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人可溶性晚期糖基化终产物受体的原核表达及活性鉴定
被引量：
3
1
作者
赵善超
姜勇
+7 位作者
刘靖华
李志杰
邓鹏
张桂林
刘志强
张训
侯凡凡
郑少斌
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2005年第7期769-773,共5页
目的构建人可溶性晚期糖基化终产物受体(hsRAGE)His融合蛋白表达载体并在原核细胞表达与纯化。方法PCR扩增hRAGE基因编码区的胞质外段,利用分子克隆技术将其重组于pET-14b载体中。利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性。转化大肠杆菌BL21(D...
目的构建人可溶性晚期糖基化终产物受体(hsRAGE)His融合蛋白表达载体并在原核细胞表达与纯化。方法PCR扩增hRAGE基因编码区的胞质外段,利用分子克隆技术将其重组于pET-14b载体中。利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性。转化大肠杆菌BL21(DE)3,用异丙基b-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达。以尿素对获得的包涵体进行处理,用金属螯合亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性。以Western印迹和ELISA法对融合蛋白的免疫原性及与AGE的结合活性进行鉴定。结果克隆的hsRAGE完全正确,经过表达与纯化,获得了相对分子质量约45000的融合蛋白。纯化得到的变性蛋白经复性后可被相应抗体识别。所得到的hsRAGE具有与AGE相互结合的活性,并能够抑制AGE诱导的内皮细胞NF-kB的表达。结论成功地构建了hsRAGE融合蛋白原核表达载体且获得高效表达,得到大量的复性蛋白;该蛋白具有特异的免疫原性,保持与AGE的结合活性,并能够有效阻断AGE-RAGE相互作用。
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关键词
晚期糖基化终产物
原核表达
受体
受体
可溶性
融合蛋白/生物活性
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职称材料
题名
人可溶性晚期糖基化终产物受体的原核表达及活性鉴定
被引量：
3
1
作者
赵善超
姜勇
刘靖华
李志杰
邓鹏
张桂林
刘志强
张训
侯凡凡
郑少斌
机构
南方医科大学南方医院肾脏病研究所
南方医科大学病理生理教研室
出处
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2005年第7期769-773,共5页
基金
国家自然科学基金(30270622)
国家自然科学基金重点项目(30330300)
+1 种基金
广东省自然科学基金研究团队项目(10717)
国家杰出青年科学基金(39925014)~~
文摘
目的构建人可溶性晚期糖基化终产物受体(hsRAGE)His融合蛋白表达载体并在原核细胞表达与纯化。方法PCR扩增hRAGE基因编码区的胞质外段,利用分子克隆技术将其重组于pET-14b载体中。利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性。转化大肠杆菌BL21(DE)3,用异丙基b-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达。以尿素对获得的包涵体进行处理,用金属螯合亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性。以Western印迹和ELISA法对融合蛋白的免疫原性及与AGE的结合活性进行鉴定。结果克隆的hsRAGE完全正确,经过表达与纯化,获得了相对分子质量约45000的融合蛋白。纯化得到的变性蛋白经复性后可被相应抗体识别。所得到的hsRAGE具有与AGE相互结合的活性,并能够抑制AGE诱导的内皮细胞NF-kB的表达。结论成功地构建了hsRAGE融合蛋白原核表达载体且获得高效表达,得到大量的复性蛋白;该蛋白具有特异的免疫原性,保持与AGE的结合活性,并能够有效阻断AGE-RAGE相互作用。
关键词
晚期糖基化终产物
原核表达
受体
受体
可溶性
融合蛋白/生物活性
Keywords
advanced glycation end products
receptor,prokaryotic expression
receptor,soluble
fusion protein/biological activity
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人可溶性晚期糖基化终产物受体的原核表达及活性鉴定
赵善超
姜勇
刘靖华
李志杰
邓鹏
张桂林
刘志强
张训
侯凡凡
郑少斌
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2005
3
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