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细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗构建及鉴定 被引量：28
1
作者 周必英 陈雅棠 +1 位作者 李文桂 杨梅 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期502-506,共5页
目的构建和鉴定细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合基因疫苗。方法自行设计引物,从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA为模板,通过RT-PCR分别扩增Eg95和EgA31抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)... 目的构建和鉴定细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合基因疫苗。方法自行设计引物,从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA为模板,通过RT-PCR分别扩增Eg95和EgA31抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Eg95和EgA31,得到Eg95-EgA31融合基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,定向克隆到大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,构建重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,抽提质粒进行双酶切鉴定,电穿孔法转化两歧双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb),构建细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果RT-PCR扩增出约1 016bp的Eg95-EgA31融合基因;重组质粒用双酶切鉴定可切出预期大小片段,以具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提的质粒为模板进行PCR扩增可得到约1016bp的Eg95-EgA31融合基因片段。结论成功构建了细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,为该疫苗的开发利用奠定了实验基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 重组Bb—Eg95-EgA31融合基因疫苗 构建 鉴定
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丙型肝炎病毒核心区与IgG Fc段融合基因疫苗的构建及表达 被引量：6
2
作者 王全楚 冯志华 +1 位作者 周永兴 聂青和 《医学研究生学报》 CAS 2003年第3期161-163,F003,共4页
目的 :构建能同时表达丙型肝炎病毒核心区与IgGFc段的融合基因真核表达载体 pcDNA3HCVC Fc ,为下一步修饰和转染树突状细胞 ,制备能高效表达HCVC和Fc基因的树突状细胞疫苗做准备。　方法 :用分别含有XholⅠ和XbaⅠ双酶切位点的人免疫球... 目的 :构建能同时表达丙型肝炎病毒核心区与IgGFc段的融合基因真核表达载体 pcDNA3HCVC Fc ,为下一步修饰和转染树突状细胞 ,制备能高效表达HCVC和Fc基因的树突状细胞疫苗做准备。　方法 :用分别含有XholⅠ和XbaⅠ双酶切位点的人免疫球蛋白 (IgG)Fc区基因上、下游引物 ,以含有人IgG基因序列的质粒pCMVsFc为模板 ,通过PCR扩增获得Fc区基因片段 ,基因片段回收后 ,以XholⅠ和XbaⅠ双酶切 ,定向插入到含HCVC基因的质粒PcDNA3HCVC下游双粘端位点之间 ,获得重组表达质粒pcDNA3HCVFc。通过酶切、PCR及插入片段序列测定对质粒进行鉴定。以抗HCVC和抗Fc单克隆抗体为一抗 ,利用间接免疫荧光法检测 pcDNA3HCV Fc在人肝癌细胞 772 1中的瞬时表达。　结果 :酶切、PCR及测定鉴定证实 ,pcDNA3HCV Fc插入片段为Fc区基因片段 ,免疫荧光法检测表明其可以在 772 1细胞中瞬时表达。　结论 :构建的质粒 pcDNA3HCV Fc可以在772 1细胞中瞬时表达Fc基因 ,为研究HCVC Fc融合基因修饰的树突状细胞的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 免疫球蛋白/Fc区 融合基因疫苗 真核表达
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结核杆菌热休克蛋白70刺激表位在融合基因疫苗中的佐剂作用 被引量：2
3
作者 段秀梅 邹亚斌 +4 位作者 马洪喜 李树蕾 王银萍 王超 李玉琴 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期506-511,共6页
目的:探讨结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)的刺激表位在肝细胞癌相关抗原661(HCA661)融合基因疫苗pCI-HCA661-mtHSP70中的佐剂作用,为提高基因疫苗的免疫效果提供依据。方法:18只BALB/c小鼠随机分为pCI-neo组、pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组... 目的:探讨结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)的刺激表位在肝细胞癌相关抗原661(HCA661)融合基因疫苗pCI-HCA661-mtHSP70中的佐剂作用,为提高基因疫苗的免疫效果提供依据。方法:18只BALB/c小鼠随机分为pCI-neo组、pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组,每组6只,分别肌肉注射100μg空质粒pCI-neo、重组质粒pCI-HCA661-mtHSP70C和pCI-HCA661-mtHSP70E,流式细胞术分析小鼠脾T细胞亚群变化;ELISA法检测体外培养脾细胞上清中干扰素γ(IFNγ)的含量及免疫小鼠血清中HCA661特异性抗体的滴度;体外特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤试验观察融合基因疫苗对肿瘤细胞的抑制作用。结果:pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组的CD3+、CD4+T淋巴细胞的百分比和CD4+/CD8+比值与pCI-neo组比较差异有统计学意义(P<0.05);pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组的CD3+、CD4+百分比和CD4+/CD8+比值均高于pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组,差异有统计学意义(P<0.05);在抗原肽刺激下,pCI-HCA661-HSP70E免疫组小鼠脾细胞培养上清中IFNγ含量较pCI-mtHCA661-HSP70C免疫组明显提高(P<0.05);pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组IFNγ含量均高于pCI-neo组(P<0.05)。pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组诱导的HCA661特异性抗体水平较pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组显著增高(P<0.05);pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组可以产生更强的CTL抗肿瘤效应。结论:mtHSP70刺激表位可以诱导机体对HCA661融合基因疫苗的特异性免疫应答,发挥更强的佐剂作用。 展开更多
关键词 融合基因疫苗 肝细胞癌相关抗原661 结核分枝杆菌热休克蛋白70 基因佐剂
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结核分枝杆菌融合基因疫苗的研究进展
4
作者 谢婷 李文桂 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期727-728,732,共3页
关键词 融合基因疫苗 结核分枝杆菌 免疫保护作用 DNA疫苗 免疫保护效果 抗结核疫苗 抗原免疫 BCG
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粘膜佐剂LTB优化的抗淋病ltB-nspA融合基因疫苗鼻饲免疫效果研究 被引量：2
5
作者 王健 胡四海 +3 位作者 戴志兵 胡耀华 张愉快 余敏君 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期968-972,共5页
目的:用真核重组质粒pcDNA3.1(-)/ltB-nspA鼻饲免疫小鼠,探索粘膜佐剂LTB辅佐NspA所诱发的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答水平。方法:对真核重组质粒行PCR及双酶切鉴定后大量制备,经鼻饲途径免疫雌性BALB/c小鼠,间接ELISA法检测血清... 目的:用真核重组质粒pcDNA3.1(-)/ltB-nspA鼻饲免疫小鼠,探索粘膜佐剂LTB辅佐NspA所诱发的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答水平。方法:对真核重组质粒行PCR及双酶切鉴定后大量制备,经鼻饲途径免疫雌性BALB/c小鼠,间接ELISA法检测血清中NspA特异性IgG抗体水平及小鼠生殖道灌洗液中NspA特异性sIgA抗体水平;MTT法检测脾淋巴细胞增殖水平,ELISA双抗体夹心法检测脾淋巴细胞培养上清IFN-γ含量。结果:融合基因pcDNA3.1(-)/ltB-nspA组小鼠生殖道灌洗液中sIgA(A450:0.316±0.045)明显高于pcDNA3.1(-)/nspA单基因组(P<0.05)和其它对照组(P<0.01);小鼠血清中IgG(A450:0.643±0.156)水平、脾淋巴细胞刺激指数(SI:1.65±0.32)和脾淋巴细胞诱生的IFN-γ(160.56±25.67pg/ml)水平均明显高于pcDNA3.1(-)/ltB、空质粒pcDNA3.1(-)和PBS对照组(P<0.01)。结论:pcDNA3.1(-)/ltB-nspA融合基因疫苗经鼻饲免疫,能够诱导小鼠产生较强的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答;粘膜佐剂LTB可辅佐NspA诱导小鼠产生更高水平的生殖道粘膜免疫。 展开更多
关键词 淋球菌 奈瑟菌表面蛋白A LTB 融合基因疫苗 免疫效果
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基因佐剂结核杆菌HSP70增强HCA661基因疫苗免疫应答 被引量：5
6
作者 李树蕾 谭岩 +4 位作者 刘力华 段秀梅 方艳秋 许淑芬 车媛媛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期504-508,共5页
目的:评价结核分枝杆菌HSP70(Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,mtHSP70)羧基端作为基因佐剂对HCA661(Hepatocellular carcinoma associated antigens 661)基因疫苗免疫效果的影响。方法:将HCA661及与mtHSP70羧基端的... 目的:评价结核分枝杆菌HSP70(Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,mtHSP70)羧基端作为基因佐剂对HCA661(Hepatocellular carcinoma associated antigens 661)基因疫苗免疫效果的影响。方法:将HCA661及与mtHSP70羧基端的串联体分别克隆到pCI-neo中构建基因疫苗;将eGFP及与mtHSP70羧基端的串联体分别克隆到pCI-neo,体外转染φA细胞,根据eGFP的表达评价重组质粒中靶基因的转录表达效率。基因疫苗免疫BALB/c小鼠,SABC、Western blot检测免疫血清中特异性HCA661抗体;流式细胞术、ELISA法检测免疫血清中特异性HCA661抗体水平。结果:重组质粒构建成功;80%φA细胞转染eGFP后呈现绿色荧光;单基因和融合基因疫苗组动物均产生了针对HCA661的特异性抗体,融合疫苗组诱导的抗体水平较单基因疫苗组显著增高,融合基因疫苗组未产生针对mtHSP70的抗体。结论:mtHSP70羧基端作为基因佐剂增强机体对HCA661融合基因疫苗的特异性免疫应答。 展开更多
关键词 融合基因疫苗 癌/睾丸抗原 肝细胞癌相关抗原661 结核分枝杆菌热休克蛋白70 基因佐剂
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人tPA信号肽和Yersinia pestis保护性抗原F1-V融合基因的构建及其免疫效果观察 被引量：3
7
作者 韩岳 王希良 +3 位作者 董梅 邢丽 赵光宇 刘秀华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期811-816,共6页
为获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因,以及人tPA信号肽基因的重组质粒tPA-pVAX1/F1-V,测定其诱导特异性免疫应答的能力,用PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEM-T连接测序.构建pVAX1/F1-V融合重组质粒,PCR扩增tPA信号肽片段,并将其插入到... 为获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因,以及人tPA信号肽基因的重组质粒tPA-pVAX1/F1-V,测定其诱导特异性免疫应答的能力,用PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEM-T连接测序.构建pVAX1/F1-V融合重组质粒,PCR扩增tPA信号肽片段,并将其插入到F1-V的上游,构建tPA-pVAX1/F1-V融合重组质粒;转染COS-7细胞,Western印迹法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒tPA-pVAX1/F1-V加GM-CSF佐剂免疫BALB/c小鼠,观察免疫效果.400个LD50强毒鼠疫菌皮下攻毒观察保护率.结果表明,tPA-pVAX1/F1-V在COS-7细胞中表达;免疫鼠体内产生特异性抗体;抗体亚型分析、细胞因子等指标的测定表明,所构建DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主;(攻毒保护率达90%.结果提示,已成功构建F1-V融合蛋白真核表达载体tPA-pVAX1/F1-V,它具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,对强毒鼠疫菌皮下攻毒有一定的保护效力,为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础. 展开更多
关键词 鼠疫杆菌 F1-V抗原 基因融合双价疫苗 tPA信号肽
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腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊IL-2融合基因的分泌型表达
8
作者 刘艳环 苗利光 +2 位作者 王克坚 刘波 李理 《动物医学进展》 CSCD 2004年第2期69-70,共2页
用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养... 用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养肉汤中进行 Pilin-IL-2融合基因的表达。培养 16～ 18h后 ,离心 ,向上清液中加入饱和 ( NH4) 2 SO4提取 Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳 。 展开更多
关键词 腐蹄病 节瘤拟杆菌 纤毛蛋白 绵羊 融合基因工程疫苗 分泌型表达 白细胞介素2 免疫佐剂
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