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人白介素17信号途径真核融合表达质粒的构建及稳定共表达Hela细胞株的筛选
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作者 张春江 杨平荣 +1 位作者 王槐 丁佳栋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1006-1008,共3页
细胞因子介导的自身免疫是引起自身免疫性疾病的一种重要的机制。白介素17(IL-17)是目前新发现的细胞因子,IL-17与自身免疫病和炎症性疾病关系密切。衔接蛋白ACT1是活化核转录因子NF-κB的重要蛋白分子。
关键词 白介素17 HELA细胞株 融合表达质粒 信号途径 核转录因子NF-ΚB 自身免疫性疾病 表达 细胞因子介导
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斑点叉尾鮰NK-lysin基因的cDNA克隆及融合表达质粒构建 被引量:3
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作者 张卓娜 陶妍 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期166-172,共7页
以斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)NK-lysin-type1的成熟肽为研究目标,首先通过RT-PCR和巢式PCR从斑点叉尾鮰的鳃中克隆到编码NK-lysin成熟肽的基因,该基因编码由92个氨基酸残基组成的成熟肽;6个高度保守的半胱氨酸残基位于成熟肽内,... 以斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)NK-lysin-type1的成熟肽为研究目标,首先通过RT-PCR和巢式PCR从斑点叉尾鮰的鳃中克隆到编码NK-lysin成熟肽的基因,该基因编码由92个氨基酸残基组成的成熟肽;6个高度保守的半胱氨酸残基位于成熟肽内,它们被推测与NK-lysin的抗菌活性有关。为了进一步构建原核表达系统用于成熟肽的表达,pET-32a(+)被选择作为融合表达质粒,该质粒含有1个trxA融合头基因,与目的片段mNK-lysin连接后形成融合基因trxA-mNK-lysin,进而有助于在工程菌E.coliBL21(DE3)中的可溶性融合表达。通过PCR、EcoR I和HindⅢ双酶切处理以及DNA测序鉴定,证明pET-32a-mNK-lysin重组融合表达质粒已经被成功构建;将其转化至工程菌E.coliBL21(DE3)后的测序结果表明该重组质粒未发生任何DNA变异。 展开更多
关键词 斑点叉尾鮰 抗菌肽 NK-lysin CDNA克隆 融合表达质粒
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粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与生长抑素融合表达基因疫苗的免疫对断奶仔猪某些代谢物浓度的影响 被引量:4
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作者 舒邓群 陈荣达 +2 位作者 茆达干 吴志敏 杨利国 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期693-696,共4页
选择40头断奶的长×大二元杂交仔猪,随机分为4组,每组10头,公母各半。其中1组为对照组。2~4组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的基因疫苗pcS/2SS、pGM—CSF/SS和pCM—CSF+pcS/2SS。研究这些基因疫苗对断奶仔猪血浆代谢物浓度... 选择40头断奶的长×大二元杂交仔猪,随机分为4组,每组10头,公母各半。其中1组为对照组。2~4组分别口服以减毒沙门氏菌为载体的基因疫苗pcS/2SS、pGM—CSF/SS和pCM—CSF+pcS/2SS。研究这些基因疫苗对断奶仔猪血浆代谢物浓度的影响。结果显示。对照组和pcS/2SS基因疫苗免疫组仔猪血浆葡萄糖浓度没有明显变化,pGM—CSF+pcS/2SS免疫组呈现下降的趋势。融合表达质粒pGM—CSF/SS的免疫则可提高血浆葡萄糖的浓度;血浆游离脂肪酸的分泌水平各免疫组间无明显差异;血浆尿素氮的浓度pGM—CSF/SS免疫组有上升的趋势。在第2周、4周和6周血浆尿素氮的浓度高于其它3个组(P〉0.05)。pcS/2SS免疫组则随免疫时间的延长而逐渐下降。对照组和pGM—CSF+pcS/2SS免疫组一直保持比较平稳的态势。结果表明。GM—CSF提高了SS基因疫苗的免疫效果。pGM—CSF/SS要优于pGM—CSF+pcS/2SS共同免疫。 展开更多
关键词 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 生长抑素 融合表达质粒DNA疫苗 代谢物
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人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)在大肠杆菌中的融合表达初步研究
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作者 范琦 李文利 《辽宁农业科学》 1997年第1期12-15,共4页
用融合表达质粒载体PGEXKT构建了人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGMCSF)的表达质粒PGEXKT/GMCSF。质粒转化大肠杆菌后,经IPTG诱导,超声波裂解,谷胱苷肽琼脂糖亲和胶进一步纯化,表达的hG... 用融合表达质粒载体PGEXKT构建了人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGMCSF)的表达质粒PGEXKT/GMCSF。质粒转化大肠杆菌后,经IPTG诱导,超声波裂解,谷胱苷肽琼脂糖亲和胶进一步纯化,表达的hGMCSF融合蛋白纯度达到80%以上,融合蛋白经凝血酶的作用后,再纯化,以MTT法测定纯化的hGMCSF活性,结果其活性达1.7×106单位/升菌液。 展开更多
关键词 HGM-CSF 融合表达质粒 载体 基因表达
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Grb2在MCF-7乳腺癌细胞中的核定位研究 被引量:1
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作者 陈敏 陈彬 +4 位作者 李渝萍 陈健 李强 钟小林 周度金 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第20期1799-1801,共3页
目的 构建Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,并观察Grb2在MCF 7乳腺癌细胞的核定位情况。方法 用PCR方法扩增Grb2cDNA ,与红色荧光蛋白表达质粒pDsRed1 C重组构建融合蛋白表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,酶切、测序鉴定后 ,... 目的 构建Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,并观察Grb2在MCF 7乳腺癌细胞的核定位情况。方法 用PCR方法扩增Grb2cDNA ,与红色荧光蛋白表达质粒pDsRed1 C重组构建融合蛋白表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,酶切、测序鉴定后 ,瞬时转染MCF 7乳腺癌细胞株 ,用荧光显微镜观察Grb2的核定位情况。结果 pDsRed1 C/Grb2质粒有正确的阅读框 ,融合表达蛋白DsRed1 C/Grb2可定位于MCF 7乳腺癌细胞核内。结论 成功构建了Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,在MCF 7乳腺癌细胞株中 ,Grb2除存在于胞浆外 ,也可定位于细胞核内 ,可能与其参与核内基因的转录调控有关。 展开更多
关键词 MCF-7 乳腺癌细胞株 融合表达质粒 观察 胞浆 转染 定位研究 红色荧光蛋白 核定 转录调控
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