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一种新的融合表达载体的构建 被引量:3
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作者 陈正兰 刘景晶 +1 位作者 胡卓逸 丁敏 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期143-147,共5页
利用 L-ans B基因片段构建了融合表达载体 p EC,其中 L-ans B基因中编码唯一酸水解位点的序列已通过定点突变消除 ,并在它的 3′端引入了新的酸水解位点编码序列和方便外源基因插入的克隆位点 Bam H 和 Hind ,外源基因可从克隆位点 Bam... 利用 L-ans B基因片段构建了融合表达载体 p EC,其中 L-ans B基因中编码唯一酸水解位点的序列已通过定点突变消除 ,并在它的 3′端引入了新的酸水解位点编码序列和方便外源基因插入的克隆位点 Bam H 和 Hind ,外源基因可从克隆位点 Bam H 和 Hind 处插入 p EC中 ,表达的融合蛋白用酸水解法加工后仅被切割成一大一小两个片段 ,不会导致产物混杂。 h GRF对它进行验证的结果显示 h GRF基因不仅能按正确的读码框插入 ,而且表达的融合蛋白与预期大小一致 ,说明 p 展开更多
关键词 融合表达载体 L-ansB hGRF
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茶树PPO融合蛋白真核表达载体的构建与表达 被引量:2
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作者 王乃栋 张丽霞 +2 位作者 黄晓琴 韩晓阳 李智 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期269-275,共7页
以迎霜品种茶树基因组为模板,利用高保真聚合酶pfu,通过PCR方法扩增得到茶树PPO基因的编码区序列。通过设计酶切引物将其成功融合至真核表达载体pPICZa中,构建出茶多酚氧化酶的融合蛋白真核表达载体pPICZa-PPO,并将其转化进入巴斯德毕... 以迎霜品种茶树基因组为模板,利用高保真聚合酶pfu,通过PCR方法扩增得到茶树PPO基因的编码区序列。通过设计酶切引物将其成功融合至真核表达载体pPICZa中,构建出茶多酚氧化酶的融合蛋白真核表达载体pPICZa-PPO,并将其转化进入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,成功筛选出多个阳性转化子。对阳性转化子进行甲醇诱导,采用Western-Blotting方法在培养液中成功检测到诱导表达的目的蛋白。酶活检测结果也显示诱导产物具有较高的相对酶活性,能够正确发挥酶蛋白的生物功能。 展开更多
关键词 茶树 多酚氧化酶 融合蛋白真核表达载体 巴斯德毕赤酵母 诱导表达
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牙鲆生长激素基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达 被引量:6
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作者 臧晓南 刘滨 +2 位作者 张学成 茅云翔 隋正红 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期99-104,共6页
采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法, 从牙鲆(Paralichthys olivaceus)脑垂体总RNA中扩增出编码牙鲆生长素(GH)成熟肽基因序列.重组至融合表达载体pGEX-4T-3中,构建成牙鲆GH基因融合表达载体pGEX-gh, 转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳... 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法, 从牙鲆(Paralichthys olivaceus)脑垂体总RNA中扩增出编码牙鲆生长素(GH)成熟肽基因序列.重组至融合表达载体pGEX-4T-3中,构建成牙鲆GH基因融合表达载体pGEX-gh, 转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达.经SDS-PAGE电泳显示在45kD处有特异的蛋白条带出现,该蛋白的表达量随诱导时间的延长而增加,3h达最高值,达到细胞总蛋白的18.3%.该融合蛋白在胞内主要以包涵体状态存在,经优化表达条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,经Glutathione Sepharase 4B凝胶纯化后用Western-blotting检测表明其为牙鲆生长激素,并通过酶联免疫吸附受体法证实其具有生物学活性. 展开更多
关键词 融合表达载体 融合蛋白 大肠杆菌 IVIG Western-blotting 成熟肽基因 逆转录聚合酶链式反应 牙鲆 生长激素基因 GH基因
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cpcB与CT融合蛋白表达质粒在大肠杆菌中的表达和纯化 被引量:4
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作者 王玉梅 张学成 +2 位作者 周一江 隋正红 茅云翔 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期62-66,共5页
将人和鲑鱼嵌合型降钙素基因与藻蓝蛋白的β亚基基因相连,插入融合表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL21.融合蛋白cpcB-CT基因在IPTG诱导下获得高效表达.超声破碎后,经SDS-PAGE分析,在48kD处有新增条,灰度扫描测定,过表达蛋白量占50%~... 将人和鲑鱼嵌合型降钙素基因与藻蓝蛋白的β亚基基因相连,插入融合表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL21.融合蛋白cpcB-CT基因在IPTG诱导下获得高效表达.超声破碎后,经SDS-PAGE分析,在48kD处有新增条,灰度扫描测定,过表达蛋白量占50%~60%,85%为包涵体.包涵体经变性、复性,过Glutathion-Sepharose-4B亲和吸附柱,获含有GST的融合蛋白,该蛋白经凝血酶消化和截留分离,获得纯化的融合蛋白cpcB-CT.Western blotting分析表明,产物具有与合成人降钙素相似的抗原决定簇部分;ELISA-受体法和大鼠降血钙试验表明,其具有降血钙作用.提示该融合蛋白可能具有良好的应用前景. 展开更多
关键词 融合蛋白 大肠杆菌 表达质粒 纯化 SDS-PAGE分析 Western CT 融合表达载体 降钙素基因 抗原决定簇 藻蓝蛋白 高效表达 IPTG 超声破碎 包涵体 β亚基 蛋白量 表达 吸附柱 GST 凝血酶 分析表 血钙 大鼠 受体
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猪Prox1基因的染色体定位和亚细胞定位的研究 被引量:5
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作者 袁继红 龙欢 +1 位作者 田明芳 杨在清 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期351-357,共7页
在克隆猪Prox1基因(sProx1)的基础上,对猪Prox1基因进行染色体定位分析,并通过EGFP融合蛋白对该基因产物进行亚细胞水平定位。本研究将人和鼠的Prox1基因编码区在猪的ESTs数据库中进行检索,然后根据EST进行序列拼接并设计引物对猪Prox1... 在克隆猪Prox1基因(sProx1)的基础上,对猪Prox1基因进行染色体定位分析,并通过EGFP融合蛋白对该基因产物进行亚细胞水平定位。本研究将人和鼠的Prox1基因编码区在猪的ESTs数据库中进行检索,然后根据EST进行序列拼接并设计引物对猪Prox1基因编码区进行克隆。通过比对人、鼠及其他物种Prox1基因第二个内含子序列,设计引物扩增猪Prox1基因部分内含子,根据克隆得到的部分内含子序列设计引物,利用猪-仓鼠体细胞辐射杂种板(IMpRH)对猪Prox1基因进行染色体定位。根据已获得的猪Prox1基因编码区序列,构建猪Prox1基因的融合绿色荧光超表达载体EGFP-Prox1,并转染猪肾PK15细胞,12h后倒置荧光显微镜观察Prox1蛋白在亚细胞内的定位。结果表明:Prox1基因定位于猪第9号染色体长臂的26区,与标记SW1651紧密连锁;构建猪Prox1基因的真核表达载体pEGFP-N1-Prox1,融合蛋白EGFP-Prox1定位于PK15细胞的细胞核中。 展开更多
关键词 Prox1 染色体定位 绿色荧光融合表达载体 亚细胞定位
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中国农业科学院生物技术研究所关于转基因棉花品种权和安全证书署名权的声明函
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《中国棉花》 北大核心 2006年第9期I0003-I0003,共1页
中国农业科学院生物技术研究所是“编码杀虫蛋白质融合基因和表达载体及其应用”专利(专利号CN95119563.8,以下简称单价基因专利)的原专利权人和“两种编码杀虫蛋白质基因和双价融合表达载体及其应用”专利(专利号CN98102885.3,以... 中国农业科学院生物技术研究所是“编码杀虫蛋白质融合基因和表达载体及其应用”专利(专利号CN95119563.8,以下简称单价基因专利)的原专利权人和“两种编码杀虫蛋白质基因和双价融合表达载体及其应用”专利(专利号CN98102885.3,以下简称双价基因专利)的专利权人。 展开更多
关键词 中国农业科学院 转基因棉花 生物技术 研究所 安全证书 署名权 品种权 融合表达载体
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