从噬菌体随机十二肽库中筛选新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶模拟表位 被引量：3

1

作者 孙林 焦新安 +4 位作者 刘文博 潘志明 黄金林 彭大新 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期428-431,共4页

以生物素标记的抗新城疫病毒(NDV)血凝素＿神经氨酸酶(HN)的单抗M22为分子探针,从噬菌体随机12肽库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位。经过三轮亲和筛选,得到了四个能与单抗M22反应的阳性噬菌体单克隆,分别为CLONE11、17、18、20... 以生物素标记的抗新城疫病毒(NDV)血凝素＿神经氨酸酶(HN)的单抗M22为分子探针,从噬菌体随机12肽库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位。经过三轮亲和筛选,得到了四个能与单抗M22反应的阳性噬菌体单克隆,分别为CLONE11、17、18、20。竞争ELISA试验表明,CLONE20与M22的结合能被新城疫弱毒株LaSota特异性抑制,抑制率达67 3%。经测序,获得CLONE20的插入序列为SWFHHHQARAPM,同源性分析认为WF和QAR在HN的抗原性中起重要作用。动物试验结果表明,CLONE20能诱导SPF鸡产生一定水平的具有血凝抑制活性的特异抗体。以上结果显示SWFHHHQARAPM是具有免疫原性的HN抗原模拟表位。 展开更多

关键词 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶 单克隆抗体 亲和筛选 模拟表位

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鸭新城疫病毒河北分离株血凝素-神经氨酸酶蛋白基因序列分析

2

作者 陈立功 张芳 +5 位作者 董兵 翟文栋 刘聚祥 李妹玲 李玲 任玉红 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期81-85,118,共6页

为研究新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）的遗传变异特性,对NDV HB/1/05/Dk株的血凝素-神经氨酸酶（haemagglutinin-neuraminidase protein,HN）蛋白基因进行了扩增、测序和遗传进化分析。结果表明：该病毒的HN基因长2 002bp,... 为研究新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）的遗传变异特性,对NDV HB/1/05/Dk株的血凝素-神经氨酸酶（haemagglutinin-neuraminidase protein,HN）蛋白基因进行了扩增、测序和遗传进化分析。结果表明：该病毒的HN基因长2 002bp,含有1个长为1 716bp的完整开放阅读框架（Open reading frame,ORF）,编码571个氨基酸,符合强毒株的特征。同源性分析表明,该毒株的HN基因与35株参考毒株间的核苷酸和氨基酸的同源性分别为71.8%-99.1%和83.4%-98.9%。遗传进化分析表明,该毒株与基因VIId亚型参考毒株关系较近,属同一分支,与疫苗株B1、LaSota、Mukteswar株和I类毒株关系较远。因此,须加强河北省水禽NDV的监测。 展开更多

关键词 新城疫病毒 鸭 血凝素-神经氨酸酶蛋白 序列分析

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A型流感病毒神经氨酸酶蛋白功能研究进展 被引量：5

3

作者 郑沁玫 顾敏 刘秀梵 《动物医学进展》 北大核心 2021年第10期66-70,共5页

A型流感病毒(IAV)的宿主谱广泛,对人类健康和畜禽养殖均构成严重威胁。神经氨酸酶(neuraminidase,NA)作为IAV囊膜表面主要的糖蛋白之一,在病毒的感染过程中至关重要,是常用的抗病毒药物作用靶点。以往关于NA蛋白的研究主要聚焦于其通过... A型流感病毒(IAV)的宿主谱广泛,对人类健康和畜禽养殖均构成严重威胁。神经氨酸酶(neuraminidase,NA)作为IAV囊膜表面主要的糖蛋白之一,在病毒的感染过程中至关重要,是常用的抗病毒药物作用靶点。以往关于NA蛋白的研究主要聚焦于其通过切割宿主细胞表面唾液酸与血凝素(hemagglutinin,HA)之间的α-2,6或α-2,3糖苷键以促进新生病毒粒子释放的功能方面,而近来不断有证据表明,神经氨酸酶蛋白在受体结合和宿主适应性方面同样发挥关键作用。论文综述了神经氨酸酶蛋白的结构特征,并对神经氨酸酶蛋白的酶催化活性、受体结合功能以及与HA蛋白的功能平衡方面进行了总结,以期为深入理解IAV感染的分子机制提供参考。 展开更多

关键词 A型流感病毒 神经氨酸酶 受体结合 唾液酸 血凝素-神经氨酸酶平衡

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pIRApoptinHNIL18对结肠癌细胞HCT-116的抑制效应

4

作者 郑洪玲 金宁一 +6 位作者 李霄 米志强 连海 李昌 田明尧 李雪梅 孙丽丽 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第1期42-46,共5页

目的:探讨联合应用凋亡素(apoptin)基因、新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶(he-magglutinin-neuramidinase,HN)基因及人白介素18(hIL-18)基因体外对人结肠癌细胞HCT-116的抑制效应。方法:重组质粒pIRApoptinHN... 目的:探讨联合应用凋亡素(apoptin)基因、新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶(he-magglutinin-neuramidinase,HN)基因及人白介素18(hIL-18)基因体外对人结肠癌细胞HCT-116的抑制效应。方法:重组质粒pIRApoptinHNIL18通过脂质体介导法体外转染人结肠癌细胞HCT-116,通过Western blotting和RT-PCR检测外源基因表达;采用AO/EB染色法检测pIRApoptinHNIL18对人结肠癌细胞HCT-116抑制作用;利用流式细胞术分析pIRApoptinHNIL18对人结肠癌细胞HCT-116线粒体膜电位(mitochondrial transmembrane potential,△Ψ)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用3,5-二羟基甲苯法测定唾液酸含量。结果:pIRApoptinHNIL18转染人结肠癌细胞HCT-116后,外源基因能够有效表达;肿瘤细胞生长受到抑制;线粒体△Ψ由(94.41±8.17)%下降到(30.70±8.01)%(P<0.05);唾液酸含量由(0.33±0.06)mmol/L下降到(0.09±0.03)mmol/L(P<0.01);ROS水平由(52.48±6.09)%升高到(68.98±7.26)%(P<0.05)。结论:pIRApoptinHNIL18可通过线粒体途径诱导细胞凋亡,从而抑制人结肠癌细胞HCT-116的生长。 展开更多

关键词 凋亡素基因 血凝素-神经氨酸酶基因 人白介素18基因 结肠癌细胞 线粒体 凋亡

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新城疫病毒HN蛋白抗原表位分析及结构域基因原核表达 被引量：9

5

作者 陈亚波 徐程 +1 位作者 张桂芝 方维焕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期32-35,共4页

以本实验室构建的含新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因重组质粒为模板,设计引物通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,获得HNa、HNb和HNa-L-b三种抗原结构域基因片段,BamHⅠ/HindⅢ双酶切定向克隆到原核表达载体pET32c,获得重组质粒分别命名为pET32... 以本实验室构建的含新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因重组质粒为模板,设计引物通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,获得HNa、HNb和HNa-L-b三种抗原结构域基因片段,BamHⅠ/HindⅢ双酶切定向克隆到原核表达载体pET32c,获得重组质粒分别命名为pET32c-HNa、pET32c-HNb和pET32c-HNa-L-b。重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞BL21,筛选出阳性克隆,诱导表达并取产物进行分析。结果表明,HNa、HNb、HNa-L-b结构域基因片段均获得了融合表达。Western-blotting分析证实表达产物HNa和HNb与NDV阳性血清具有免疫反应性。本试验结果为进一步研究HN蛋白抗原结构域的免疫原性以及HN蛋白与F蛋白在细胞融合中的相互作用奠定了基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶 结构域 抗原表位 原核表达

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抗新城疫病毒HN蛋白单链抗体的原核表达及其功能鉴定 被引量：4

6

作者 王斌 刘培欣 +4 位作者 李涛 王高玲 修金生 胡崇伟 刘恒贵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期383-386,共4页

为制备抗鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)单链抗体(scFv)并鉴定其生物学功能,本研究提取抗NDV HN单克隆抗体杂交瘤细胞株总RNA,通过RT-PCR扩增抗HN蛋白抗体的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)编码序列,将其插入含有Linker序列的... 为制备抗鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)单链抗体(scFv)并鉴定其生物学功能,本研究提取抗NDV HN单克隆抗体杂交瘤细胞株总RNA,通过RT-PCR扩增抗HN蛋白抗体的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)编码序列,将其插入含有Linker序列的载体pET-scIG中,构建抗HN的scFv(HN-scFv)原核表达重组质粒pET-HN-scFv并在大肠杆菌中诱导表达。结果显示HN-scFv主要以包涵体形式存在。将包涵体进行复性和Ni-NTA层析柱纯化后用于流式细胞仪检测,结果显示复性纯化后的HN-scFv能够识别表达于293T细胞表面的NDV HN蛋白。该scFv的制备为进一步对该抗体进行改造奠定了基础。 展开更多

关键词 单链抗体 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶

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新城疫病毒不同基因型HN部分基因的克隆表达及反应原性的比较 被引量：2

7

作者 张立娜 刘培欣 +2 位作者 曹殿军 闫丽辉 贾竞波 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期66-68,共3页

通过对NDV不同基因型毒株HN基因的氨基酸序列进行比较，发现基因Ⅶ型的毒株在第65～75位的氨基酸序列较为保守，而其他各基因型在该区域则呈现出多态性。因此克隆了新城疫基因Ⅱ、Ⅶ和Ⅸ型的代表性毒株La Sota、GX-2、F48E9的含该区域... 通过对NDV不同基因型毒株HN基因的氨基酸序列进行比较，发现基因Ⅶ型的毒株在第65～75位的氨基酸序列较为保守，而其他各基因型在该区域则呈现出多态性。因此克隆了新城疫基因Ⅱ、Ⅶ和Ⅸ型的代表性毒株La Sota、GX-2、F48E9的含该区域的序列，分别将其连接到原核表达载体pGEX-6p-1上，通过特异性抗血清对表达肽段进行抗原性测定。结果表明3个毒株在免疫活性上存在差异，分析其原因可能是由于氨基酸的极性不同所致。 展开更多

关键词 新城疫病毒 融合血凝素-神经氨酸酶蛋白 反应原性

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2006～2008年华东地区新城疫病毒HN基因序列分析 被引量：2

8

作者 吴双 胡增磊 +3 位作者 王伟伟 王晓泉 胡顺林 刘秀梵 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第2期61-66,共6页

为研究新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）的HN（血凝素-神经氨酸酶，hemagglutinin—neuraminidase）基因分子流行病学规律，利用RT—PCR扩增了2006～2008年间分离自我国华东地区的43株NDV的HN基因片段。基因序列分析显示，... 为研究新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）的HN（血凝素-神经氨酸酶，hemagglutinin—neuraminidase）基因分子流行病学规律，利用RT—PCR扩增了2006～2008年间分离自我国华东地区的43株NDV的HN基因片段。基因序列分析显示，分离株中基因Ⅰ型2株，基因Ⅱ型3株，基因Ⅵ型1株，其它37株都属于基因Ⅶd亚型。根据遗传发生进化树可将基因Ⅶd亚型进一步分为Ⅶd1和Ⅶd2两个亚型，基因Ⅶd1亚型HN蛋白的第102、118、443位氨基酸分别为T，A和T，而基因Ⅶd2亚型则分别为I，E和M。另外，研究表明HN蛋白线性表位发生E347K突变的变异株的分离率在我国呈上升趋势。 展开更多

关键词 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶基因 变异株

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新城疫病毒F48E9株HN蛋白抗原结构域区段的原核表达 被引量：2

9

作者 郭建军 范汉东 杨一兵 《江西农业学报》 CAS 2010年第7期91-94,共4页

利用生物软件对新城疫病毒F48E9株的血凝素神经氨酸酶(HN)蛋白进行抗原特性分析,选定172～570位氨基酸区域作为多肽表位候选区域。以pUC18-F-HN为模板,设计引物通过PCR扩增,获得HN抗原结构域基因片段,SaⅠl、NoⅠt双酶切定向克隆到原核... 利用生物软件对新城疫病毒F48E9株的血凝素神经氨酸酶(HN)蛋白进行抗原特性分析,选定172～570位氨基酸区域作为多肽表位候选区域。以pUC18-F-HN为模板,设计引物通过PCR扩增,获得HN抗原结构域基因片段,SaⅠl、NoⅠt双酶切定向克隆到原核表达载体pET28a,获得重组质粒分别命名为pET28a-HNa。重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞BL21,筛选出阳性克隆,诱导表达并取产物进行分析。结果表明,HN抗原结构域基因片段获得了融合表达,Western-blotting分析证实表达产物HN与NDV阳性血清具有免疫反应性。为进一步研究HN蛋白抗原结构域的免疫原性以及HN蛋白与F蛋白相互作用奠定了基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶 结构域 原核表达

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新城疫病毒HN蛋白表达条件的优化、纯化及其活性鉴定

10

作者 刘一尘 张春杰 +2 位作者 程相朝 李银聚 吴庭才 《河南科技大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2009年第4期72-75,共4页

为提高HN蛋白在毕赤酵母中的表达水平,本研究从不同诱导时间、培养基不同pH、不同甲醇诱导剂量等因素对HN基因在毕赤酵母中的表达条件进行优化。按最适条件大量诱导表达,对表达产物进行纯化,并通过血凝试验检测其生物学活性。结果表明pP... 为提高HN蛋白在毕赤酵母中的表达水平,本研究从不同诱导时间、培养基不同pH、不同甲醇诱导剂量等因素对HN基因在毕赤酵母中的表达条件进行优化。按最适条件大量诱导表达,对表达产物进行纯化,并通过血凝试验检测其生物学活性。结果表明pPICZαA-HN/X-33在培养液pH6.0,2.0%甲醇浓度、诱导96h时为最优条件,HN蛋白的表达量最高,可达0.3mg/mL,并具有较好的生物学活性。 展开更多

关键词 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶 表达条件 优化 纯化 活性检测

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NDV核心抗原重组杆状病毒转移载体的构建 被引量：3

11

作者 潘刚 王利群 +2 位作者 乌慧玲 吴祥甫 王文兵 《江苏大学学报（自然科学版）》 EI CAS 2003年第5期13-17,共5页

F和HN蛋白是新城疫病毒(NDV)中两种具有抗原性的表面糖蛋白 对NDV中国强毒株F48E8的F和HN基因进行了全长核苷酸序列分析 F基因的长度为1662bp,编码553个氨基酸,糖基化位点与已知的其他株系的位点相同;HN基因全长1904bp,编码571个氨基酸... F和HN蛋白是新城疫病毒(NDV)中两种具有抗原性的表面糖蛋白 对NDV中国强毒株F48E8的F和HN基因进行了全长核苷酸序列分析 F基因的长度为1662bp,编码553个氨基酸,糖基化位点与已知的其他株系的位点相同;HN基因全长1904bp,编码571个氨基酸,其中第5个糖基化位点(第500～502个氨基酸)由NPT突变成NPV 为了便于在杆状病毒中表达,将F和HN基因的核心抗原区通过PCR扩增,并成功地克隆进杆状病毒转移载体中。 展开更多

关键词 新城疫病毒 融合蛋白 血凝素-神经氨酸酶 序列 杆状病毒

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新城疫病毒F和HN核心片段在杆状病毒中的表达 被引量：1

12

作者 曾黎平 王萍 +2 位作者 乌慧玲 宋志秀 王文兵 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期114-118,共5页

为研制抗新城疫病毒的基因工程疫苗,将新城疫病毒F48E8株F和HN基因的核心片段克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb中,然后转化到DH10Bac感受态细胞中与Bacmid杆状病毒穿梭载体进行转座重组,最后将重组子转染TN5细胞,得到含F片段和含F+HN... 为研制抗新城疫病毒的基因工程疫苗,将新城疫病毒F48E8株F和HN基因的核心片段克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb中,然后转化到DH10Bac感受态细胞中与Bacmid杆状病毒穿梭载体进行转座重组,最后将重组子转染TN5细胞,得到含F片段和含F+HN片段的重组杆状病毒rBacF和rBacF+HN。PCR扩增结果证实F和F+HN基因片段重组到杆状病毒基因组中; SDS-PAGE和Westernblot检验结果表明F和F+HN基因片段在重组病毒中得到了表达。 展开更多

关键词 新城疫病毒 融合蛋白 血凝素-神经氨酸酶 杆状病毒

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天然溶瘤新城疫病毒Italien株HN基因真核表达载体的构建和表达 被引量：1

13

作者 张华 边惠洁 +3 位作者 尉丁 李亚琳 杨滨 陈志南 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期100-103,共4页

目的构建天然溶瘤型新城疫病毒(NDV)Italien株血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的真核表达载体并进行产物表达。方法采用RT-PCR法从病毒RNA中克隆HNcDNA,并构建HN的真核表达载体pcDNA3.1-HN,脂质体法转染CHO-K1,G418筛选稳定表达克隆。用Weste... 目的构建天然溶瘤型新城疫病毒(NDV)Italien株血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的真核表达载体并进行产物表达。方法采用RT-PCR法从病毒RNA中克隆HNcDNA,并构建HN的真核表达载体pcDNA3.1-HN,脂质体法转染CHO-K1,G418筛选稳定表达克隆。用Westernblot、免疫荧光法检测HN蛋白的表达。结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析,证实真核表达载体pcDNA3.1-HN构建正确。Westernblot和免疫荧光分析表明HN基因在CHO-K1中成功表达。结论天然溶瘤型NDVItalien株的HNcDNA被成功克隆,所构建的真核表达载体pcDNA3.1-HN可以在CHO-K1细胞中稳定表达。 展开更多

关键词 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶基因 转染 基因表达

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新城疫病毒Anhinga株HN基因的克隆与生物信息学分析

14

作者 何金娇 毛雪飞 +6 位作者 仇书兴 李瑞 李鹏 董春秀 刘洋洋 栾淼 吴云舟 《动物医学进展》 北大核心 2022年第2期7-13,共7页

克隆新城疫病毒中等毒力株Anhinga(Anh)的血凝素-神经氨酸酶(HN)基因,用生物信息学软件分析其编码蛋白结构与功能的差异。根据已知的HN基因序列,通过Primer Premier 5.0设计引物,提取新城疫病毒总RNA,反转录成cDNA,PCR扩增HN基因,并将... 克隆新城疫病毒中等毒力株Anhinga(Anh)的血凝素-神经氨酸酶(HN)基因,用生物信息学软件分析其编码蛋白结构与功能的差异。根据已知的HN基因序列,通过Primer Premier 5.0设计引物,提取新城疫病毒总RNA,反转录成cDNA,PCR扩增HN基因,并将其连接到T载体上进行测序比对;用DNAman、DNAstar、MEGA7.0及在线分析预测软件对HN基因编码的蛋白进行生物信息学分析。结果显示,HN基因全长为1716 bp,与预期基因序列同源性达99.77%。其基本理化性质为亲水性跨膜蛋白,无信号肽序列,二级结构主要以无规则卷曲为主,属于神经氨酸酶CL21531超家族,三级结构与二级结构预测结果基本吻合,该蛋白存在多个潜在的B细胞表位。论文成功克隆并分析了HN基因所编码蛋白的主要特性及可能存在的抗原位点,为深入探究HN蛋白在NDV感染、增殖及抗肿瘤方面的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶蛋白 生物信息学 理化性质

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