果与对照组比较,6-OHDA大鼠组SN内TH阳性细胞数量从(54±5)个减少至(13±2)个(P<0.05),蛋白表达水平从0.62±0.13降低至0.34±0.11(P<0.05),10N中ChAT阳性细胞数量从(37±3)个减少到(26±5)个(P<0.05),TH阳性细胞数量从(6±3)个增加到(13±2)个(P<0.05),背侧延髓内ChAT的蛋白表达水平从0.07±0.02下降至0.05±0.02(P<0.05),TH蛋白表达水平从0.08±0.05增高到0.13±0.04(P<0.05)。结论 6-OHDA大鼠10N中ChAT和TH表达变化可能与帕金森病患者的胃排空障碍存在一定的联系。 展开更多
关键词 6-羟多巴 迷走神经背核 乙酰胆碱转移酶 酪氨酸羟化酶
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A型流感病毒血凝素、神经氨酸酶DNA疫苗研究 被引量：5
13
作者 陈则 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期1-4,11,共5页
用BALB/C小鼠为模型,检测A型流感病毒血凝素、神经氨酸酶、基质蛋白DNA疫苗抗流感能力。研究表明:血凝素、神经氨酸酶DNA疫苗能提供有效的抗流感保护;血凝素、神经氨酸酶和基质蛋白联合免疫动物提供最佳免疫保护。
关键词 DNA疫苗 流感病毒 血凝素 神经氨酸酶
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硫酸酯化酵母β-葡聚糖抗H1N1猪流感病毒作用及对神经氨酸酶活性的影响 被引量：1
14
作者 孙英峰 韩伟 +4 位作者 杨春蕾 李秀丽 张莉 冯婧 任卫科 《中兽医医药杂志》 2015年第2期7-9,共3页
研究硫酸酯化酵母β-葡聚糖对H1N1猪流感病毒的体外抑制作用及对神经氨酸酶活性的影响。采用细胞感染模型,应用MTT法检测药物对MDCK细胞的半数毒性浓度(TC50)、半数抑制浓度(IC50)及治疗指数(TI),并结合神经氨酸酶抑制试验检测药物对其... 研究硫酸酯化酵母β-葡聚糖对H1N1猪流感病毒的体外抑制作用及对神经氨酸酶活性的影响。采用细胞感染模型,应用MTT法检测药物对MDCK细胞的半数毒性浓度(TC50)、半数抑制浓度(IC50)及治疗指数(TI),并结合神经氨酸酶抑制试验检测药物对其活性的影响。结果表明,硫酸酯化酵母β-葡聚糖对MDCK细胞最大无毒浓度为5.34 mg/m L,其半数抑制浓度(IC50)为0.58 mg/m L,治疗指数(TI)为18.0;当药物浓度≥1.25 mg/m L时,能明显降低H1N1猪流感病毒神经氨酸酶的活性。提示硫酸酯化酵母β-葡聚糖有确定的体外抑制H1N1猪流感病毒的作用,并能影响病毒神经氨酸酶的活性。 展开更多
关键词 硫酸酯化酵母β-葡聚糖 H1N1猪流感 体外 抑制作用 神经氨酸酶
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N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因的克隆与表达
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作者 杨蕴刘 饶娆 +1 位作者 沈健 冯磊 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期57-63,共7页
目的:为了获得N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因表达的两重组菌。方法:以大肠杆菌C600染色体DNA为模板,通过引物设计和PCR扩增,克隆获得编码Neu5Ac醛缩酶基因(nanA)的片段;以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化E.coliBL21(DE3),然后将nan... 目的:为了获得N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因表达的两重组菌。方法:以大肠杆菌C600染色体DNA为模板,通过引物设计和PCR扩增,克隆获得编码Neu5Ac醛缩酶基因(nanA)的片段;以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化E.coliBL21(DE3),然后将nanA基因片段组入到pDR540载体的Ptac启动子下游,所得重组菌E.coliDH5α/pRY3的nanA基因在tac启动子控制下呈组成型表达。结果:DNA序列测定证明,该基因的开放阅读框(open read ing frame,ORF)大小为894 bp,编码298个氨基酸组成的酶蛋白;SDS-PAGE显示,纯化的目的蛋白为33 kD的单一条带。以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化E.coliBL21(DE3),在得到的转化子E.coliBL21(DE3)/pRY1中,nanA基因受lac启动子控制,无需IPTG或乳糖所诱导。在N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶固定化酶的催化下合成N-乙酰-D-神经氨酸的合成效率为78.3%,结晶回收率为90.2%,总回收率为70.6%。全波长扫描分析表明:本实验室结晶品与Sigma公司商品的全波长扫描图谱有相同的特征。结论:所构建的诱导型产酶菌株E.coliBL21(DE3)/pRY1和组成型表达菌株E.coliDH5α/pRY3都可较多量的产酶。合成的结晶品具有N-乙酰-D-神经氨酸的特征。 展开更多
关键词 N-乙酰神经氨酸/遗传学 果糖-二磷酸醛缩酶 大肠杆菌/遗传学 聚合酶链反应 克隆 分子 重组 遗传 转染 遗传载体 基因表达 重组蛋白质类
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A型流感病毒神经氨酸酶蛋白功能研究进展 被引量：5
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作者 郑沁玫 顾敏 刘秀梵 《动物医学进展》 北大核心 2021年第10期66-70,共5页
A型流感病毒(IAV)的宿主谱广泛,对人类健康和畜禽养殖均构成严重威胁。神经氨酸酶(neuraminidase,NA)作为IAV囊膜表面主要的糖蛋白之一,在病毒的感染过程中至关重要,是常用的抗病毒药物作用靶点。以往关于NA蛋白的研究主要聚焦于其通过... A型流感病毒(IAV)的宿主谱广泛,对人类健康和畜禽养殖均构成严重威胁。神经氨酸酶(neuraminidase,NA)作为IAV囊膜表面主要的糖蛋白之一,在病毒的感染过程中至关重要,是常用的抗病毒药物作用靶点。以往关于NA蛋白的研究主要聚焦于其通过切割宿主细胞表面唾液酸与血凝素(hemagglutinin,HA)之间的α-2,6或α-2,3糖苷键以促进新生病毒粒子释放的功能方面,而近来不断有证据表明,神经氨酸酶蛋白在受体结合和宿主适应性方面同样发挥关键作用。论文综述了神经氨酸酶蛋白的结构特征,并对神经氨酸酶蛋白的酶催化活性、受体结合功能以及与HA蛋白的功能平衡方面进行了总结,以期为深入理解IAV感染的分子机制提供参考。 展开更多
关键词 A型流感病毒 神经氨酸酶 受体结合 唾液酸 血凝素-神经氨酸酶平衡
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血凝素和神经氨酸酶与禽流感入侵机制
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作者 曲虹 王思睿 王晓龙 《防护林科技》 2016年第9期100-101,共2页
病毒的毒性是由其对宿主细胞、宿主动物或对种群产生不利影响的能力决定的。人类21世纪四次严重的呼吸系统疾病大流行都是甲型流感病毒引起。而禽类作为禽流感病毒的自然宿主和主要病毒携带者,形成了庞大而复杂的毒株储存库,可以不断产... 病毒的毒性是由其对宿主细胞、宿主动物或对种群产生不利影响的能力决定的。人类21世纪四次严重的呼吸系统疾病大流行都是甲型流感病毒引起。而禽类作为禽流感病毒的自然宿主和主要病毒携带者,形成了庞大而复杂的毒株储存库,可以不断产生新的或潜在的流行毒株。血凝素介导与细胞表面受体结合及膜融合,在流感病毒感染宿主细胞过程中是不可或缺的步骤。血凝素与唾液酸受体结合成为甲型流感病毒入侵和跨物种传播的首要条件。神经氨酸酶也存在于病毒的囊膜表面,具有水解唾液酸受体、释放病毒感染其他宿主细胞的作用。了解禽流感入侵及其在鸟类和哺乳动物之间的传播机制,有利于早期识别,为提供防控新手段提供可能。 展开更多
关键词 禽流感 血凝素糖蛋白 神经氨酸酶糖蛋白 受体结合特性 传播机制
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氯胺酮对谷氨酸诱导的神经元样PC12细胞c-fos mRNA表达的影响 被引量：3
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作者 胡倩 王莉 江伟 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期159-162,共4页
目的 研究N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂氯胺酮对谷氨酸所致神经元样PC12细胞株损伤c—fos基因表达的影响，从基因水平探讨氯胺酮的神经保护作用及其机制。方法 将分化好的神经元样PC12细胞株（2×10^6／孔）接种在6孔板中孵育18h，... 目的 研究N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂氯胺酮对谷氨酸所致神经元样PC12细胞株损伤c—fos基因表达的影响，从基因水平探讨氯胺酮的神经保护作用及其机制。方法 将分化好的神经元样PC12细胞株（2×10^6／孔）接种在6孔板中孵育18h，随机分成对照组（C组）、10mmol／L谷氨酸损伤组（G组）、0．1mmol／L氯胺酮处理组（K1组）、0．5mmol／L氯胺酮处理组（K2组）和1．0mmol／L氯胺酮处理组（K3组）。K1～K3组均含有终浓度为10mmol／L的谷氨酸。加药5、15、30、60、120、240和360min后收集细胞，提取细胞总RNA，经逆转录-聚合酶链反应得到cDNA扩增产物，用c—fos基因扩增产物的密度与GAPDH基因扩增产物的密度比值表示c—fosmRNA的表达水平。结果G、K1和K2组加药后15min，c—fos mRNA表达增多，30～60min达最高峰，120min时下降，360min时回到基线水平。G组c—fos mRNA的表达水平较对照组明显升高（P〈0．01），与G组相比，K1～K3组c-fos mRNA表达显著降低（P〈0．05），呈剂量依赖性。结论氯胺酮对神经细胞损伤有一定的神经保护作用，c—fos可能参与了氯胺酮神经保护的分子机制。 展开更多
关键词 N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂 氯胺酮 C-FOS 神经保护 逆转录-聚合酶链反应 神经元样PC12细胞 谷氨酸诱导
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取代基对黄酮类化合物流感病毒神经氨酸酶抑制活性的影响 被引量：2
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作者 胡凤杨 陆春妮 汤有志 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第2期144-147,共4页
本试验旨在研究取代基对黄酮类化合物流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase,NA)抑制活性的影响,为黄酮类流感病毒神经氨酸酶抑制剂的研发提供理论依据。应用流感病毒神经氨酸酶活性抑制试验评价了4种黄酮类化合物对NA的抑制活性。芹菜素-7... 本试验旨在研究取代基对黄酮类化合物流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase,NA)抑制活性的影响,为黄酮类流感病毒神经氨酸酶抑制剂的研发提供理论依据。应用流感病毒神经氨酸酶活性抑制试验评价了4种黄酮类化合物对NA的抑制活性。芹菜素-7-葡萄糖苷、芹菜素具有H9N2亚型流感病毒NA抑制活性,蒙花苷、汉黄芩苷无H9N2亚型流感病毒NA抑制活性。4’位的取代羟基对于黄酮类化合物的NA抑制活性不可或缺,7位的糖苷键能增强该类化合物的NA抑制活性。 展开更多
关键词 黄酮 芹菜素-7-葡萄糖苷 芹菜素 神经氨酸酶 抑制活性
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知母皂苷元对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用研究 被引量：11
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作者 王琦 隋海娟 +4 位作者 屈文慧 郁盛雪 金迎新 刘卓 金英 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期281-285,共5页
目的观察知母皂苷元(Sarsasapogenin,SAR)对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用。方法大鼠乳鼠大脑皮层神经元,培养7 d后用于实验。倒置相差显微镜观察神经元树突生长发育情况;用MTT法测定细胞活力;Ho-echst33258核染色观察细胞凋亡... 目的观察知母皂苷元(Sarsasapogenin,SAR)对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用。方法大鼠乳鼠大脑皮层神经元,培养7 d后用于实验。倒置相差显微镜观察神经元树突生长发育情况;用MTT法测定细胞活力;Ho-echst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western印迹法检测神经元SYP、caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。结果形态学观察结果显示谷氨酸可明显抑制神经元树突的生长发育,表现为神经元树突总长度明显降低、一级树突数目明显减少、最大分支级数明显减少及胞体面积缩小。SAR(10、30、100μmol.L-1)可明显抑制谷氨酸对神经元树突生长发育的抑制作用,并呈明显浓度依赖。MTT和Ho-echst33258核染色结果显示谷氨酸可降低神经元细胞活力及增加神经元细胞凋亡百分比。SAR(10、30、100μmol.L-1)能明显对抗谷氨酸引起的神经元细胞活力降低及细胞凋亡百分比增加。Western印迹结果显示谷氨酸可明显降低SYP蛋白表达水平及增加活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。SAR(10、30、100μmol.L-1)可明显对抗谷氨酸引起SYP蛋白表达降低及活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。结论知母皂苷元能够明显对抗谷氨酸引起的皮层神经元损伤作用。 展开更多
关键词 知母皂苷元 谷氨酸 皮层神经元 凋亡 突触素 半胱尖冬氨酸酶-3
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