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UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定
被引量：
1
1
作者
王春生
李晶
+4 位作者
宁方勇
张秋婷
梁洋
朴善花
安铁洙
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期1202-1205,1235,共5页
为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S的阳性小鼠成纤维细胞,本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子(UHS),与带有IRES序列和GFP报告基因的表达载体连接,构建真核表达载体UHS-2S-pIRES2-EGFP;...
为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S的阳性小鼠成纤维细胞,本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子(UHS),与带有IRES序列和GFP报告基因的表达载体连接,构建真核表达载体UHS-2S-pIRES2-EGFP;将UHS-2S-pIRES2-EGFP线性化后,采用脂质体法转染小鼠皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得neo基因抗性阳性细胞。结果表明:(1)成功构建UHS-2S-pIRES2-EGFP;(2)转基因细胞的最佳G418筛选浓度为400μg/mL;(3)筛选获得呈梭形的转基因细胞,对其进行传代培养时,细胞增殖缓慢,细胞未呈现正常细胞的"S"型的生长曲线;(4)PCR检测结果显示,UHS-2S-pIRES2-EGFP载体已经整合到G418抗性细胞的基因组中。
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关键词
蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体
超高硫角
蛋白
启动子
真核表达载
体
小鼠成纤维细胞
转
基因
在线阅读
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职称材料
拟蜘蛛拖丝蛋白基因人工合成及其原核表达
被引量：
5
2
作者
王春生
原璐
+2 位作者
罗芳
梁洋
安铁洙
《四川动物》
CSCD
北大核心
2010年第2期184-188,共5页
根据GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY555585和AH015065)、拖丝蛋白基因的结构特点和密码子的简并性,设计378bp的拖丝蛋白基因单体,并对其人工聚合成二聚体。Primer5.0分析结果表明,决定拖丝弹性和抗拉力的氨基酸(Gla和Ala)含量(41.43...
根据GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY555585和AH015065)、拖丝蛋白基因的结构特点和密码子的简并性,设计378bp的拖丝蛋白基因单体,并对其人工聚合成二聚体。Primer5.0分析结果表明,决定拖丝弹性和抗拉力的氨基酸(Gla和Ala)含量(41.43和18.22)接近天然丝蛋白氨基酸含量(42.81和26.32);利用Antheprot软件对二聚体编码氨基酸的二级结构预测结果显示,与丝蛋白的氨基酸链相近,由2个相同的部分排列而成,即β-片层(占48%)、6个α-螺旋间隔(占15%)、散在的转角(占12%)和若干不规则卷曲(占25%)。将二聚体与pET-28a(+)连接构建原核表达载体,IPTG诱导重组菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量为26.6×103kD的重组蛋白。上述结果为进一步开展有关转蜘蛛拖丝蛋白基因在绵羊被毛中表达的研究奠定了基础。
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关键词
拖
丝
蛋白
基因
人工合成
二
聚
体
原核表达
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职称材料
题名
UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定
被引量：
1
1
作者
王春生
李晶
宁方勇
张秋婷
梁洋
朴善花
安铁洙
机构
东北林业大学生命科学学院
东北农业大学动物科技学院
出处
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期1202-1205,1235,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30771538
31000990)
国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08008-004B)
文摘
为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S的阳性小鼠成纤维细胞,本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子(UHS),与带有IRES序列和GFP报告基因的表达载体连接,构建真核表达载体UHS-2S-pIRES2-EGFP;将UHS-2S-pIRES2-EGFP线性化后,采用脂质体法转染小鼠皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得neo基因抗性阳性细胞。结果表明:(1)成功构建UHS-2S-pIRES2-EGFP;(2)转基因细胞的最佳G418筛选浓度为400μg/mL;(3)筛选获得呈梭形的转基因细胞,对其进行传代培养时,细胞增殖缓慢,细胞未呈现正常细胞的"S"型的生长曲线;(4)PCR检测结果显示,UHS-2S-pIRES2-EGFP载体已经整合到G418抗性细胞的基因组中。
关键词
蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体
超高硫角
蛋白
启动子
真核表达载
体
小鼠成纤维细胞
转
基因
Keywords
polymerized spider dragline silk protein gene（2S）
ultra-high sulfur keratin（UHS）promoter
mouse fibroblast
eukaryotic expression vector
transgene
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
拟蜘蛛拖丝蛋白基因人工合成及其原核表达
被引量：
5
2
作者
王春生
原璐
罗芳
梁洋
安铁洙
机构
东北林业大学生命科学学院
出处
《四川动物》
CSCD
北大核心
2010年第2期184-188,共5页
基金
国家自然科学基金(30751325
30771538)资助
东北林业大学引进人才科研启动基金资助
文摘
根据GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY555585和AH015065)、拖丝蛋白基因的结构特点和密码子的简并性,设计378bp的拖丝蛋白基因单体,并对其人工聚合成二聚体。Primer5.0分析结果表明,决定拖丝弹性和抗拉力的氨基酸(Gla和Ala)含量(41.43和18.22)接近天然丝蛋白氨基酸含量(42.81和26.32);利用Antheprot软件对二聚体编码氨基酸的二级结构预测结果显示,与丝蛋白的氨基酸链相近,由2个相同的部分排列而成,即β-片层(占48%)、6个α-螺旋间隔(占15%)、散在的转角(占12%)和若干不规则卷曲(占25%)。将二聚体与pET-28a(+)连接构建原核表达载体,IPTG诱导重组菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量为26.6×103kD的重组蛋白。上述结果为进一步开展有关转蜘蛛拖丝蛋白基因在绵羊被毛中表达的研究奠定了基础。
关键词
拖
丝
蛋白
基因
人工合成
二
聚
体
原核表达
Keywords
dragline silk protein gene
artificially synthesize
duple-polymerized
prokaryotic expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定
王春生
李晶
宁方勇
张秋婷
梁洋
朴善花
安铁洙
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
拟蜘蛛拖丝蛋白基因人工合成及其原核表达
王春生
原璐
罗芳
梁洋
安铁洙
《四川动物》
CSCD
北大核心
2010
5
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职称材料
已选择
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