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2017年江苏省H3N2流感病毒血凝素与神经氨酸酶分子特征及耐药性分析 被引量:11
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作者 王慎骄 祁贤 +5 位作者 邓斐 彭杰夫 余慧燕 秦圆方 戴启刚 鲍倡俊 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第12期1254-1258,共5页
目的流行性感冒(简称流感)耐药性监测目前已成为流感防控中的一项重要组成部分。文中旨在分析江苏省2017年H3N2亚型流感病毒基因变异及耐药性情况。方法从江苏省13个流感监测点流感毒株中选取17株H3N2亚型毒株,其中12株为2017年夏季高... 目的流行性感冒(简称流感)耐药性监测目前已成为流感防控中的一项重要组成部分。文中旨在分析江苏省2017年H3N2亚型流感病毒基因变异及耐药性情况。方法从江苏省13个流感监测点流感毒株中选取17株H3N2亚型毒株,其中12株为2017年夏季高峰期分离株,4株为非高峰期分离株,1株为2016年度分离株(作为1株参考株)。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对H3N2亚型流感毒株进行序列测定,从全球共享流感序列网站GISAID下载构建甲型H3N2亚型流感毒株HA(血凝素)系统进化树的骨架参考序列,使用MAGE7.0软件进行序列比对和系统进化分析。通过神经氨酸酶(NA)抑制试验,分析病毒耐药情况。结果16株病毒HA和NA基因核苷酸相似性分别为98.9%~99.6%、99.2%~99.3%,同源性较高。HA进化树分析显示,16株分离株中15株位于3C.2a分支,13株病毒3个C3.2a1分支关键位点(N171K、I406V和G484E)未发生变化,另外3株毒株关键位点发生变异,1株毒株发生该标志性氨基酸变异,1株毒株发生(N121K、T135K)的免疫相关突变。与2017-2018年度疫苗株推荐株A/HongKong/4801/2014相比,16株分离株抗原位点突变包括:A138S 1株,R142K 2株,R142K、R261Q 9株,R142KS144R、R261Q 1株,R142K、S144K、R261Q 1株。16株病毒的NA片段分析未发现NA耐药位点。基因型和表型分析表明,16株H3N2亚型流感毒株对抗流感药物奥司他韦及扎那米韦均敏感,均发现与M2基因耐药有关A30T、S31N分子位点的改变。结论2017年江苏H3N2亚型流行株HA和NA基因表现出异质性特点及发生基因重配现象,随着H3N2流感病毒变异持续发生,应密切监测病毒遗传进化和耐药基因的变化情况。 展开更多
关键词 流感病毒 H3N2亚型 血凝素 神经 基因特性 耐药性分析
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2009至2016年中国甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因进化分析及流行趋势预测 被引量:15
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作者 宋玥 颜文娟 +3 位作者 方坤 李小杉 李伟 卫平民 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2017年第7期550-554,共5页
目的分析2009至2016年中国甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因(NA)进化特征,预测其流行趋势,为流感疫苗评价提供依据。方法从全球共享禽流感数据倡议组织(GISAID)数据库及美国国家生物技术中心(NCBI)数据库下载甲型H1N1流感病毒NA基因序列1... 目的分析2009至2016年中国甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因(NA)进化特征,预测其流行趋势,为流感疫苗评价提供依据。方法从全球共享禽流感数据倡议组织(GISAID)数据库及美国国家生物技术中心(NCBI)数据库下载甲型H1N1流感病毒NA基因序列1 141条。利用邻接法进行系统进化分析和遗传变异分析,利用Bayesian skyline Plot预测流行趋势。结果 2009至2016年中国甲型H1N1毒株NA基因与参考毒株的同源性逐年降低。遗传进化分析显示同一年份的毒株在系统进化树上基本呈现集中分布。除2012年,其余各年份的毒株均通过不同模型得到正向压力选择位点。动力学分析显示2017年甲型H1N1可能达到一个流行高峰。结论甲型H1N1流感病毒NA基因所编码的氨基酸逐年变异,需进一步加强流感监测。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感 神经 分子特征 进化分析
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2009年-2014年云南边境禽流感病毒H5N1亚型神经氨酸酶基因进化分析 被引量:2
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作者 曾伟 刘庆亮 +10 位作者 孔强 张文东 胡媛媛 胡挺松 赵焕云 段博芳 邱薇 范泉水 张应国 宋建领 张富强 《动物医学进展》 北大核心 2015年第7期13-18,共6页
为了解云南边境禽流感病毒H5N1亚型神经氨酸酶(NA)基因变异及进化特征,2009年-2014年期间在云南边境采集境外家禽和野生鸟类棉拭子样品1 500份,经禽流感H5/N1亚型病毒特异性多重RT-PCR检测,对阳性样品进行病毒NA基因扩增、纯化、克隆和... 为了解云南边境禽流感病毒H5N1亚型神经氨酸酶(NA)基因变异及进化特征,2009年-2014年期间在云南边境采集境外家禽和野生鸟类棉拭子样品1 500份,经禽流感H5/N1亚型病毒特异性多重RT-PCR检测,对阳性样品进行病毒NA基因扩增、纯化、克隆和测序,并与已知毒株和参考毒株进行序列比对及系统进化分析。结果从1 500份样品中检出禽流感病毒H5N1亚型阳性样品60份;60阳性样品病毒HA基因测序获得21种NA序列,可划分为4个不同进化分支。NA基因与HA基因呈现不同进化关系;云南边境毒株NA aa275位点未发生变异,因此变异毒株对神经氨酸酶抑制剂Oseltamivir(达菲)类抗病毒药物可能无抗性或耐药性;2009年-2014年期间云南边境H5N1亚型病毒NA间具有遗传差异,NA基因进化分支4已成为当地流行的优势毒株。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5N1亚型 神经 基因
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N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因的克隆与表达
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作者 杨蕴刘 饶娆 +1 位作者 沈健 冯磊 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期57-63,共7页
目的:为了获得N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因表达的两重组菌。方法:以大肠杆菌C600染色体DNA为模板,通过引物设计和PCR扩增,克隆获得编码Neu5Ac醛缩酶基因(nanA)的片段;以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化E.coliBL21(DE3),然后将nan... 目的:为了获得N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因表达的两重组菌。方法:以大肠杆菌C600染色体DNA为模板,通过引物设计和PCR扩增,克隆获得编码Neu5Ac醛缩酶基因(nanA)的片段;以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化E.coliBL21(DE3),然后将nanA基因片段组入到pDR540载体的Ptac启动子下游,所得重组菌E.coliDH5α/pRY3的nanA基因在tac启动子控制下呈组成型表达。结果:DNA序列测定证明,该基因的开放阅读框(open read ing frame,ORF)大小为894 bp,编码298个氨基酸组成的酶蛋白;SDS-PAGE显示,纯化的目的蛋白为33 kD的单一条带。以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化E.coliBL21(DE3),在得到的转化子E.coliBL21(DE3)/pRY1中,nanA基因受lac启动子控制,无需IPTG或乳糖所诱导。在N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶固定化酶的催化下合成N-乙酰-D-神经氨酸的合成效率为78.3%,结晶回收率为90.2%,总回收率为70.6%。全波长扫描分析表明:本实验室结晶品与Sigma公司商品的全波长扫描图谱有相同的特征。结论:所构建的诱导型产酶菌株E.coliBL21(DE3)/pRY1和组成型表达菌株E.coliDH5α/pRY3都可较多量的产酶。合成的结晶品具有N-乙酰-D-神经氨酸的特征。 展开更多
关键词 N-乙酰神经/遗传学 果糖-二磷醛缩 大肠杆菌/遗传学 聚合链反应 克隆 分子 重组 遗传 转染 遗传载体 基因表达 重组蛋白质类
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血凝素和神经氨酸酶与禽流感入侵机制
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作者 曲虹 王思睿 王晓龙 《防护林科技》 2016年第9期100-101,共2页
病毒的毒性是由其对宿主细胞、宿主动物或对种群产生不利影响的能力决定的。人类21世纪四次严重的呼吸系统疾病大流行都是甲型流感病毒引起。而禽类作为禽流感病毒的自然宿主和主要病毒携带者,形成了庞大而复杂的毒株储存库,可以不断产... 病毒的毒性是由其对宿主细胞、宿主动物或对种群产生不利影响的能力决定的。人类21世纪四次严重的呼吸系统疾病大流行都是甲型流感病毒引起。而禽类作为禽流感病毒的自然宿主和主要病毒携带者,形成了庞大而复杂的毒株储存库,可以不断产生新的或潜在的流行毒株。血凝素介导与细胞表面受体结合及膜融合,在流感病毒感染宿主细胞过程中是不可或缺的步骤。血凝素与唾液酸受体结合成为甲型流感病毒入侵和跨物种传播的首要条件。神经氨酸酶也存在于病毒的囊膜表面,具有水解唾液酸受体、释放病毒感染其他宿主细胞的作用。了解禽流感入侵及其在鸟类和哺乳动物之间的传播机制,有利于早期识别,为提供防控新手段提供可能。 展开更多
关键词 禽流感 血凝素糖蛋白 神经糖蛋白 受体结合特性 传播机制
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当归苯丙氨酸解氨酶基因片段克隆和组织特异性表达分析 被引量:12
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作者 雒军 王引权 +3 位作者 温随超 李静 张金林 夏琦 《草业学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期130-137,共8页
苯丙氨酸解氨酶(PAL)在高等植物苯丙烷类代谢中具有重要作用,与植物体内很多重要的次生代谢产物的合成密切相关。当归主要药效成分阿魏酸是苯丙烷类代谢途径中的产物之一。为了探究阿魏酸生物合成和积累的机理,本研究克隆了当归苯丙氨... 苯丙氨酸解氨酶(PAL)在高等植物苯丙烷类代谢中具有重要作用,与植物体内很多重要的次生代谢产物的合成密切相关。当归主要药效成分阿魏酸是苯丙烷类代谢途径中的产物之一。为了探究阿魏酸生物合成和积累的机理,本研究克隆了当归苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)部分序列,运用荧光定量PCR方法分析该基因在当归不同组织部位的表达差异。根据已经克隆的植物PAL保守序列设计一对扩增引物,以当归叶片总RNA为模板,采用反转录PCR(RT-PCR)方法扩增出PAL片段并连接到pGEM-T Easy载体上,转化大肠杆菌DH5α,阳性克隆经PCR检测后测序,得到一段706bp的序列(登录号:KJ000258),内含终止密码子TAA,编码232个氨基酸,与GenBank中注册的伞形科植物珊瑚菜等6个物种的PAL核苷酸序列同源性和氨基酸序列同源性都在80%以上;运用SYBR Green荧光定量PCR方法,以当归肌动蛋白基因Actin为内参基因,检测PAL在当归不同组织中的表达量,结果显示PAL在叶片中表达量最高,其次是茎和根,叶片和茎中表达量分别是根中表达量的7.5和2.7倍。 展开更多
关键词 当归 苯丙基因 基因克隆 荧光定量PCR 基因表达
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甜荞苯丙氨酸解氨酶基因PAL的克隆及序列分析 被引量:7
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作者 李成磊 蒙华 +3 位作者 张晓伟 陈惠 邵继荣 吴琦 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第7期255-257,共3页
利用RT-PCR技术,首次从甜荞(Fagopyrum esculentum)中克隆得到苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)的cDNA ORF序列,命名为FePAL。该序列长2169bp,编码722个氨基酸,与其他植物PAL基因同源性较高,为80%~97%,其推导的氨基酸序列含有PAL酶活性中心特... 利用RT-PCR技术,首次从甜荞(Fagopyrum esculentum)中克隆得到苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)的cDNA ORF序列,命名为FePAL。该序列长2169bp,编码722个氨基酸,与其他植物PAL基因同源性较高,为80%~97%,其推导的氨基酸序列含有PAL酶活性中心特征序列GTITASGDLVPLSYIA和多个脱氨基、催化活性位点。系统发育树表明,甜荞PAL基因与苦荞PAL基因聚类关系最近。 展开更多
关键词 甜荞 苯丙基因 克隆 序列分析
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酪氨酸酶基因遗传变异的研究进展 被引量:9
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作者 刘丽 席冬梅 +4 位作者 陈亮 孙守荣 何奕多 毛华明 邓卫东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第12期115-120,共6页
酪氨酸酶是黑色素生物合成过程中的限速酶,是酪氨酸酶基因表达的唯一产物。作者综述了酪氨酸酶基因的结构和功能及其在主要动物和人上的遗传变异,以便为酪氨酸酶基因的深入研究和应用提供借鉴。
关键词 黑色素 基因
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大肠杆菌色氨酸酶基因的克隆与表达 被引量:5
9
作者 韦平和 吴梧桐 张玉彬 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期139-142,共4页
应用PCR技术从E.coliJM105中扩增出长约1.4Kb的色氨酸酶基因,将其插入高表达载体pET3a的NdeI/BamHI位点,转化E.coliBL21(DE3),构建高产色氨酸酶基因工程菌。SDS-PAGE电泳... 应用PCR技术从E.coliJM105中扩增出长约1.4Kb的色氨酸酶基因,将其插入高表达载体pET3a的NdeI/BamHI位点,转化E.coliBL21(DE3),构建高产色氨酸酶基因工程菌。SDS-PAGE电泳和薄层扫描表明,工程菌色氨酸酶的表达量占细胞总可溶性蛋白的69.8%。酶活测定结果表明,7株工程菌色氨酸酶的活力比宿主菌均有不同程度的提高,其中WW-11号比宿主菌高16倍。 展开更多
关键词 L-色 PCR 克隆 表达 基因工程菌
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水貂酪氨酸酶基因外显子1的鉴定及序列变异分析 被引量:5
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作者 宋兴超 徐超 +4 位作者 岳志刚 王雷 丛波 刘琳玲 杨福合 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期205-212,共8页
根据GenBank中公布的雪貂(登录号:EF405957)、大熊猫(登录号:XM_002930310)、家犬(登录号:CFU42219)及猫(登录号:AY959314)的酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因DNA序列保守区域,设计1对特异性引物,利用PCR及克隆技术测定了短... 根据GenBank中公布的雪貂(登录号:EF405957)、大熊猫(登录号:XM_002930310)、家犬(登录号:CFU42219)及猫(登录号:AY959314)的酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因DNA序列保守区域,设计1对特异性引物,利用PCR及克隆技术测定了短毛黑水貂、红眼白水貂和米黄色水貂的TYR基因外显子1部分序列,并对该序列进行了BLAST鉴定及变异位点分析,基于该基因编码氨基酸序列构建了16个物种的系统进化树。结果表明,测定的3种毛色水貂TYR基因序列长度均为796bp,包括795bp的外显子1和1bp 5′UTR,共检测到5个单一突变位点:g.A34G、g.T138A、g.T248C、g.A545G和g.C765A,包含4个错义突变:g.A34G(p.Ser12Gly)、g.T248C(p.Val83Ala)、g.A545G(p.Tyr182Cys)和g.C765A(p.His255Gln),1个移码突变分别出现在短毛黑水貂和红眼白水貂个体间:g.T138A(p.Cys46*),获得TYR基因GenBank登录号分别为:短毛黑水貂(KJ198847)、红眼白水貂(KJ658343)和米黄色水貂(KJ152769)。水貂与雪貂、大熊猫、家犬、猫、家兔、猪、羊驼、山羊、绵羊、牛、人、猕猴、黑猩猩、原鸡和日本鹌鹑的TYR基因核苷酸序列同源性为72.8%~98.6%,相应氨基酸序列同源性为75.0%~98.1%。TYR基因分子进化树显示水貂与雪貂遗传关系最近,分化时间约为1000万年前,且与原鸡和日本鹌鹑亲缘关系最远。该结果为进一步开展TYR基因多态性与水貂毛色表型的相关性研究奠定了生物信息学基础。 展开更多
关键词 水貂 毛色变异 基因 遗传进化
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大豆天冬氨酸途径关键酶基因GmASADH的克隆与分析 被引量:5
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作者 姜威 朱宝华 +6 位作者 高静瑶 于妍 张闻博 邱鹏程 刘春燕 陈庆山 胡国华 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期221-225,共5页
本研究基于电子克隆获得的大豆GmASADH基因cDNA序列,根据其编码区设计特异引物,以大豆品种小鹦哥豆总RNA为模板,通过RT-PCR获得了约1 130bp的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定。测序结果显示,GmASADH基因家族有两个成员,命名为GmASADH1(F... 本研究基于电子克隆获得的大豆GmASADH基因cDNA序列,根据其编码区设计特异引物,以大豆品种小鹦哥豆总RNA为模板,通过RT-PCR获得了约1 130bp的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定。测序结果显示,GmASADH基因家族有两个成员,命名为GmASADH1(FJ581425)和GmASADH2(HM015631)。GmASADH1编码区长度为1 134bp,编码378个氨基酸,由7个外显子和6个内含子构成,定位于Gm08染色体。GmASADH2编码区长度为1 131bp,编码377个氨基酸,由7个外显子和6个内含子构成,定位于Gm05染色体。两个基因在氨基酸水平上的相似性达到了96.02%,在二级及三级结构上均有不同程度的差异。ASADH蛋白含有NADB_Rossmann super-family和Semialdhyde_dhC superfamily结构域。 展开更多
关键词 大豆 天冬半醛脱氢 GmASADH基因 序列分析
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烟粉虱刺吸诱导转Bt+CpTI基因棉苯丙氨酸解氨酶和氧保护酶系活性变化 被引量:12
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作者 姜涛 褚栋 +3 位作者 姜德锋 陶云荔 刘国霞 范仲学 《山东农业科学》 2009年第10期48-53,共6页
本研究测定并比较了不同时期转双价基因棉SGK321和其亲本常规棉SY321叶片中苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的总活性。结果发现,烟粉虱取食诱导使棉叶中PAL、POD的活性上升,SOD的活性则是... 本研究测定并比较了不同时期转双价基因棉SGK321和其亲本常规棉SY321叶片中苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的总活性。结果发现,烟粉虱取食诱导使棉叶中PAL、POD的活性上升,SOD的活性则是先下降后升高,CAT的活性基本呈下降趋势。SGK321处理植株叶片中PAL活性在不同时期均高于SY321,而POD活性在不同时期均高于SY321;SGK321处理植株上部叶片SOD活性在处理30 d前明显高于SY321,40 d时低于SY321;SGK321处理植株叶片中CAT活性多数时期低于SY321。最后,探讨了转双价基因棉花与其亲本常规棉对烟粉虱防御反应的差异。 展开更多
关键词 Bt+CpTI基因 烟粉虱 苯丙 保护系统
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蛋氨酸裂解酶的基因克隆及序列分析 被引量:10
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作者 马百坤 唐晓莹 +1 位作者 黄惠臣 时永辉 《医学研究生学报》 CAS 2006年第12期1063-1066,共4页
目的:克隆蛋氨酸裂解酶(METase)中阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶(TVMGL1)基因,探讨重组METase(rMETase)对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:从培养的阴道毛滴虫提取总RNA,以此为模板,利用RT-PCR获取TVMGL1基因,琼脂糖电泳分离纯化所得目的基因并... 目的:克隆蛋氨酸裂解酶(METase)中阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶(TVMGL1)基因,探讨重组METase(rMETase)对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:从培养的阴道毛滴虫提取总RNA,以此为模板,利用RT-PCR获取TVMGL1基因,琼脂糖电泳分离纯化所得目的基因并克隆至T-Vector,AB I 3730自动序列分析仪分析所得基因序列。结果:PCR产物经琼脂糖电泳,目的基因片段大小与预期大小相符;序列分析所得基因序列为1 191 bp,与国外报导的序列相符。结论:从培养的阴道毛滴虫中成功克隆出TVMGLV1基因,为METase抗肿瘤作用的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 裂解 基因克隆 反转录PCR
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禽流感病毒神经氨酸酶的结构及其生物学功能 被引量:14
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作者 王全英 乔传玲 申之义 《动物医学进展》 CSCD 2005年第12期40-43,共4页
高致病性禽流感是由禽流感病毒(AIV)引起的一种急性传染病。AIV呈球形,有囊膜。其表面主要有2种糖蛋白,即血凝素和神经氨酸酶。其中神经氨酸酶具有重要功能,其对病毒的释放及病毒在感染细胞周围的扩散能力有很大影响。此外,神经氨酸酶... 高致病性禽流感是由禽流感病毒(AIV)引起的一种急性传染病。AIV呈球形,有囊膜。其表面主要有2种糖蛋白,即血凝素和神经氨酸酶。其中神经氨酸酶具有重要功能,其对病毒的释放及病毒在感染细胞周围的扩散能力有很大影响。此外,神经氨酸酶对其周围的血凝素切割能力也有很大影响,从而在一定程度上可以导致病毒致病性的不同。神经氨酸酶是AIV中另一种重要抗原,抗神经氨酸酶的抗体可为机体遭受流感病毒攻击提供一定的保护力。因此,神经氨酸酶对AIV的生物学特性具有重要意义。 展开更多
关键词 禽流感病毒 神经
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5-氨基乙酰丙酸对苹果幼果多酚含量、苯丙氨酸解氨酶活性及其基因表达的影响 被引量:3
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作者 陈磊 郭玉蓉 +2 位作者 刘永峰 米瑞芳 窦娇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第11期135-138,共4页
探究5-氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid,ALA)处理对苹果幼果酚类物质、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanin ammonia-lyase,PAL)活性及其基因表达量的影响。在苹果疏果期前,利用不同质量浓度ALA处理苹果幼果,采用紫外分光光度法测定ALA处理后... 探究5-氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid,ALA)处理对苹果幼果酚类物质、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanin ammonia-lyase,PAL)活性及其基因表达量的影响。在苹果疏果期前,利用不同质量浓度ALA处理苹果幼果,采用紫外分光光度法测定ALA处理后12 d内苹果多酚和PAL活性,利用荧光定量法测定苹果幼果PAL基因表达量。结果表明:ALA处理质量浓度在300 mg/L以内,随着质量浓度提高,苹果多酚含量、PAL酶活性及其基因表达量均升高,到400 mg/L时各项指标均表现出下降趋势;相同质量浓度ALA处理苹果幼果后,幼果的上述3项指标均随时间延长而明显提高,在第9天时达到最高值,12 d后开始下降。为提高苹果疏果多酚含量,实现疏果的最大利用率,生产中需要选择适宜的ALA处理浓度和时间采集幼果。 展开更多
关键词 苹果幼果 多酚 苯丙 基因表达
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神经氨酸酶对红细胞膜的剪切弹性模量和表面粘度的影响 被引量:2
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作者 谢利德 姚伟娟 +4 位作者 孙大公 喀蔚波 文宗曜 尚俊杰 严宗毅 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期33-37,60,共6页
神经氨酸酶 (唾液酸酶 )与红细胞发生生物化学作用 ,分别改变其作用时间和二者的相对作用剂量 ,以达到不同程度地去掉红细胞的表面电荷。用文宗曜、严宗毅等[1] 最近提出的一种测量红细胞膜剪切弹性模量及表面粘度的新方法 新型激光衍... 神经氨酸酶 (唾液酸酶 )与红细胞发生生物化学作用 ,分别改变其作用时间和二者的相对作用剂量 ,以达到不同程度地去掉红细胞的表面电荷。用文宗曜、严宗毅等[1] 最近提出的一种测量红细胞膜剪切弹性模量及表面粘度的新方法 新型激光衍射法 ,分别测量经过各种处理的红细胞的小变形指数 (DI) d 和变形恢复过程即松弛过程中变形恢复到最大值 (DI) max一半的时间t0 .5(即变形恢复半时间 ) ,将测得的结果分别代入红细胞膜的剪切弹性模量 (E)公式和红细胞面粘度 (μm)公式。计算出经过各种处理后的红细胞的膜剪切弹性模量和表面粘度 ,并与正常对照组的相应参数作比较 ,发现二者之间存在明显差异 ,此差异随处理程度的增加而增大 ,表现出明显的量效关系。因此有力地证明了神经氨酸酶对红细胞作用后使其膜剪切弹性模量增大 ,表面粘度增大 ,同时也体现了新型激光衍射法在测量红细胞膜的剪切弹性模量和表面粘度时有很好的灵敏性 ,它与国外文献所报道的微吸管法和流室法测得的结果相近 ,但操作方便 ,省时、省力、造价低 ,因此具有更广泛的应用范围。 展开更多
关键词 神经 红细胞膜 剪切弹性模量 表面粘度
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芥蓝(Brassica alboglabra)苯丙氨酸解氨酶基因BaPAL的克隆、表达与序列分析 被引量:1
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作者 蒋明 李艳 +2 位作者 陈珍 李钧敏 杜照奎 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期139-145,共7页
根据NCBI数据库中拟南芥、甘蓝型油菜和菘蓝的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonialyase,PAL)基因序列设计简并引物,从芥蓝叶片cDNA中克隆到1个PAL基因,定名为BaPAL.BaPAL编码区全长2 145 bp,编码714个氨基酸,在NCBI的登录号为FJ8490... 根据NCBI数据库中拟南芥、甘蓝型油菜和菘蓝的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonialyase,PAL)基因序列设计简并引物,从芥蓝叶片cDNA中克隆到1个PAL基因,定名为BaPAL.BaPAL编码区全长2 145 bp,编码714个氨基酸,在NCBI的登录号为FJ849059.半定量RT-PCR结果表明,BaPAL基因在茎、叶、花蕾、开放花朵和嫩角果中均有表达,而且以开放花朵的表达量最大,根中未能检测到.BaPAL与其他植物PAL序列比对的结果表明:芥蓝与甘蓝型油菜、白菜的关系最为接近,与同科的菘蓝和拟南芥的关系稍远,但它们都处于同一进化分支;跟蕨类植物的同源性最低,亲缘关系最远. 展开更多
关键词 芥蓝 苯丙 基因克隆 序列分析
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蛋氨酸裂解酶基因在大肠杆菌中的高效表达 被引量:8
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作者 马百坤 王红兵 《医学研究生学报》 CAS 2008年第4期353-355,359,共4页
目的:使来源于人阴道毛滴虫的蛋氨酸裂解酶基因在大肠杆菌中高效表达;纯化表达产物获得重组蛋氨酸裂解酶。方法:用蛋氨酸裂解酶基因片段克隆至pGEX4T-2,转化大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导下体外表达重组蛋白,亲和层析纯化重组... 目的:使来源于人阴道毛滴虫的蛋氨酸裂解酶基因在大肠杆菌中高效表达;纯化表达产物获得重组蛋氨酸裂解酶。方法:用蛋氨酸裂解酶基因片段克隆至pGEX4T-2,转化大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导下体外表达重组蛋白,亲和层析纯化重组蛋白。结果:表达产物经SDS-PAGE,显示在相对分子质量68000处出现高浓度的GST融合蛋白,其相对分子质量与预期的GST-重组蛋氨酸裂解酶大小相符;薄层扫描显示重组蛋白占总菌量的34%。结论:人阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶基因在大肠杆菌中成功地获得高效表达。 展开更多
关键词 裂解 基因克隆 逆转录PCR 体外表达 蛋白纯化
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白血病患者蛋白质酪氨酸磷酸酶基因的检测及临床意义 被引量:2
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作者 韩颖 郝淑香 +4 位作者 田丛哲 杨琳 范丽霞 季静 罗建民 《临床荟萃》 CAS 北大核心 2007年第9期631-632,共2页
关键词 白血病 骨髓细胞 蛋白质酪 基因 聚合链反应
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亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与分支动脉粥样硬化疾病早期神经恶化相关性研究 被引量:3
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作者 于善花 陈皆春 +3 位作者 庄爱霞 葛中林 张浩江 曾庆宏 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2019年第12期1301-1304,共4页
目的探讨血浆同型半胱氨酸及亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性与分支动脉粥样硬化疾病早期神经恶化(END)的相关性。方法分支动脉粥样硬化疾病患者168例,根据诊断分为END组88例,非END组80例。采用美国国立卫生研究院卒中量表(... 目的探讨血浆同型半胱氨酸及亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性与分支动脉粥样硬化疾病早期神经恶化(END)的相关性。方法分支动脉粥样硬化疾病患者168例,根据诊断分为END组88例,非END组80例。采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分评估患者神经功能。采用多变量logistic回归分析确定END的危险因素。通过PCR荧光定量进行基因分型,分析基因型的分布情况。结果END组糖化血红蛋白、同型半胱氨酸和入院时NIHSS评分明显高于非END组(P<0.05,P<0.01)。多因素logistic回归分析显示,糖化血红蛋白(OR=1.531,95%CI:1.143~1.982,P=0.024)、同型半胱氨酸(OR=2.786,95%CI:1.193~6.943,P=0.036)和入院时NIHSS评分(OR=1.668,95%CI:1.175~2.342,P=0.004)为END的危险因素。MTHFR C677T基因T/T型同型半胱氨酸(18.33±0.74)μmol/L最高,其次C/T型同型半胱氨酸(16.11±0.79)μmol/L,C/C型同型半胱氨酸(13.29±0.53)μmol/L最低(P=0.024)。结论血浆同型半胱氨酸水平是分支动脉粥样硬化疾病患者END的独立危险因素。MTHFR C677T基因T/T型血浆同型半胱氨酸水平最高。 展开更多
关键词 亚甲基四氢叶还原(NADPH) 动脉粥样硬化 高半胱 基因 聚合链反应
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