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中华蜜蜂幼虫原代细胞培养及中华蜜蜂囊状幼虫病毒在培养的细胞中的复制 被引量:2
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作者 李慧 费东亮 +1 位作者 胡影 马鸣潇 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1362-1367,共6页
【目的】建立一种适用于蜜蜂源的细胞培养方法,为蜜蜂源细胞培养和蜂病毒的研究奠定基础。【方法】比较在Grace和WH2两种昆虫细胞培养基中培养的中华蜜蜂Apis cerana cerana幼虫原代细胞状况,筛选出适用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的最... 【目的】建立一种适用于蜜蜂源的细胞培养方法,为蜜蜂源细胞培养和蜂病毒的研究奠定基础。【方法】比较在Grace和WH2两种昆虫细胞培养基中培养的中华蜜蜂Apis cerana cerana幼虫原代细胞状况,筛选出适用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的最佳培养基,并通过细胞活力比较,确定用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的适宜胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)浓度。在此基础上,用该原代细胞接种中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood bee disease,CSBV),并通过实时定量RT-PCR方法对病毒复制情况进行检测。【结果】相对于WH2培养基,在Grace培养基中生长的细胞大而圆,透明,边缘整齐,无颗粒物,活力明显高于WH2培养,且含15%FBS的Grace培养基更适合于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养。CSBV接种在该原代细胞,能够复制增殖,同时伴随宿主细胞快速分裂。【结论】中华蜜蜂幼虫原代细胞培养基在含15%FBS的Grace中能够良好生长,并且CSBV可以在该原代细胞中进行复制。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 中华蜜蜂囊状幼虫病毒(CSBV) 原代细胞培养 胎牛血清(FBS) 实时定量RT-PCR
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检测蜜蜂囊状幼虫病毒环介导等温扩增技术的建立 被引量:2
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作者 王向辉 郑言 +4 位作者 隋佳辰 张健 杨倩 宋战昀 王振国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期137-141,共5页
为建立一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病毒(SBV)的环介导等温扩增方法(LAMP),本研究根据SBV-UK株多聚蛋白基因序列(AF092924.1)设计了4条特异性引物,通过LAMP real-time Turbidimeter仪对SBV的反应体系和反应条件进行检测和实时监控,... 为建立一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病毒(SBV)的环介导等温扩增方法(LAMP),本研究根据SBV-UK株多聚蛋白基因序列(AF092924.1)设计了4条特异性引物,通过LAMP real-time Turbidimeter仪对SBV的反应体系和反应条件进行检测和实时监控,并评价其特异性、敏感性、重复性和稳定性。结果显示,在63℃恒温扩增40 min后,仅SBV核酸扩增,而其他病毒均呈阴性。反应结束后在反应体系中加入SYBR Green I的可视化判定结果与real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有较强的特异性和较高的敏感性,其最低检出量为3.2×10~1拷贝/μL,是普通PCR的100倍;对同一批次和不同批次提取的SBV核酸进行扩增,结果表明重复性和稳定性良好;临床样品检测结果表明LAMP法与常规PCR法检测结果一致。本研究建立的LAMP方法操作简便,适用于SBV的快速检测。 展开更多
关键词 蜜蜂囊状幼虫病毒 环介导等温扩增技术 检测
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中华蜜蜂囊状幼虫病的诊断和防治研究进展 被引量:1
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作者 李爱芳 王倩芳 +3 位作者 王孜龙 李亚兰 徐朋 冯书营 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期864-873,共10页
中华蜜蜂囊状幼虫病(Chinese sacbrood disease, CSBD)是由中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus, CSBV)引起的一种病毒性疾病。该病对蜂群危害严重,传染性强,死亡率高达100%,给中国养蜂业造成了巨大的经济损失。尽管实际生... 中华蜜蜂囊状幼虫病(Chinese sacbrood disease, CSBD)是由中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus, CSBV)引起的一种病毒性疾病。该病对蜂群危害严重,传染性强,死亡率高达100%,给中国养蜂业造成了巨大的经济损失。尽管实际生产中采用了多种方法和措施对该病进行预防和治疗,但实际效果欠佳。针对CSBV的检测技术发展迅速,尤其是分子生物学检测手段的更新,使得检测结果的准确性和特异性大大提高。鉴于卵黄抗体(egg yolk antibodies, EYA)在多种病毒性疾病中的应用效果显著,对于CSBD的防治有着潜在的应用开发价值。笔者综述了CSBD诊断和防治的最新研究进展,总结了EYA抗体药物的治疗应用现状。此外,在剖析EYA药物优缺点的基础上,提出了多种EYA协同增效的策略,并从多个方面如新型抗体药物的开发、新型中药单体/配方的鉴定、核苷酸药物的开发等对抗CSBV的研究前景进行望,以期为蜂业病毒性疾病的防控提供参考。 展开更多
关键词 中华蜜蜂幼虫病毒(CSBV) 诊断 防治 卵黄抗体(EYA)
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中华蜜蜂囊状幼虫病病毒非结构蛋白抗体的制备及其应用 被引量:3
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作者 夏晓翠 周冰峰 魏太云 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2014年第5期499-503,共5页
应用Gateway重组技术构建CSBV非结构蛋白,RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)的原核表达载体,将重组表达载体转化大肠杆菌Rosetta,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-Thiogalactopyranoside,IPTG)诱导获... 应用Gateway重组技术构建CSBV非结构蛋白,RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)的原核表达载体,将重组表达载体转化大肠杆菌Rosetta,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-Thiogalactopyranoside,IPTG)诱导获得RdRp基因原核表达蛋白.以重组蛋白为抗原免疫新西兰兔制备相应的多克隆抗体,Western blot检测表明,该抗体能与RdRp重组蛋白和感病中华蜜蜂幼虫蛋白特异性结合,说明获得的抗体特异性高.利用制备的抗体进行免疫荧光标记,发现其能特异地定位在感病中华蜜蜂血淋巴细胞内. 展开更多
关键词 蜜蜂囊状幼虫病毒 多克隆抗体 免疫荧光标记
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梯度条带PCR快速检测CSBV方法的建立 被引量:7
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作者 刘新宇 于欢 +2 位作者 高宝国 张彦明 王敦 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第4期6-9,共4页
通过与传统RT-PCR检测方法比较,建立了一种新的快速、准确鉴定中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)的方法,为中华蜜蜂囊状幼虫病的诊断与防治提供了重要的手段。对陕南、陕北、关中三地的健康蜂及CSBV感染蜂分别进行传统RT-PCR和梯度条带PCR... 通过与传统RT-PCR检测方法比较,建立了一种新的快速、准确鉴定中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)的方法,为中华蜜蜂囊状幼虫病的诊断与防治提供了重要的手段。对陕南、陕北、关中三地的健康蜂及CSBV感染蜂分别进行传统RT-PCR和梯度条带PCR两种方法的检测,通过琼脂糖凝胶电泳及测序结果对两种方法进行分析比较。结果发现传统RT-PCR和梯度条带PCR方法对陕西三地的感染病毒蜂鉴定结果一致,而梯度条带PCR方法相对更快速和直观。与传统RT-PCR鉴定方法比较,该新方法能够在电泳检测阶段通过DNA片段的梯度次序即确定是否存在病毒,能够省去PCR产物测序步骤,缩短了对该病毒的鉴定周期,对及时发现和鉴定病蜂、采取预防措施提供了重要的技术手段。因此,梯度条带PCR快速鉴定方法不仅为CSBV的检测提供了一种简单、快速、直观的方法,对类似动物病毒的快速鉴定也提供了很好的借鉴。 展开更多
关键词 中华蜜蜂幼虫病毒 快速检测 梯度条带PCR法
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