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表达H9N2亚型禽流感病毒血凝素HA1重组乳酸乳球菌的构建及免疫效果评价
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作者 王志悦 李欣蕊 +8 位作者 崔子扬 贺志新 孙嘉咛 王许刚 王瑞 李春红 徐明举 张瑞华 徐彤 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期48-54,共7页
本研究以H9N2亚型禽流感病毒RNA为模板,利用RT-PCR获得960 bp的血凝素HA1基因,将其克隆至乳酸菌表达载体pMG36e,构建pMG36e-HA1重组质粒;pMG36e-HA1电转乳酸乳球菌MG1363感受态细胞获得重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,应用SDS-PAGE、W... 本研究以H9N2亚型禽流感病毒RNA为模板,利用RT-PCR获得960 bp的血凝素HA1基因,将其克隆至乳酸菌表达载体pMG36e,构建pMG36e-HA1重组质粒;pMG36e-HA1电转乳酸乳球菌MG1363感受态细胞获得重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,应用SDS-PAGE、Western blot鉴定HA1在重组乳酸菌的表达情况;将重组乳酸乳球菌口服免疫10日龄雏鸡,每只鸡口服2×10~9 CFU菌液,共免疫2次;分别在免疫后第7、14天采集血清与气管灌洗液,并检测其抗体与细胞因子水平。结果显示:成功构建出重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1,且重组乳酸乳球菌成功表达血凝素HA1蛋白,该蛋白能够与H9亚型禽流感阳性血清发生特异性免疫结合反应;雏鸡口服免疫后,其血清与气管灌洗液中抗体与细胞因子水平与对照组相比明显上升。本研究表明,构建的重组乳酸乳球菌MG1363-pMG36e-HA1能够有效刺激免疫应答,口服免疫雏鸡后能够获得良好的免疫效果。 展开更多
关键词 H9N2禽流感病毒 血凝素 乳酸乳球菌
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低温对红耳龟血液指标及植物血凝素反应的影响
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作者 张一帆 林涵语 +3 位作者 李崧铭 伍亮 刁迎珠 张志强 《水生态学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第4期148-154,共7页
探究低温对红耳龟(Trachemys scripta elegans)免疫功能和应激反应能力的影响,揭示红耳龟适应低温环境的生理学和免疫学基础,为深入了解其入侵生物学提供基础资料。采用活体背甲下静脉窦采血技术,测定了6℃、17℃和26℃条件下处理1、5和... 探究低温对红耳龟(Trachemys scripta elegans)免疫功能和应激反应能力的影响,揭示红耳龟适应低温环境的生理学和免疫学基础,为深入了解其入侵生物学提供基础资料。采用活体背甲下静脉窦采血技术,测定了6℃、17℃和26℃条件下处理1、5和10 d时血液中各型白细胞百分比及嗜异性粒细胞与淋巴细胞的比值(ratio of heterophils to lymphocytes,H/L),以及第10天采血后植物血凝素(phytohemagglutinin-P,PHA-P)反应的变化。结果显示:(1)随着温度下降,第1天只有嗜碱性粒细胞的百分比显著升高(P<0.05),此差异在第5天和第10天消失(P>0.05);第5天,嗜酸性粒细胞的百分比和H/L先升后降,淋巴细胞的百分比先降后升,单核细胞的百分比下降(P<0.05);第10天,嗜酸性粒细胞的百分比上升,淋巴细胞、嗜异性粒细胞和单核细胞的百分比,以及H/L下降(P<0.05);(2)随着处理天数延长,除嗜碱性粒细胞的百分比无组内差异外(P>0.05),其他类型白细胞的百分比及H/L都有组内差异(P<0.05);(3)6℃组、17℃组和26℃组对PHA-P的反应分别在注射后48 h、24 h和48 h达到峰值,但组间差异不显著(P>0.05)。红耳龟通过调整血液中嗜酸性粒细胞等不同类型白细胞的百分比、下降的应激反应能力和提前发生反应的免疫应答来适应低温的短期胁迫。 展开更多
关键词 红耳龟 低温 淋巴细胞 嗜酸性粒细胞 植物血凝素 应激
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犬瘟热病毒血凝素蛋白功能研究进展 被引量:1
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作者 胡焱 吴姣榕 《现代畜牧兽医》 2024年第5期82-86,共5页
犬瘟热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)感染动物导致发病的一种烈性传染病,宿主范围广泛,感染发病的动物出现复杂的临床症状,死亡率高。血凝素(H)蛋白是CDV结构蛋白之一,具有主要的特异性抗原位点,可与信号传导淋巴细胞激活分子(SLAM)或上皮细... 犬瘟热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)感染动物导致发病的一种烈性传染病,宿主范围广泛,感染发病的动物出现复杂的临床症状,死亡率高。血凝素(H)蛋白是CDV结构蛋白之一,具有主要的特异性抗原位点,可与信号传导淋巴细胞激活分子(SLAM)或上皮细胞黏附蛋白Nectin-4发生相互作用,介导病毒的吸附、出芽等,还与CDV跨动物种属传播具有密切联系。文章对CDV H蛋白功能及特点进行概述,围绕H蛋白对CDV的致病性及疫苗研究进展进行了讨论,以期为H蛋白研究及CD防控提供参考。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 血凝素蛋白 信号传导淋巴细胞激活分子(SLAM) Nectin-4 跨物种传播
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单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的研究
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作者 汪力亚 汪美先 +1 位作者 王海涛 姜绍谆 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第1期8-13,共6页
用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈株感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,特此粗制血箍素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G1与Sepherose 4B偶联的免疫吸附柱,获得纯化HFRS病毒血凝素抗原具有较高的血凝滴度和良好的免疫原性.用SDS—PAGE和Weste... 用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈株感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,特此粗制血箍素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G1与Sepherose 4B偶联的免疫吸附柱,获得纯化HFRS病毒血凝素抗原具有较高的血凝滴度和良好的免疫原性.用SDS—PAGE和Western-blot技术分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯他的正常鼠脑抗原比较,证明谊特异性血凝素抗原分子量为5×10^4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果育10株McAb可阻断McAb3G1与其结合,其抗碌决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一蛋白上。以上结果表明,该SOK血疑素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。 展开更多
关键词 单克隆抗体 亲和层析法 血凝素抗原 肾综合征出血热病毒血凝素
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2009年新型甲型H1N1流感病毒血凝素基因进化分析 被引量:23
5
作者 谢佳新 殷建华 +5 位作者 李淑华 鹿文英 韩一芳 韩磊 张宏伟 曹广文 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期613-617,共5页
目的:探讨2009年新型甲(A)型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因与世界各地不同年代分离的A/H1N1代表株HA基因的进化关系。方法:从NCBI数据库下载2009年新型A/H1N1亚型流感病毒的HA基因序列以及以往流行的人、猪和禽的A/H1N1亚型流感病毒参考序... 目的:探讨2009年新型甲(A)型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因与世界各地不同年代分离的A/H1N1代表株HA基因的进化关系。方法:从NCBI数据库下载2009年新型A/H1N1亚型流感病毒的HA基因序列以及以往流行的人、猪和禽的A/H1N1亚型流感病毒参考序列,采用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 4.0(MEGA4.0)软件进行序列比对和构建系统进化树,并分别比较2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因与北美地区、欧洲地区、亚洲地区A/H1N1流感病毒HA基因编码蛋白的氨基酸序列。结果:不同时期人A/H1N1亚型流感病毒代表株HA基因进化分析显示:2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因与1976~2007年北美地区分离的7株人A/H1N1亚型流感病毒具有较高的同源性,与欧洲和亚洲地区的同源性较低。不同种属间A/H1N1亚型流感病毒HA基因进化分析显示:2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因与1998和2007年北美地区分离的A/H1N1猪流感病毒的HA基因进化关系较近,与欧洲及亚洲地区分离的A/H1N1猪流感病毒及A/H1N1禽流感病毒进化关系较远。氨基酸比对结果显示2009年新型A/H1N1流感病毒HA基因的重要抗原位点与北美地区分离的A/H1N1猪流感病毒相近,与欧洲和亚洲地区分离的A/H1N1猪流感病毒及人类流感病毒疫苗株相比变化较大。结论:2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因可能是北美地区甲型H1N1猪流感病毒长期进化并与该地区人A/H1N1流感病毒部分基因片段重排的结果,对人H1N1甲型流感病毒疫苗可能并不敏感。 展开更多
关键词 H1N1甲型流感病毒 血凝素基因 进化 基因重排
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2017—2018年广州市H3N2流感病毒流行及血凝素基因分子特征分析 被引量:17
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作者 曹蓝 鲁恩洁 +4 位作者 陈艺韵 马钰 李魁彪 陆剑云 狄飚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期899-904,921,共7页
目的对广州市H3N2流感病毒进行基因变异和进化分析,为H3N2流感科学防控提供科学依据。方法对广州市2017年1月-2018年9月流感监测标本进行H3N2病毒检测和分离,并对HA基因进行测序,通过生物信息学软件分析病毒变异和进化特点。结果所监测... 目的对广州市H3N2流感病毒进行基因变异和进化分析,为H3N2流感科学防控提供科学依据。方法对广州市2017年1月-2018年9月流感监测标本进行H3N2病毒检测和分离,并对HA基因进行测序,通过生物信息学软件分析病毒变异和进化特点。结果所监测的8 535份标本中,检出H3N2流感阳性标本386份,阳性率为4.52%。对其中16株分离株HA基因测序结果显示,与同年度疫苗推荐株A/Hong Kong/4801/2014相比,2017年广州H3N2病毒A 区抗原位点变异频率较高,多发生于140位、144位和150位,其中有7株病毒发生新抗原漂移,变异毒株占比43.75%。受体结合位点变异主要发生在前壁,位于T131K位和T135K(N)位。糖基化位点变异同样多发生于A区抗原位点和受体结合位点前壁。2017年广州H3N2流感病毒均位于3C.2a分支,但分支内又进一步进化形成3个不同的小流行分支,包括3C.2a1分支,以及与2016年北京、2017年美国分离株亲缘相近的另外两个小分支。结论 2017年广州H3N2流感病毒HA蛋白重要氨基酸位点的变异表现遗传多态性,特别是在抗原性上可能发生了较大变异。在基因进化上表现为多样性和复杂性,呈现多分支进化特点。因此有必要密切监测流行毒株的进化趋势,以期及时对疫苗株的匹配性进行有效评估。 展开更多
关键词 H3N2流感病毒 血凝素 基因变异 基因进化
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H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞表位预测及抗原性分析 被引量:16
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作者 南文龙 金宁一 +5 位作者 鲁会军 赵翠青 田明尧 谭磊 张金双 白靓 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期630-633,637,共5页
目的:预测H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性。方法:依据近年H5N1亚型禽流感病毒流行趋势,下载得到相关HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特... 目的:预测H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性。方法:依据近年H5N1亚型禽流感病毒流行趋势,下载得到相关HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特异性。通过BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清,初步鉴定候选表位抗原性。结果:综合多项预测及空间构象模拟结果,我们获得了三条候选Th和B细胞表位,分别为HA141~155、HA206~223、HA302~316。候选表位处于H5N1亚型禽流感HA1蛋白序列上相对保守的区域内,且与目前流行的H5N1亚型禽流感病毒HA相应区域具有较好的一致性。而不同候选表位在BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清反应中显示了不同抗体结合能力,预示了其成为功能表位的可能。结论:所筛选的表位具有成为H5N1亚型禽流感病毒HATh和B细胞相关抗原表位的可能。本研究为深入揭示流感病毒感染与免疫机制,H5N1亚型禽流感功能表位认知及表位疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素 H5N1 抗原表位
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H1N1亚型猪流感病毒中国分离株血凝素基因分子演化的研究 被引量:20
8
作者 陈君彦 李海燕 +3 位作者 申之义 陈化兰 于康震 毕英佐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期13-17,共5页
对 2 0 0 1年中国华南及东北地区的 15株H1N1亚型猪流感病毒 (SIV)分离株的血凝素 (HA)基因进行了序列测定和分析 ,并绘制了进化树。研究结果表明 ,15株H1N1SIV和HA基因核苷酸全长为 1778bp ,共编码 5 6 6个氨基酸 ;而且 ,15株H1N1亚型... 对 2 0 0 1年中国华南及东北地区的 15株H1N1亚型猪流感病毒 (SIV)分离株的血凝素 (HA)基因进行了序列测定和分析 ,并绘制了进化树。研究结果表明 ,15株H1N1SIV和HA基因核苷酸全长为 1778bp ,共编码 5 6 6个氨基酸 ;而且 ,15株H1N1亚型SIV的HAI蛋白在 10、11、2 3、87、2 87位都存在高度保守的糖基化位点 ,此外 ,在 2 76位多了一个“_NTT_”糖基化位点 ,与参考毒株SW /IW / 93/ 0 1一致 ,这可能是近期H1N1亚型SIV的一个分子特征。本研究进一步发现 ,15株H1N1亚型SIV的HA基因切割位点氨基酸组成为IPSIQSR↓G ,具有非高致病力毒株分子特征 ;而其受体结合位点在HA蛋白上第 2 2 6位是Q ,第 2 2 8位是G ,可能具有感染禽的潜力。经同源性比较 ,15株H1N1亚型SIV的HA基因与古典型H1N1猪谱系中的WIS/ 4 75 4 / 94的同源性相对最高 ,核苷酸和氨基酸序列同源性分别达到 95 7%~ 96 1%和96 5 %~ 97 2 %。由同源性比较结果和进化树分析可见 。 展开更多
关键词 H1N1亚型 猪流感病毒 中国分离株 血凝素基因 分子演化 序列分析
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鸡源株与人源株H9N2流感病毒血凝素受体结合位点氨基酸比较与分析 被引量:15
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作者 刘金华 吴清民 +2 位作者 陈福勇 郭玉璞 Hiroshi Kida 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期416-418,共3页
H9N2病毒可以感染多种禽类和哺乳动物 ,包括人类。流感病毒血凝素受体结合位点的氨基酸可以影响受体结合特性。为了解鸡源株与人源株H9N2病毒受体结合部氨基酸的差异 ,作者对二者进行了比较与分析 ,结果表明 ,鸡源株与人源株血凝素受体... H9N2病毒可以感染多种禽类和哺乳动物 ,包括人类。流感病毒血凝素受体结合位点的氨基酸可以影响受体结合特性。为了解鸡源株与人源株H9N2病毒受体结合部氨基酸的差异 ,作者对二者进行了比较与分析 ,结果表明 ,鸡源株与人源株血凝素受体结合部位氨基酸的第 137、183、190、2 2 6位点存在差异 ,鸡源株在这些位点分别为K、N、AorVorT、LorQ ,而人源株则分别为R、H、E、L。虽然尚不清楚这些位点的改变对病毒与细胞亲和力及宿主范围的影响 ,但由于H9N2在我国养鸡业的普遍存在 ,加强H9N2病毒的分子流行病学监测有重要意义。 展开更多
关键词 禽流感 H9N2 血凝素 受体结合位点
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植物血凝素对兴国红鲤头肾和脾脏的比较组织学研究 被引量:10
10
作者 胡成钰 洪一江 +2 位作者 王军花 余志坚 林光华 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期489-493,共5页
PHA注射前后兴国红鲤头肾和脾脏结构基本相同。红鲤头肾有被膜 ,为淋巴样组织 ,由许多血管、血窦和淋巴索组成。脾脏是实质性器官 ,淋巴细胞聚集成团 ,有弥散的胰腺组织渗入。注射PHA后头肾和脾脏内的大淋巴细胞、小淋巴细胞、巨噬细胞... PHA注射前后兴国红鲤头肾和脾脏结构基本相同。红鲤头肾有被膜 ,为淋巴样组织 ,由许多血管、血窦和淋巴索组成。脾脏是实质性器官 ,淋巴细胞聚集成团 ,有弥散的胰腺组织渗入。注射PHA后头肾和脾脏内的大淋巴细胞、小淋巴细胞、巨噬细胞以及原始型细胞显著增加 ,而粒细胞数量变化不明显。 展开更多
关键词 植物血凝素 兴国红鲤 头肾 脾脏 比较组织学研究
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我国与韩国禽流感H9N2病毒血凝素分子特性的区别 被引量:8
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作者 刘金华 吴清民 +3 位作者 史为民 陈福勇 郭玉璞 Hiroshi Kida 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期79-82,共4页
中国与韩国都发生了H9N2亚型禽流感,且都对养禽业造成了严重损失。国际上有不少学者认为韩国的H9N2亚型流感是由中国通过禽肉及其相关产品的输入而引起。本研究针对这一情况对从中国大陆分离的H9N2病毒和自GeneBank读取的韩国H9N2病毒... 中国与韩国都发生了H9N2亚型禽流感,且都对养禽业造成了严重损失。国际上有不少学者认为韩国的H9N2亚型流感是由中国通过禽肉及其相关产品的输入而引起。本研究针对这一情况对从中国大陆分离的H9N2病毒和自GeneBank读取的韩国H9N2病毒的血凝素核苷酸序列进行了比较分析,结果表明两者属于不同的进化分支。所有中国H9N2病毒的血凝素裂解位点都为-RSSR/G-,而韩国H9N2病毒的血凝素裂解位点为-ASVR/G-、-ASYR/G-或-ASGR/G-。韩国H9N2病毒血凝素的受体结合位点的氨基酸在第183、190和226位点分别H、E和Q;而中国毒株的变异较大,在第183位点全部为N,190位点为A、T或V,第226位点为L或Q。因此,中韩两国的H9N2病毒血凝素分子特性显著不同。 展开更多
关键词 中国 韩国 禽流感 H9N2病毒 血凝素 分子特性
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中国大陆H7N9禽流感病毒流行病学特征及血凝素和神经氨酸酶的分子进化 被引量:15
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作者 李鹏媛 徐浩 +4 位作者 顾豪高 马蒙蒙 陆家海 郝元涛 张定梅 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期932-940,共9页
【目的】对中国大陆人感染H7N9禽流感的流行病学特征进行描述分析,并对不同地区、不同时间、不同宿主来源的H7N9禽流感血凝素及神经氨酸酶基因进行分子进化分析,为H7N9禽流感的科学防控提供依据。【方法】汇总各公开网站发布的人感染H... 【目的】对中国大陆人感染H7N9禽流感的流行病学特征进行描述分析,并对不同地区、不同时间、不同宿主来源的H7N9禽流感血凝素及神经氨酸酶基因进行分子进化分析,为H7N9禽流感的科学防控提供依据。【方法】汇总各公开网站发布的人感染H7N9禽流感病例信息,分析人感染H7N9禽流感的流行病学特点;从Genbank筛选H7N9禽流感毒株的核酸序列及氨基酸序列。利用MEGE5.0、Bioedit等软件构建进化树,分析核苷酸及所编码蛋白关键位点的变异情况。【结果】全国共报告451例人感染H7N9禽流感病例,病死率为19.96%,男女性别比约为2.25:1;60岁以上(含60岁)病例占全部病例的45.76%;浙江,广东,江苏,上海四省市报告病例较多;2013年4月前后和2014年1月至2月为两个发病高峰。进化树显示H7N9禽流感毒株分为美洲来源支和欧亚来源支,分离的时间地点越接近进化关系越近。自韩国2011年野鸟中分离的H7N9毒株的NA基因与中国2013年及2014年分离的H7N9毒株NA基因进化关系较近。广东第一例人H7N9禽流感的NA基因与2013年5月分离自山东环境中的H7N9禽流感的NA基因及2013年4月来自浙江人感染H7N9禽流感的NA基因的同源性较高。所有人感染H7N9毒株NA茎区69~73位缺失了QISNT序列。【结论】老人及男性是感染H7N9禽流感的高危人群,冬春季是疫情高发期。病例集中分布于东南沿海地区。分子进化分析表明H7N9禽流感毒株有时间和空间的聚集性。时间空间距离越短则进化关系越接近。广东地区H7N9禽流感病毒可能是北方的候鸟迁徙所致,中国H7N9毒株NA片段可能来自韩国禽类携带的毒株。人感染H7N9禽流感病毒的毒力及耐药性尚未发生变异。NA茎区69—73位缺失QISNT序列可能与该病毒具有感染人类的能力有关。 展开更多
关键词 禽流感 H7N9 进化 血凝素 神经氨酸酶
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植物血凝素对鸡免疫功能的影响 被引量:14
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作者 莫菲 许巧丽 +1 位作者 张军忍 江善祥 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期36-40,共5页
选用罗曼蛋公鸡270羽,随机分为9组,连续3次肌肉注射不同剂量植物血凝素(PHA)后,对其血清蛋白、免疫器官指数及新城疫的攻毒保护效果进行检测.结果表明:肌注2.4 mg/kg.bw PHA组与对照组相比,可显著提高鸡的血液生化指标(P<0.05),极显... 选用罗曼蛋公鸡270羽,随机分为9组,连续3次肌肉注射不同剂量植物血凝素(PHA)后,对其血清蛋白、免疫器官指数及新城疫的攻毒保护效果进行检测.结果表明:肌注2.4 mg/kg.bw PHA组与对照组相比,可显著提高鸡的血液生化指标(P<0.05),极显著提高对鸡新城疫的保护率(P<0.01);肌注1.2 mg/kg.bw PHA组与对照组相比,可显著提高胸腺指数和新城疫攻毒保护率(P<0.05). 展开更多
关键词 植物血凝素 免疫功能 新城疫
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2019-2020年山东省H3N2流感病毒抗原性及血凝素基因特征分析 被引量:9
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作者 吴巨龙 吕健 +4 位作者 寇增强 宋绍霞 孙林 何玉洁 刘倜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期910-915,共6页
目的了解2019-2020年流感监测年度山东省分离的H3N2亚型流感病毒抗原性及血凝素(hemagglutinin,HA)基因遗传进化规律与氨基酸变异情况。方法用免疫雪貂后的抗血清进行红细胞凝集抑制试验,对2019年4月至2020年3月山东省分离的40株H3N2亚... 目的了解2019-2020年流感监测年度山东省分离的H3N2亚型流感病毒抗原性及血凝素(hemagglutinin,HA)基因遗传进化规律与氨基酸变异情况。方法用免疫雪貂后的抗血清进行红细胞凝集抑制试验,对2019年4月至2020年3月山东省分离的40株H3N2亚型流感毒株进行抗原性分析,并对其中19株待检病毒的HA基因进行序列测定及分析。结果抗原性分析结果显示检测的H3N2亚型流感病毒中仅仅35%(14/40)与疫苗株A/Kansas/14/2017抗原性类似。系统进化树显示,19株H3N2亚型流感病毒分离株血凝素基因在进化树上全部属于3C.2a分支,与处于3C.3a分支的疫苗株A/Kansas/14/2017亲缘关系较远;与疫苗株相比,所有待检毒株A抗原决定簇有3个位点,B抗原决定簇有2个位点发生改变;受体结合位点均发生T135K位和S137F位变异;19株分离株全部发生133位糖基化位点缺失。结论抗原性分析及HA基因序列分析结果显示,WHO推荐的2019—2020年疫苗株保护效果有可能不理想。应继续密切关注H3N2亚型流感病毒的流行与基因变异情况,为流感病毒疫苗株推荐及防控提供科学依据。 展开更多
关键词 H3N2流感病毒 血凝素 抗原性 基因特征
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云南边境禽流感H5N1亚型病毒血凝素基因分子结构特征分析 被引量:8
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作者 叶丛华 张文东 +3 位作者 宋建领 范泉水 张应国 张富强 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期101-106,共6页
目的分析2003-2008年云南边境禽流感H5N1亚型病毒血凝素(HA)基因分子结构特征。方法对2003-2008年在云南边境采集境外禽类样品420份,做H5/N1亚型特异性RT-PCR及多重RT-PCR检测,对阳性样品中H5N1病毒HA基因进行RT-PCR扩增,克隆至pMD18-T... 目的分析2003-2008年云南边境禽流感H5N1亚型病毒血凝素(HA)基因分子结构特征。方法对2003-2008年在云南边境采集境外禽类样品420份,做H5/N1亚型特异性RT-PCR及多重RT-PCR检测,对阳性样品中H5N1病毒HA基因进行RT-PCR扩增,克隆至pMD18-T载体测序,并与国内外已知参考毒株序列进行比对及系统发育分析。结果21份代表性病毒样品HA裂解位点序列存在4种不同排列方式,均具有高致病性禽流感病毒分子结构特征;HA受体结合位点、糖基化位点及表位关键性氨基酸位点存在变异;系统发育分析表明可划分为5个不同进化分枝(1、2.4、2.3.2、2.3.4、7)。结论2003-2008年云南边境外H5N1病毒间具有遗传差异,进化分枝2.3.4毒株为当地流行的优势毒株,不同进化分枝或同一进化分枝不同毒株HA基因存在变异。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5N1亚型 血凝素 分子特征 进化分枝
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H1N1猪流感广东株血凝素基因的克隆与序列分析 被引量:7
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作者 胡永浩 姚学萍 +3 位作者 李海燕 赵有淑 杨焕良 陈化兰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期172-176,共5页
用RT- PCR方法扩增H1N1亚型猪流感病毒广东分离株 A/Swine/GuangDong/711/2001 HA基因,对其进行了克隆和测序。结果显示,HA基因全长 1 771 bp,共编码 579 个氨基酸。A/Swine/GuangDong/711/2001HA基因编码的氨基酸序列中有 8 个糖基化... 用RT- PCR方法扩增H1N1亚型猪流感病毒广东分离株 A/Swine/GuangDong/711/2001 HA基因,对其进行了克隆和测序。结果显示,HA基因全长 1 771 bp,共编码 579 个氨基酸。A/Swine/GuangDong/711/2001HA基因编码的氨基酸序列中有 8 个糖基化位点,5 个位于 HA1 基因的第 27、28、40、104 和 287 位点,3 个位于HA2基因的21、153和213位点。与H1N1亚型猪流感经典毒株比较后发现,血凝素糖基化位点并不是高度保守的。将A/Swine/GuangDong/711/2001与自GenBank读取的1918年人流感毒株 A/South Carolina/1/18、1991 年人流感毒株A/MD/12/91和1997年猪流感毒株 A/Swine/Wisconsin/238/97 等进行核苷酸同源性比较分析,A/Swine/GuangDong/711/2001与A/South Carolina/1/18、A/MD/12/91和 A/Swine/Wisconsin/238/97 等毒株的核苷酸同源性分别为 93. 9%、94. 7%和 93. 9%。从系统发生树来看, A/Swine/GuangDong/711/2001 与 A/SouthCarolina/1/18和A/Swine/Wisconsin/238/97的亲缘关系相近。 展开更多
关键词 猪流感病毒 HA基因 位点 毒株 广东株 l基因 序列分析 人流感 血凝素基因 亚型
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2017年江苏省H3N2流感病毒血凝素与神经氨酸酶分子特征及耐药性分析 被引量:11
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作者 王慎骄 祁贤 +5 位作者 邓斐 彭杰夫 余慧燕 秦圆方 戴启刚 鲍倡俊 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第12期1254-1258,共5页
目的流行性感冒(简称流感)耐药性监测目前已成为流感防控中的一项重要组成部分。文中旨在分析江苏省2017年H3N2亚型流感病毒基因变异及耐药性情况。方法从江苏省13个流感监测点流感毒株中选取17株H3N2亚型毒株,其中12株为2017年夏季高... 目的流行性感冒(简称流感)耐药性监测目前已成为流感防控中的一项重要组成部分。文中旨在分析江苏省2017年H3N2亚型流感病毒基因变异及耐药性情况。方法从江苏省13个流感监测点流感毒株中选取17株H3N2亚型毒株,其中12株为2017年夏季高峰期分离株,4株为非高峰期分离株,1株为2016年度分离株(作为1株参考株)。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对H3N2亚型流感毒株进行序列测定,从全球共享流感序列网站GISAID下载构建甲型H3N2亚型流感毒株HA(血凝素)系统进化树的骨架参考序列,使用MAGE7.0软件进行序列比对和系统进化分析。通过神经氨酸酶(NA)抑制试验,分析病毒耐药情况。结果16株病毒HA和NA基因核苷酸相似性分别为98.9%~99.6%、99.2%~99.3%,同源性较高。HA进化树分析显示,16株分离株中15株位于3C.2a分支,13株病毒3个C3.2a1分支关键位点(N171K、I406V和G484E)未发生变化,另外3株毒株关键位点发生变异,1株毒株发生该标志性氨基酸变异,1株毒株发生(N121K、T135K)的免疫相关突变。与2017-2018年度疫苗株推荐株A/HongKong/4801/2014相比,16株分离株抗原位点突变包括:A138S 1株,R142K 2株,R142K、R261Q 9株,R142KS144R、R261Q 1株,R142K、S144K、R261Q 1株。16株病毒的NA片段分析未发现NA耐药位点。基因型和表型分析表明,16株H3N2亚型流感毒株对抗流感药物奥司他韦及扎那米韦均敏感,均发现与M2基因耐药有关A30T、S31N分子位点的改变。结论2017年江苏H3N2亚型流行株HA和NA基因表现出异质性特点及发生基因重配现象,随着H3N2流感病毒变异持续发生,应密切监测病毒遗传进化和耐药基因的变化情况。 展开更多
关键词 流感病毒 H3N2亚型 血凝素 神经氨酸酶 基因特性 耐药性分析
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江苏省2013年甲型H1N1(09pdm)流感病毒血凝素和神经氨酸酶分子特征分析 被引量:14
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作者 资海荣 郭艳 +5 位作者 邓斐 余慧燕 王慎骄 汤奋扬 祁贤 卫平民 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期812-822,共11页
目的 :分析江苏省2013年甲型H1N1(09pdm)流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)变异情况,分析其遗传进化特征。方法 :按照流感样病例定义,收集江苏省各哨点医院流感样病例标本,阳性样本经病毒分离培... 目的 :分析江苏省2013年甲型H1N1(09pdm)流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)变异情况,分析其遗传进化特征。方法 :按照流感样病例定义,收集江苏省各哨点医院流感样病例标本,阳性样本经病毒分离培养及亚型鉴定。选取2013年不同时间段、不同地区具有代表性的14株甲型H1N1(09pdm)阳性毒株,利用特异性引物扩增HA、NA基因,测序并分析其遗传进化特征。结果 :14株分离毒株与疫苗株A/California/07/2009(H1N1)的HA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为97.6%~98.4%和96.5%~98.0%。NA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为98.4%~98.9%和97.0%~98.5%。遗传进化分析表明,14株分离株HA和NA基因分属于不同的进化谱系。分子特征表现为HA氨基酸序列出现D114N、K300E、E516K的变异,NA分子特征表现为N44S位点变异。从2013年左右开始甲型H1N1(09pdm)流感基因多样性增加;通过FEL模型得到一个正向压力选择HA氨基酸位点310,一个正向压力选择NA氨基酸位点4,通过REL模型得到9个正向压力选择HA氨基酸位点179、180、239、301、303、310、311、312、313(含位点310),5个正向压力选择NA氨基酸位点4、23、52、287、374(含位点4)。HA蛋白具有9个潜在糖基化位点,7个位于HA1上,2个位于HA2上;NA蛋白共有9个潜在糖基化位点。14株分离毒株在NA蛋白酶活性中心及周围辅助位点上均未发现变异。结论:2013年江苏省甲型H1N1(09pdm)流感HA、NA基因变异加快,遗传多样性增加,未来的遗传进化值得进一步关注。 展开更多
关键词 甲型H1N1(09pdm) 血凝素 神经氨酸酶 分子特征
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H1N1亚型流感病毒血凝素Th和B细胞表位预测及抗原性分析 被引量:7
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作者 王开艳 李太元 +6 位作者 鲁会军 谭磊 南文龙 田明尧 张金双 刘昊 金宁一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期8-12,共5页
目的:应用生物信息学方法预测H1N1亚型流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性,为研制H1N1亚型流感病毒的表位疫苗奠定基础。方法:依据近年流感病毒流行趋势,从GenBank下载具有代表性的H1N1亚型流感病毒HA蛋白氨基酸... 目的:应用生物信息学方法预测H1N1亚型流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性,为研制H1N1亚型流感病毒的表位疫苗奠定基础。方法:依据近年流感病毒流行趋势,从GenBank下载具有代表性的H1N1亚型流感病毒HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特异性。通过Balb/c小鼠H1N1亚型流感病毒阳性血清与表位肽的结合试验,初步鉴定候选表位抗原性。结果:综合多项预测及空间构像模拟结果,我们获得了三条候选Th和B细胞表位,分别为HA73~87、HA125~139、HA188~205。候选表位处于H1N1亚型流感HA1蛋白序列上相对保守的区域内,且与目前流行的H1N1亚型流感病毒HA相应区域具有较好的一致性。而不同候选表位在BALB/c小鼠H1N1亚型流感病毒阳性血清反应中显示了不同抗体结合能力,预示了其成为功能表位的可能。结论:所筛选的表位具有成为H1N1亚型流感病毒HATh和B细胞相关抗原表位的可能。此研究为深入揭示流感病毒感染与免疫机制,H1N1亚型流感功能表位认知及表位疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 流感 血凝素 H1N1 抗原表位
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流感病毒血凝素基因HA1区的克隆及其真核表达载体的构建 被引量:6
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作者 曹康 张卫东 +4 位作者 李虹 李婉宜 蒋中华 庄永华 李明远 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期11-13,共3页
目的 克隆甲型流感病毒血凝素基因HA1区及构建其真核表达载体。方法 从接种人流感病毒株A/PR/ 8/ 34(H1N1)的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA ,用特异引物进行RT PCR ,扩增血凝素基因HA1区。将所扩增片断克隆入真核表达质粒载体pcDNA3.1(+) ... 目的 克隆甲型流感病毒血凝素基因HA1区及构建其真核表达载体。方法 从接种人流感病毒株A/PR/ 8/ 34(H1N1)的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA ,用特异引物进行RT PCR ,扩增血凝素基因HA1区。将所扩增片断克隆入真核表达质粒载体pcDNA3.1(+) ,转化感受态大肠杆菌JM 10 9并筛选阳性克隆。结果 经双酶切、PCR及测序鉴定证实血凝素基因HA1区的真核表达载体构建成功。结论 甲型流感病毒血凝素的HA1区是与宿主细胞膜表面受体结合的部位并起着诱导机体产生保护性抗体的作用 ,HA1区的克隆和其真核表达质粒的构建将为防治病毒侵入宿主细胞及核酸疫苗的研究打下基础。 展开更多
关键词 流感病毒 血凝素 PCDNA3.1(+)
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