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H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的表达及纯化被引量：9: 1; 作者李清州郝惠芳 +5 位作者王丽赵绪永朱礼倩张丽萍邓瑞广张改平《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第8期127-130,共4页; 利用PCR方法从含禽流感病毒HA基因的质粒T-HA上扩增HA基因,再将其克隆到原核表达载体pET28a中,用E.coliBL21(DE3)原核表达,SDS-PAGE和Western-blot对表达蛋白进行鉴定。Western-blot结果表明,表达产物具有免疫学活性,蛋白的分子量约为60... 展开更多; 关键词禽流感病毒 H5N1亚型血凝素(ha) 原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

2014-2015年商洛市流感病毒H3N2亚型血凝素(HA1)基因进化研究被引量：4: 2; 作者齐延亮史伟 +4 位作者段勇波徐纪茹戴侃记张芳芳余鹏博《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期6-11,共6页; 目的分析2014-2015年度商洛市流感监测病毒血凝素(HA)基因变异情况并研究与推荐疫苗的匹配性。方法收集2014-2015年商洛市流感监测平台用狗肾传代细胞(MDCK)培养分离的H3N2亚型毒株,利用RT-PCR方法扩增分离HA片段,进行核苷酸序列测定,应... 展开更多; 关键词流感病毒 H3N2亚型血凝素(ha) 疫苗株基因进化; 在线阅读下载PDF 职称材料

2株云南H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因序列分析被引量：7: 3; 作者李佳佳李素华 +4 位作者宋建领黄景军缪渊陈曦季佳《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第3期873-883,共11页; 在2019年1月-2019年6月对云南出现呼吸道疫病的57个鸡场进行H9亚型禽流感检测的基础上,选取石林和楚雄2个H9亚型禽流感阳性样品进行病毒分离。从分离的H9N2亚型禽流感病毒感染鸡胚尿囊液中提取总RNA,采用特异性引物经反转录PCR分别扩增H... 展开更多; 关键词 H9N2禽流感病毒血凝素(ha)基因神经氨酸酶(NA)基因分子特征; 在线阅读下载PDF 职称材料

基于血凝素裂解位点的DNA条形码在A型流感病毒分型中的应用被引量：1: 4; 作者孟慧芝孙涛 +1 位作者岳志芹王文斌《中国动物检疫》 CAS 2015年第7期55-61,共7页; 为了建立一种快速鉴别AIV的HA亚型的RT-PCR方法,本研究探讨了流感病毒血凝素裂解位点基因作为DNA条形码对A型流感病毒进行亚型鉴定的可行性。通过生物信息学方法对16种A型流感病毒的血凝素基因全长进行比对,在HA裂解位点的两端高度保守... 展开更多; 关键词 A型流感病毒血凝素(ha) DNA条形码亚型鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

HA基因真核表达载体构建及在293T细胞中的表达被引量：1: 5; 作者李方琳王慧慧 +1 位作者粟雨芯马忠仁《甘肃畜牧兽医》 2022年第3期37-40,共4页; 目的:为后续进一步研究H1N1病毒DNA疫苗对小鼠免疫系统的影响提供技术支撑。方法:应用PCR方法体外扩增血凝素(HA)基因全序列,并利用pcDNA3.1(+)载体构建甲型流感病毒(H1N1)血凝素(HA)的真核表达质粒(pcDNA3.1(+)-HA),经双酶切鉴定后,转... 展开更多; 关键词血凝素(ha) 质粒构建真核表达 DNA疫苗; 在线阅读下载PDF 职称材料

H7亚型禽流感病毒HA蛋白在Sf9中的表达与纯化: 6; 作者刘郁夫郝文茜 +2 位作者冯美莹欧阳征亮陈瑞爱《广东农业科学》 CAS 2023年第10期149-156,共8页; 【目的】真核表达H7亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)HA蛋白,为进一步制备H7亚型HIV亚单位疫苗,评价其免疫原性提供基础。【方法】首先根据草地贪夜蛾卵巢细胞(Spodoptera frugiperda clone 9,Sf9)的密码子偏嗜性,优化并合成H... 展开更多; 关键词 H7亚型禽流感病毒血凝素蛋白(ha) 昆虫细胞杆状病毒基因表达蛋白纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

H5亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测技术的建立被引量：7: 7; 作者彭宜谢芝勋 +6 位作者刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基范晴罗思思《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期323-327,共5页; 【目的】建立一种适用于H5亚型禽流感病毒(AIV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)可视化快速检测技术,为控制疫情扩散、减少经济损失争取了时间。【方法】根据GenBank中H5亚型AIV血凝素(HA)基因序列,设计一套针对HA基因6个区域的4条特异... 展开更多; 关键词 H5亚型禽流感病毒 RT—LAMP 可视化检测血凝素(ha)基因荧光试剂; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的表达及纯化被引量：9: 1; 作者李清州郝惠芳王丽赵绪永朱礼倩张丽萍邓瑞广张改平; 机构河南农业大学牧医工程学院河南省动物免疫学重点实验室; 出处《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第8期127-130,共4页; 基金国家"973"计划(2005CB523200); 文摘利用PCR方法从含禽流感病毒HA基因的质粒T-HA上扩增HA基因,再将其克隆到原核表达载体pET28a中,用E.coliBL21(DE3)原核表达,SDS-PAGE和Western-blot对表达蛋白进行鉴定。Western-blot结果表明,表达产物具有免疫学活性,蛋白的分子量约为60kD,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理,表达蛋白能与H5亚型AIV阳性血清特异性反应,具有良好的抗原性。ELISA检测结果表明,用此纯化蛋白作为包被抗原检测H5N1亚型AIV血凝素抗体具有良好的灵敏性。; 关键词禽流感病毒 H5N1亚型血凝素(ha) 原核表达; Keywords Avian influenza virus Subtype H5N1 Hernagglutinin（ha） Prokaryotic expression; 分类号 S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名2014-2015年商洛市流感病毒H3N2亚型血凝素(HA1)基因进化研究被引量：4: 2; 作者齐延亮史伟段勇波徐纪茹戴侃记张芳芳余鹏博; 机构西安交通大学医学部商洛市疾病预防控制中心陕西省疾病预防控制中心; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期6-11,共6页; 基金陕西省卫生计生科研基金项目(No.2016E010)资助; 文摘目的分析2014-2015年度商洛市流感监测病毒血凝素(HA)基因变异情况并研究与推荐疫苗的匹配性。方法收集2014-2015年商洛市流感监测平台用狗肾传代细胞(MDCK)培养分离的H3N2亚型毒株,利用RT-PCR方法扩增分离HA片段,进行核苷酸序列测定,应用clustax2.1软件进行序列比对后,用Mega6.0软件构建系统发育进化树,系统进化树采用Neighboring-joining方法进行分析。结果 2014-2015年度分离的流感H3N2毒株同源性在97.2%~99.9%,与推荐疫苗株A/Texas/50/2012同源性为97.3%~98.5%;将分离毒株的HA1基因氨基酸与疫苗株比较,发现2014年毒株主要抗原决定簇氨基酸变异点有B区Y159F、S198P;2015年主要抗原决定簇氨基酸变异点有A区G142R,B区S159F、S198P。结论2014-2015年度商洛市流感H3N2亚型毒株关键抗原决定簇已经出现改变,A/Texas/50/2012作为疫苗组分已经不是最佳,亟需对我国流感H3N2亚型疫苗组分进行更新,应密切关注流感H3N2基因进化趋势。; 关键词流感病毒 H3N2亚型血凝素(ha) 疫苗株基因进化; Keywords influenza virus H3N2 subtype hemagglutinin vaccine strain genetic evolution; 分类号 R373.1 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名2株云南H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因序列分析被引量：7: 3; 作者李佳佳李素华宋建领黄景军缪渊陈曦季佳; 机构西南林业大学云南省畜牧兽医科学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第3期873-883,共11页; 基金云南重要高原湿地迁徙性涉禽及区域家禽相关疫病监测研究云南省应用基础研究计划重点项目(2016FA013)。; 文摘在2019年1月-2019年6月对云南出现呼吸道疫病的57个鸡场进行H9亚型禽流感检测的基础上,选取石林和楚雄2个H9亚型禽流感阳性样品进行病毒分离。从分离的H9N2亚型禽流感病毒感染鸡胚尿囊液中提取总RNA,采用特异性引物经反转录PCR分别扩增HA和NA基因,PCR产物纯化后进行测序。序列比对及系统发育分析结果表明,云南2株H9N2毒株HA基因核苷酸序列同源性为94.2%,NA基因核苷酸序列同源性为93.6%,系统进化分析表明云南H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因均属于欧亚谱系中的类ADKHKY28097分支(Y280-like),ACKYN12019和ACKYN72019 HA基因之间的同源性为94.3%,与参考毒株ACKJX2448的同源性最高,为95.6%~98.5%,与中国流行的H9N2代表株和疫苗株同源性较低。HA蛋白333-340位裂解位点为PSRSSR↓GLF,具有低致病性禽流感病毒分子特征,受体结合位点均发生E198T和Q234L的突变,具有人样受体结合特征,在29、141、298、305、313、492位氨基酸有6个糖基化位点。ACKYN12019和ACKYN72019 NA基因同源性为93.6%,与Y280-like代表毒株的同源性分别为97.1%~97.5%和93.7%~94.6%,NA蛋白缺失63、64、65位氨基酸,在44、69、86、146、200、234位氨基酸处存在6个潜在的糖基化位点,NA蛋白红细胞结合(HB)位点分析发现,368-369、399-403、432位氨基酸处存在变异。研究结果显示,H9N2亚型禽流感病毒一直处于不断的变异之中,故应加强其监测与防控。; 关键词 H9N2禽流感病毒血凝素(ha)基因神经氨酸酶(NA)基因分子特征; Keywords H9N2 avian influenza virus hemagglutinin(ha)gene neuraminidase(NA)gene molecular characteristics; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于血凝素裂解位点的DNA条形码在A型流感病毒分型中的应用被引量：1: 4; 作者孟慧芝孙涛岳志芹王文斌; 机构山东出入境检验检疫局山西农业大学; 出处《中国动物检疫》 CAS 2015年第7期55-61,共7页; 基金国家科技支撑计划(2012BAK11B00); 文摘为了建立一种快速鉴别AIV的HA亚型的RT-PCR方法,本研究探讨了流感病毒血凝素裂解位点基因作为DNA条形码对A型流感病毒进行亚型鉴定的可行性。通过生物信息学方法对16种A型流感病毒的血凝素基因全长进行比对,在HA裂解位点的两端高度保守区设计一对DNA条形码引物,RT-PCR扩增获得约170bp的核苷酸片段。利用MEGA5.0软件构建N-J系统树并计算亚型间及亚型内平均遗传距离。结果显示,不同A型流感病毒裂解位点氨基酸具有单系性,每一亚型可分别形成各自独立的分支。不同亚型间平均遗传距离为0.277,相同亚型内平均遗传距离0.032。研究表明,利用DNA条形码技术可在A型流感病毒分型方面进行有效的分子分类鉴定。; 关键词 A型流感病毒血凝素(ha) DNA条形码亚型鉴定; Keywords influenza A virus hemagglutinin （ha） DNA barcoding technology subtype; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名HA基因真核表达载体构建及在293T细胞中的表达被引量：1: 5; 作者李方琳王慧慧粟雨芯马忠仁; 机构西北民族大学生物医学研究中心西北民族大学生命科学与工程学院; 出处《甘肃畜牧兽医》 2022年第3期37-40,共4页; 文摘目的:为后续进一步研究H1N1病毒DNA疫苗对小鼠免疫系统的影响提供技术支撑。方法:应用PCR方法体外扩增血凝素(HA)基因全序列,并利用pcDNA3.1(+)载体构建甲型流感病毒(H1N1)血凝素(HA)的真核表达质粒(pcDNA3.1(+)-HA),经双酶切鉴定后,转染293T细胞,通过RT-PCR和Western blot方法观察该重组质粒在293T细胞中的表达情况。结果表明,pcDNA3.1(+)-HA重组质粒构建成功;与空白及阴性对照相比,转染293T细胞48 h后的HA mRNA水平显著上升(2.4×10^(3),P<0.0001),并能在293T细胞中成功表达,为深入研究H1N1病毒DNA疫苗对小鼠免疫系统的影响奠定了基础。; 关键词血凝素(ha) 质粒构建真核表达 DNA疫苗; 分类号 R392 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名H7亚型禽流感病毒HA蛋白在Sf9中的表达与纯化: 6; 作者刘郁夫郝文茜冯美莹欧阳征亮陈瑞爱; 机构肇庆学院生命科学学院岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心农业农村部兽用生物制品工艺技术重点实验室/广东省兽用生物制品技术研究与应用企业重点实验室/肇庆大华农生物药品有限公司; 出处《广东农业科学》 CAS 2023年第10期149-156,共8页; 基金广东省重点领域研发计划项目(2021B0707010009) 广东省普通高校特色创新项目(2022KTSCX148) 肇庆学院博士启动项目(21010117)。; 文摘【目的】真核表达H7亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)HA蛋白,为进一步制备H7亚型HIV亚单位疫苗,评价其免疫原性提供基础。【方法】首先根据草地贪夜蛾卵巢细胞(Spodoptera frugiperda clone 9,Sf9)的密码子偏嗜性,优化并合成H7亚型AIV的HA序列,将其克隆至穿梭质粒pFastBac1中;接着将重组HA基因的杆状病毒质粒转染至Sf9中,通过间接免疫荧光和Westernblots试验鉴定重组病毒是否拯救成功;再通过SYBRgreen染料法荧光定量PCR试验,建立基于gp64基因的杆状病毒qPCR定量方法,筛选出在Sf9中表达HA重组蛋白的最佳感染复数和孵育时间;最后通过His镍株亲和纯化HA重组蛋白。【结果】表达H7亚型AIV HA蛋白的重组杆状病毒在Sf9盲传3代后,Sf9开始出现肿胀、脱落、死亡等细胞病变,表明重组杆状病毒拯救成功;通过间接免疫荧光和Western blots试验发现,Sf9内出现可与HA重组蛋白特异性结合的绿色荧光信号,特异性结合的HA重组蛋白条带大小约70 kD左右,与预期相符,且HA重组蛋白可与H7亚型AIV阳性血清反应,表明HA重组蛋白表达成功;以构建的pUC19-gp64质粒为标准,建立基于gp64基因的杆状病毒qPCR检测方法,该方法在1×103~1×108 copy/μL间呈现良好的线性关系,标准曲线的相关系数R2=0.993;利用qPCR检测方法对杆状病毒液滴度进行定量,并通过Western blots试验筛选HA蛋白表达的最佳感染复数和孵育时间,结果显示以10MOI的比例接种Sf9,孵育72h,蛋白表达效果最好;通过His镍株亲和纯化HA重组蛋白,蛋白浓度为0.268mg/mL,鸡红细胞凝集效价为4log2。【结论】本试验在Sf9中成功表达并纯化H7亚型AIVHA蛋白,并建立与之相应的杆状病毒荧光定量PCR检测方法,可为进一步评价H7亚单位疫苗的免疫原性提供参考。; 关键词 H7亚型禽流感病毒血凝素蛋白(ha) 昆虫细胞杆状病毒基因表达蛋白纯化; Keywords H7 subtype avain influenza viruses hemagglutinin(ha) insect cell baculovirus gene expression protein purification; 分类号 S855.3 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名H5亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测技术的建立被引量：7: 7; 作者彭宜谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基范晴罗思思; 机构广西兽医研究所/广西畜禽疫苗新技术重点实验室; 出处《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期323-327,共5页; 基金广西科技攻关项目(桂科攻1222003-2-4) 广西特聘专家专项项目(2011B020) +1 种基金广西基本科研业务费专项项目(桂兽研专项09-2); 文摘【目的】建立一种适用于H5亚型禽流感病毒(AIV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)可视化快速检测技术,为控制疫情扩散、减少经济损失争取了时间。【方法】根据GenBank中H5亚型AIV血凝素(HA)基因序列,设计一套针对HA基因6个区域的4条特异性引物,在反应之前向反应液中加入荧光试剂(Calcein/MnCl2混合液),然后对反应条件和体系进行优化。【结果】优化的RT-LAMP技术操作简便迅速,常规水浴锅中50min可完成,能特异性地检测出H5亚型AIV,但对其他HA亚型AIV、禽呼吸道病原体无交叉扩增反应,灵敏度是常规RT-PCR的10倍;反应结束后无需打开反应管盖,即可根据反应液的颜色变化对结果进行判定。【结论】建立的H5亚型AIVRT-LAMP可视化检测技术具有简便、快速、特异等特点,可在设备有限的基层兽医站及养殖场对H5亚型AIV进行快速初步诊断。; 关键词 H5亚型禽流感病毒 RT—LAMP 可视化检测血凝素(ha)基因荧光试剂; Keywords H5 subtype avian influenza virus RT-LAMP visual detection hemagglutinin（ha） gene fluorescent reagent; 分类号 S858.31 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的表达及纯化	李清州郝惠芳王丽赵绪永朱礼倩张丽萍邓瑞广张改平	《河南农业科学》 CSCD 北大核心	2008	9	在线阅读下载PDF 职称材料
2	2014-2015年商洛市流感病毒H3N2亚型血凝素(HA1)基因进化研究	齐延亮史伟段勇波徐纪茹戴侃记张芳芳余鹏博	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2018	4	在线阅读下载PDF 职称材料
3	2株云南H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因序列分析	李佳佳李素华宋建领黄景军缪渊陈曦季佳	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2020	7	在线阅读下载PDF 职称材料
4	基于血凝素裂解位点的DNA条形码在A型流感病毒分型中的应用	孟慧芝孙涛岳志芹王文斌	《中国动物检疫》 CAS	2015	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	HA基因真核表达载体构建及在293T细胞中的表达	李方琳王慧慧粟雨芯马忠仁	《甘肃畜牧兽医》	2022	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	H7亚型禽流感病毒HA蛋白在Sf9中的表达与纯化	刘郁夫郝文茜冯美莹欧阳征亮陈瑞爱	《广东农业科学》 CAS	2023	0	在线阅读下载PDF 职称材料
7	H5亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测技术的建立	彭宜谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基范晴罗思思	《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心	2013	7	在线阅读下载PDF 职称材料