昆虫蜕皮激素受体及其类似物的杀虫机制研究进展 被引量：26

1

作者 刘永杰 徐蓬军 +2 位作者 李艳伟 束怀瑞 黄大卫 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期67-73,共7页

昆虫的蜕皮、变态和繁殖受到蜕皮激素的严格调控。蜕皮激素作用靶标由蜕皮激素受体(ecdysteroidreceptor,EcR)和超气门蛋白(ultraspiracleprotein,USP)组成,蜕皮激素与EcR/USP作用启动蜕皮级联反应过程。昆虫EcR具有种类或类群的特异性... 昆虫的蜕皮、变态和繁殖受到蜕皮激素的严格调控。蜕皮激素作用靶标由蜕皮激素受体(ecdysteroidreceptor,EcR)和超气门蛋白(ultraspiracleprotein,USP)组成,蜕皮激素与EcR/USP作用启动蜕皮级联反应过程。昆虫EcR具有种类或类群的特异性,研究其结构、功能和调控机理在开发环境友好型新药剂和基因调控开关等方面具有重要指导作用。该文介绍了昆虫EcR的结构和功能特点,蜕皮激素及其类似物与EcR/USP的分子作用方式,以及基于EcR/USP的新杀虫剂创制和基因调控开关设计等方面的重要进展。 展开更多

关键词 蜕皮激素受体 超气门蛋白 配体结合域 级联反应 活性筛选 基因开关

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斜纹夜蛾蜕皮激素受体与超气门蛋白的原核表达及活性检测 被引量：4

2

作者 王涛 邱秀翠 +2 位作者 焦艳艳 刘辉 刘永杰 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1239-1245,共7页

双酰基肼类杀虫剂模拟天然蜕皮激素作用影响幼虫蜕皮。昆虫蜕皮激素受体的高度敏感性和专一性要求必须建立新的杀虫活性检测技术,以适应快速准确和大批量筛选的要求。本研究采用RT-PCR技术,获取斜纹夜蛾Spodoptera litura蜕皮激素受体(E... 双酰基肼类杀虫剂模拟天然蜕皮激素作用影响幼虫蜕皮。昆虫蜕皮激素受体的高度敏感性和专一性要求必须建立新的杀虫活性检测技术,以适应快速准确和大批量筛选的要求。本研究采用RT-PCR技术,获取斜纹夜蛾Spodoptera litura蜕皮激素受体(EcR)与超气门蛋白(USP)功能域目的基因,构建EcR、USP功能区基因原核表达载体(pEHISEGFPTEV-EcRcde和pEHISEGFPTEV-USPcde)。载体经诱导表达和蛋白纯化,获得EcR和USP功能区纯化蛋白。在蛋白浓度l mg/mL,3H-PonA终浓度8 nmol/L的条件下,采用放射性配基受体结合分析测定了4种药剂(虫酰肼、呋喃虫酰肼、抑食肼和灭幼脲)不同浓度下的放射性比活的变化。结果显示:随着药剂浓度的逐渐增大,前3种药剂的放射性比活都有不同程度的降低,其中虫酰肼的放射性比活降低程度最大,其次是呋喃虫酰肼和抑食肼,灭幼脲的放射性比活基本无变化。这些结果表明相同条件下虫酰肼比呋喃虫酰肼和抑食肼有更高的杀虫活力,本研究的方法可对双酰基肼类杀虫剂或者先导化合物进行初步筛选。 展开更多

关键词 斜纹夜蛾 蜕皮激素受体 超气门蛋白 原核表达 放射性比活

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家蚕蜕皮激素受体基因EcR-B1的启动子调控区域活性检测 被引量：5

3

作者 黄明霞 杜杰 +3 位作者 刘云垒 赵国栋 卫正国 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期389-395,共7页

昆虫蜕皮激素通过与蜕皮激素受体(EcR)和超气门蛋白(USP)形成的异源二聚体相互作用,起始包括转录因子表达在内的蜕皮级联反应,引起昆虫蜕皮。为了探究家蚕蜕皮激素受体基因EcR-B1(BmEcR-B1)表达的调控机制,利用双荧光素酶报告系统和Bac-... 昆虫蜕皮激素通过与蜕皮激素受体(EcR)和超气门蛋白(USP)形成的异源二聚体相互作用,起始包括转录因子表达在内的蜕皮级联反应,引起昆虫蜕皮。为了探究家蚕蜕皮激素受体基因EcR-B1(BmEcR-B1)表达的调控机制,利用双荧光素酶报告系统和Bac-to-Bac表达系统检测家蚕幼虫经蜕皮激素诱导后,脂肪体、马氏管、中肠组织内不同缺失片段的BmEcR-B1启动子活性。对各组织样品的检测结果均证明:BmEcR-B1启动子-138^-11 bp之间存在正调控元件,并且其活性能被蜕皮激素诱导。在细胞水平上进一步分析BmEcR-B1启动子调控区域,结果显示在-138^-108 bp区域包含的调控元件对于BmEcR-B1启动子的转录调控是必需的,序列分析显示这一区域包含有畸形基因编码蛋白Dfd和热休克转录因子(HSF)2个转录调控元件的结合位点。研究结果为探索BmEcR-B1在家蚕变态发育中的转录调控机制提供了有益线索。 展开更多

关键词 家蚕 蜕皮激素受体 启动子 双荧光素酶报告系统 转录调控

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茶尺蠖蜕皮激素受体基因Eo-EcR的克隆、生物信息学分析和表达检测 被引量：3

4

作者 李良德 王定锋 +2 位作者 李慧玲 张辉 吴光远 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1063-1071,共9页

【目的】蜕皮激素受体(ecdysteroid receptor,EcR)是一种超家族核受体,它能与超气门蛋白USP组成异源二聚体复合物EcR/USP,调节20-羟基蜕皮酮(20E)的生物活性,进而调控昆虫的发育、变态及繁殖等生命过程。本研究旨在克隆茶尺蠖Ectropis o... 【目的】蜕皮激素受体(ecdysteroid receptor,EcR)是一种超家族核受体,它能与超气门蛋白USP组成异源二聚体复合物EcR/USP,调节20-羟基蜕皮酮(20E)的生物活性,进而调控昆虫的发育、变态及繁殖等生命过程。本研究旨在克隆茶尺蠖Ectropis obliqua Prout EcR基因全长,并了解该基因的编码蛋白特征和时空表达模式。【方法】通过RT-PCR方法并结合RACE技术,克隆茶尺蠖EcR的基因全长,通过生物信息学软件和在线网站分析茶尺蠖EcR的生物学特性,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)技术比较茶尺蠖EcR在不同发育时期和6龄幼虫不同组织中的相对表达含量。【结果】克隆并鉴定了茶尺蠖EcR基因,将其命名为Eo-EcR(基因登录号:KP869130.1),Eo-EcR全长2 268 bp,含有1 728 bp开放阅读框,编码576个氨基酸。系统进化树和氨基酸同源性比对表明,Eo-EcR具有相对保守的进化特性,特别是与鳞翅目昆虫的保守性最高。三级结构模拟和功能结构域预测表明,Eo-EcR具有3个经典的结构模型,并以α螺旋为主,功能位点单一且为C4型锌指结构。qRT-PCR结果表明,Eo-EcR在5龄和6龄幼虫期以及成虫期表达量较高,在其他龄期表达量变化不大;同时在前胸腺表达量最高,在血淋巴表达量最低。【结论】明确了Eo-EcR的核苷酸序列及编码蛋白特征,明确了Eo-EcR的时空表达特性。该研究结果为进一步研究Eo-EcR的分子功能和基于Eo-EcR为靶标杀虫剂的研制奠定分子基础。 展开更多

关键词 茶尺蠖 蜕皮激素受体 克隆 生物信息学 时空表达 杀虫剂

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日本沼虾蜕皮激素受体(EcR)的cDNA克隆及其在胚胎发育过程中的表达分析 被引量：7

5

作者 陈辉 王文清 朱小玲 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2009年第4期347-356,共10页

从日本沼虾中克隆了cDNAs编码的蜕皮激素受体基因(MnEcR)核苷酸序列。将编码区中的配体结合域(LBD)氨基酸序列与甲壳纲和昆虫纲中已知EcR s的该区域进行比对,结果显示了高度的相似性,构建的系统进化树表明MnEcR与甲壳类物种的同源性要... 从日本沼虾中克隆了cDNAs编码的蜕皮激素受体基因(MnEcR)核苷酸序列。将编码区中的配体结合域(LBD)氨基酸序列与甲壳纲和昆虫纲中已知EcR s的该区域进行比对,结果显示了高度的相似性,构建的系统进化树表明MnEcR与甲壳类物种的同源性要高于昆虫类物种。采用RT-PCR技术对MnEcR转录本在组织中的表达进行检测,结果显示在所有检测的组织中均有表达,并且在眼、头胸甲下的表膜和卵巢中表达尤为突出。接着采用实时RT-PCR技术对MnEcR转录本在胚胎发育各期的表达情况进行分析,结果显示从卵裂期到原肠期的表达水平逐渐上升,从前无节幼体期开始至后无节幼体期表达水平呈显著的增加,并在后无节幼体期时达到最大,随后在前溞状幼体期和溞状幼体期表达水平又显著下降。由此说明MnEcR可能作为与胚胎发生相关的某些蜕皮甾类信号分子的媒介物,并间接说明在胚胎发生中某些蜕皮甾类参与了重要的生理反应。 展开更多

关键词 蜕皮激素受体 日本沼虾 胚胎发生 克隆 表达分析

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麦红吸浆虫蜕皮激素受体(EcR)基因的克隆与表达分析 被引量：3

6

作者 马康生 李伯辽 +1 位作者 陈浩 仵均祥 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期605-611,共7页

为了研究蜕皮激素受体(EcR)在麦红吸浆虫Sitodiplosis mosellana(Géhin)滞育活动中的作用,利用RT-PCR和RACE技术克隆得到了麦红吸浆虫蜕皮激素受体基因cDNA全长,并通过Real-time quantitative PCR研究了其表达情况。该cDNA全长序... 为了研究蜕皮激素受体(EcR)在麦红吸浆虫Sitodiplosis mosellana(Géhin)滞育活动中的作用,利用RT-PCR和RACE技术克隆得到了麦红吸浆虫蜕皮激素受体基因cDNA全长,并通过Real-time quantitative PCR研究了其表达情况。该cDNA全长序列被命名为SmEcR(GenBank登录号:KC491135),其开放阅读框长1386bp,编码461个氨基酸残基。其蛋白预测分子量52.90kD,理论等电点6.24。该蛋白与其他已报道的昆虫EcR蛋白具有很高的同源性,其中与迟眼蕈蚊Bradysia coprophila中相应蛋白的氨基酸序列一致性高达92%。SmEcR在麦红吸浆虫不同滞育时期和不同虫态中均有表达,且在不同滞育时期、不同虫态中的表达量差异很大。在滞育不同时期以11月表达量最高,12月表达量最低;在不同虫态以麦穗幼虫中的表达量较低,而成虫中的表达水平很高。本研究为进一步明确SmEcR在麦红吸浆虫滞育调控中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 麦红吸浆虫 蜕皮激素受体 基因克隆 滞育 表达分析

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脊椎动物雌激素对家蚕卵黄原蛋白基因表达的调控及其与蜕皮激素受体相互作用的MST分析 被引量：1

7

作者 王勇 彭楚玥 +3 位作者 吴金鑫 沈关望 林英 夏庆友 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1367-1375,共9页

【目的】雌激素雌二醇(E_2)在脊椎动物中通过雌激素受体(ER)调节脊椎动物的生长发育和繁殖。昆虫中并没有ER,但有研究显示某些昆虫能对E_2产生一定的应答。本研究在明确E_2能影响家蚕Bombyx mori卵黄原蛋白基因(BmVg)表达的前提下,分析... 【目的】雌激素雌二醇(E_2)在脊椎动物中通过雌激素受体(ER)调节脊椎动物的生长发育和繁殖。昆虫中并没有ER,但有研究显示某些昆虫能对E_2产生一定的应答。本研究在明确E_2能影响家蚕Bombyx mori卵黄原蛋白基因(BmVg)表达的前提下,分析其对这一基因表达的调控机制。【方法】取BmVg高量表达时的家蚕雌性幼虫(上蔟后60 h)脂肪体,用不同浓度(0.001,0.05,0.5,5和50 nmol/L)E_2处理后,通过qRT-PCR检测BmVg表达的变化,分析家蚕对E_2的应答;克隆家蚕蜕皮激素受体基因(BmEcRB1),构建原核表达载体,表达并纯化BmEcRB1蛋白后与E_2体外孵育,通过微量热泳动仪(MST)分析E_2与BmEcRB1的结合情况。【结果】不同浓度E_2均显著抑制离体培养的雌蚕脂肪体中BmVg基因的表达。MST实验证实,E_2与BmEcRB1具有一定的亲和力,解离常数(Kd)为77.8±22μmol/L。【结论】结果说明,E_2对BmVg表达的影响是通过与蜕皮激素(20E)竞争性结合BmEcRB1实现的。 展开更多

关键词 家蚕 雌二醇 蜕皮激素 卵黄原蛋白 蜕皮激素受体 基因表达 微量热泳动仪

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昆虫蜕皮激素受体研究进展 被引量：4

8

作者 王菁菁 胡琼波 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期721-729,共9页

昆虫的蜕皮激素(molting hormone,MH)是甾醇类激素,在昆虫体内的活性形式为20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)。在昆虫的正常发育过程中,昆虫的蜕皮、变态和繁殖受到蜕皮激素的调控。昆虫蜕皮激素受体(ecdysone receptor,EcR)和超... 昆虫的蜕皮激素(molting hormone,MH)是甾醇类激素,在昆虫体内的活性形式为20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)。在昆虫的正常发育过程中,昆虫的蜕皮、变态和繁殖受到蜕皮激素的调控。昆虫蜕皮激素受体(ecdysone receptor,EcR)和超气门蛋白(ultraspiracle,USP)均属于核受体超家族成员,具有核受体的结构特征,包括A/B域(转录激活域transactivation domain)、C域(DNA结合域DNA-binding domain,DBD)、D域(铰链域hinge region)、E域(配体结合域ligand binding domain,LBD)和F域。蜕皮激素受体在昆虫蜕皮、变态和繁殖等重要的生命过程中的级联反应启动位置,对昆虫的生长发育和繁殖的正常完成有着非常重要的作用。蜕皮激素通过与蜕皮激素受体和超气门蛋白组成的复合体相互作用,然后启动一系列级联反应的过程。本文介绍了EcR和USP的结构和功能,以及它们与蜕皮激素相互作用的机理,并对EcR在农业害虫防治等方面的应用进行了介绍,并讨论了研究中遇到的问题以及对未来的研究进行展望。 展开更多

关键词 蜕皮激素受体 超气门蛋白 核受体 20-羟基蜕皮酮(20E) 异质二聚体

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外源蜕皮激素和保幼激素类似物对家蚕丝腺蜕皮激素受体基因表达活性的影响 被引量：2

9

作者 郭晓琪 王桂花 +3 位作者 郭华 徐欣 张升祥 崔为正 《北方蚕业》 2014年第2期4-9,共6页

为了进一步探讨外源蜕皮激素(Moulting hormone,MH)和保幼激素类似物(Juvenile hormone analogue,JHA)处理家蚕的增丝机理,本试验分别于5龄24h注射植源性MH和5龄72h注射JHA,采用半定量RT-PCR方法,测定了蜕皮激素受体(ecdysone receptor,... 为了进一步探讨外源蜕皮激素(Moulting hormone,MH)和保幼激素类似物(Juvenile hormone analogue,JHA)处理家蚕的增丝机理,本试验分别于5龄24h注射植源性MH和5龄72h注射JHA,采用半定量RT-PCR方法,测定了蜕皮激素受体(ecdysone receptor,EcR)(BmEcR-B1型)基因在家蚕5龄不同发育时期在中部丝腺和后部丝腺中表达量的变化。结果表明,正常对照家蚕丝腺中,EcR基因的表达均在5龄前期表达量较低,中后期表达量较高,但丝腺不同部位,表达模式不同。5龄24h用MH处理后,无论是中部丝腺还是后部丝腺,EcR基因的表达活性与对照组相比,总体上均是先上调后下降;而5龄72h用JHA处理,EcR基因的表达一直到对照熟蚕前均低于对照区;但两种处理区在对照区熟蚕之后仍有不同程度的表达。说明外源激素可通过影响MH受体基因的表达,从而影响了MH信号转导,进一步影响丝蛋白的合成。 展开更多

关键词 家蚕 蜕皮激素 保幼激素类似物 蜕皮激素受体 基因表达

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蜕皮激素诱导家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的表达变化 被引量：8

10

作者 苏保锦 吴玉 +4 位作者 赵斯斯 赵国栋 卫正国 李兵 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期257-263,共7页

昆虫蜕皮激素受体(ecdysone receptor,EcR)是一种核内受体,为蜕皮激素的分子靶标。用0.002 g/L蜕皮激素溶液浸泡过的桑叶饲喂家蚕5龄幼虫,采用双跟踪标定定量PCR(dual-spike-in qPCR)方法,检测家蚕蜕皮激素受体基因BmEcR-A、BmEcR-B1和... 昆虫蜕皮激素受体(ecdysone receptor,EcR)是一种核内受体,为蜕皮激素的分子靶标。用0.002 g/L蜕皮激素溶液浸泡过的桑叶饲喂家蚕5龄幼虫,采用双跟踪标定定量PCR(dual-spike-in qPCR)方法,检测家蚕蜕皮激素受体基因BmEcR-A、BmEcR-B1和超气门蛋白(ultraspiracle,USP)基因BmUSP在家蚕幼虫马氏管、脂肪体、中肠组织的转录水平变化,分析蚕体组织以及BmEcR和BmUSP基因在蜕皮激素代谢过程中的作用与表达调控特征。结果表明:家蚕EcR的2种同工型基因BmEcR-A和BmEcR-B1的mRNA转录水平均变化显著,在脂肪体中的转录水平最高,其它组织相对较低;BmUSP的mRNA转录水平同样变化显著,且在脂肪体中的转录水平最高,马氏管次之,中肠最低。另检测正常情况下4龄眠期和5龄末期BmEcR-A、BmEcR-B1和BmUSP的mRNA转录水平相对于其它发育时期较高,且脂肪体中的转录水平要明显高于其它组织。BmEcR-A、BmEcR-B1和BmUSP均在家蚕幼虫脂肪体中高水平表达,表明了脂肪体在蜕皮激素代谢过程中的重要性。 展开更多

关键词 家蚕 蜕皮激素受体 超气门蛋白 幼虫组织 双跟踪标定定量PCR

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三疣梭子蟹蜕皮激素受体EcR基因的cDNA克隆及表达分析 被引量：5

11

作者 张晓燕 李健 +3 位作者 刘萍 陈萍 孙铭 葛红星 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2014年第1期96-103,共8页

通过简并引物扩增及Smart TM Race技术,首次克隆了三疣梭子蟹Portunus trituberculatus蜕皮激素受体EcR基因cDNA全长序列。该基因全长2 996bp,编码一个由503个氨基酸组成的多肽,预测理论等电点pI为7.33,分子量大小为55.69kDa。同源性及... 通过简并引物扩增及Smart TM Race技术,首次克隆了三疣梭子蟹Portunus trituberculatus蜕皮激素受体EcR基因cDNA全长序列。该基因全长2 996bp,编码一个由503个氨基酸组成的多肽,预测理论等电点pI为7.33,分子量大小为55.69kDa。同源性及系统进化分析表明,三疣梭子蟹EcR基因与青蟹、拟穴青蟹、大西洋招潮蟹、陆地蟹、美洲螯虾、褐虾、日本对虾的同源性分别为94%、90%、88%、84%、82%、73%、66%。荧光定量RT-PCR结果表明,EcR在肝胰腺、卵巢、肌肉、眼柄、鳃和心脏中均有分布,在肝胰腺中表达量最高,在心脏中最低。高盐(45)胁迫下,EcR基因的表达量在24h后显著低于对照组(P<0.05),总体呈下降趋势;低盐(11)胁迫条件下,EcR转录组的表达量呈现先降低后上升的趋势,在12h达到最低,之后逐渐上升,在48h之后显著高于对照组(P<0.05)。 展开更多

关键词 三疣梭子蟹 蜕皮激素受体 基因克隆 急性盐度胁迫 RT-PCR

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蜕皮激素受体和超气门蛋白基因在柞蚕发育过程及激素诱导后的表达模式 被引量：5

12

作者 汝玉涛 王勇 +5 位作者 周敬林 王德意 马月月 姜义仁 高清 秦利 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期594-602,共9页

昆虫蜕皮激素受体和超气门蛋白形成的异源二聚体介导蜕皮激素信号,起始包括转录因子表达在内的蜕皮级联反应,从而使昆虫进入蜕皮和变态等生命过程。克隆了柞蚕的2个蜕皮激素受体相关基因,命名为Ap EcRB1(Gen Bank登录号:KY411159)和Ap U... 昆虫蜕皮激素受体和超气门蛋白形成的异源二聚体介导蜕皮激素信号,起始包括转录因子表达在内的蜕皮级联反应,从而使昆虫进入蜕皮和变态等生命过程。克隆了柞蚕的2个蜕皮激素受体相关基因,命名为Ap EcRB1(Gen Bank登录号:KY411159)和Ap USP1(Gen Bank登录号:KY411160)。2个基因的ORF序列全长分别为1 758 bp、1 401 bp,编码585个、466个氨基酸。半定量RT-PCR检测这2个基因除在柞蚕幼虫血淋巴中不表达之外,在其他组织中均有表达,在丝腺和脂肪体中的表达量较高。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析2个基因在幼虫蜕皮前及化蛹前后呈现大幅度上调表达的规律。注射20-羟基蜕皮甾酮(20E)诱导启动滞育蛹的发育,结果诱导组的滞育蛹经过17 d羽化,比对照组滞育蛹提早羽化。滞育蛹中2个基因的表达量在注射20E后均明显下降,其中Ap EcRB1在蛹发育后期的12 d内一直处于较低水平,但羽化前期其表达量急剧上升,蛹发育16 d(羽化前1 d)达到最高;Ap USP1基因的表达量从注射后8 d开始升高,至16 d时达到最高。以上研究结果丰富了柞蚕变态发育过程中蜕皮激素调控作用的分子信息。 展开更多

关键词 柞蚕 蜕皮激素受体蛋白 超气门蛋白 基因克隆 表达模式

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家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的诱导表达模式及蜕皮激素响应元件核心保守区的识别 被引量：2

13

作者 刘云垒 杜杰 +5 位作者 赵晓明 苏琳瑛 卫正国 李兵 虞晓华 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期425-431,共7页

核受体基因家族是介导昆虫蜕皮激素(20E)作用的关键信号分子。为了研究家蚕丝腺中核受体异源二聚体编码基因——蜕皮激素受体基因Bm EcR和超气门蛋白基因Bm USP的表达模式,应用实时荧光定量PCR技术检测家蚕5龄幼虫正常状态下和用2×... 核受体基因家族是介导昆虫蜕皮激素(20E)作用的关键信号分子。为了研究家蚕丝腺中核受体异源二聚体编码基因——蜕皮激素受体基因Bm EcR和超气门蛋白基因Bm USP的表达模式,应用实时荧光定量PCR技术检测家蚕5龄幼虫正常状态下和用2×10^(-3)μg/μL蜕皮激素处理后Bm EcR与Bm USP在丝腺组织中的表达变化。结果表明,20E处理后,Bm EcRA、Bm EcR-B1和Bm USP在中、后部丝腺的表达量与对照组相比均有不同程度增加,说明20E能够促进Bm EcR-A、Bm EcR-B1和Bm USP基因的表达;但中部丝腺与后部丝腺Bm EcR-A、Bm EcR-B1和Bm USP基因的表达变化趋势不同。利用等温滴定量热技术(ITC)获得的家蚕蜕皮激素受体结构域蛋白Bm EcR-B1D与蜕皮激素响应元件Bm E75A-EcRE及其缺失突变体相互作用的亲和力常数(K)、反应热(ΔH)和熵(ΔS),显示了Bm EcR-B1D蛋白能够与Bm E75A-EcRE进行结合,并发现Bm E75A-EcRE的核心保守区为编码序列TCTTC,推测该区域有可能是Bm EcR-B1D蛋白结合在Bm E75A-EcRE上的精确位点。 展开更多

关键词 家蚕 蜕皮激素受体 超气门蛋白 响应元件 实时荧光定量PCR 等温滴定量热技术

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斜纹夜蛾酵母双杂交文库的构建及其在蜕皮激素受体互作蛋白筛选中的应用 被引量：1

14

作者 范琳芳 何文婧 +4 位作者 苏智仁 朱家明 罗威 张纯 黄立华 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期801-811,共11页

【目的】蜕皮激素在昆虫变态发育中起着关键的调控作用。蜕皮激素活化为20-羟基蜕皮酮（20-hydroxyecdysone,20E）后与蜕皮激素受体二聚体〔蜕皮激素受体（ecdysone receptor,EcR）和超气门蛋白（ultraspiracle protein,USP）〕结合,启... 【目的】蜕皮激素在昆虫变态发育中起着关键的调控作用。蜕皮激素活化为20-羟基蜕皮酮（20-hydroxyecdysone,20E）后与蜕皮激素受体二聚体〔蜕皮激素受体（ecdysone receptor,EcR）和超气门蛋白（ultraspiracle protein,USP）〕结合,启动20E诱导的级联反应。本研究旨在从互作蛋白角度探究EcR/USP自身调控的分子机理。【方法】以重要农业害虫斜纹夜蛾Spodoptera litura为研究对象,通过构建酵母双杂交筛选系统分别筛选了与EcR和USP相互作用的蛋白。【结果】文库转化效率达到3.0×106cfu/μg,文库滴度达到1.3×108cfu/m L,文库插入片段大小在500~2 000 bp之间。4种诱饵质粒（EcRA/p GBKT7,EcRB1/p GBKT7,USP1/p GBKT7和USP2/p GBKT7）对酵母细胞无毒性,并且无自激活性,说明构建的酵母双杂交文库质量可靠。用以上4种诱饵质粒筛选酵母双杂交文库,共得到110个互作蛋白,其中与EcRB1,USP1和USP2互作的蛋白分别有26,52和32个,未筛选到与EcRA互作的蛋白。随后,从中挑选了Dna J-5（Hsp40 homolog 5,一种热激蛋白分子伴侣）,MBF2（mediator of Bm FTZ-F1 type 2,一种转录共激活子）,polyubiquitin（多聚泛素类蛋白）,esr16（ecdysteroid regulated 16k Da protein,一种蜕皮激素调控蛋白）和NEDD8-like（neural precursor cell expressed,developmentally down-regulated protein 8,一种泛素调节相关蛋白）5种蛋白,利用酵母双杂交和Far-Western印迹法进一步验证了蛋白间的互作关系。【结论】分子伴侣和泛素化修饰等在蜕皮激素受体调控中可能起着重要作用。本研究对深入理解昆虫变态发育的分子机理具有重要意义。 展开更多

关键词 斜纹夜蛾 变态发育 蜕皮激素受体 酵母双杂交文库 互作蛋白

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三化螟蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的克隆和序列分析 被引量：2

15

作者 谢子正 韩召军 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期17-22,共6页

利用RACE技术,根据已有的三化螟转录组数据,设计特异引物对三化螟的蜕皮激素受体(EcR)和超气门蛋白(USP)基因进行克隆,获得了三化螟EcR和USP基因的全长序列。EcR基因全长2857bp,氨基酸序列包括545个氨基酸。USP基因全长共2082bp,氨基酸... 利用RACE技术,根据已有的三化螟转录组数据,设计特异引物对三化螟的蜕皮激素受体(EcR)和超气门蛋白(USP)基因进行克隆,获得了三化螟EcR和USP基因的全长序列。EcR基因全长2857bp,氨基酸序列包括545个氨基酸。USP基因全长共2082bp,氨基酸序列包括408个氨基酸。序列比对后发现,三化螟EcR和USP基因的氨基酸序列与已报道的鳞翅目昆虫EcR和USP基因的氨基酸序列具有很高的同源性,其中与二化螟的相似性分别达到94%和97%。序列分析表明,三化螟EcR和USP序列具有昆虫EcR和USP基因的特征结构:DNA结合域和2个锌指结构。 展开更多

关键词 蜕皮激素受体 超气门蛋白 基因克隆 序列分析

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靶向蜕皮激素受体的新型4,5,6,7-四氢-2H-吲唑酰肼类衍生物的设计、合成及杀虫活性 被引量：1

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作者 郭兵博 蒋标标 +4 位作者 董雅雯 金小宇 崔丽 张莉 杨新玲 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期39-48,共10页

为了发现结构新颖的昆虫生长调节剂,以蜕皮激素受体(EcR)为靶标,以课题组发现的高活性化合物C(N-(4-(叔丁基)苯基)-2-苯基-2,4,5,6,7,8-六氢环庚基[C]吡唑-3-甲酰胺)为先导化合物,利用活性亚结构拼接的方法,设计合成了25个未见文献报道... 为了发现结构新颖的昆虫生长调节剂,以蜕皮激素受体(EcR)为靶标,以课题组发现的高活性化合物C(N-(4-(叔丁基)苯基)-2-苯基-2,4,5,6,7,8-六氢环庚基[C]吡唑-3-甲酰胺)为先导化合物,利用活性亚结构拼接的方法,设计合成了25个未见文献报道的新型4,5,6,7-四氢-2H-吲唑酰肼类衍生物,其结构经过核磁共振氢谱、碳谱和高分辨质谱确证。分子对接结果表明,所有目标化合物与EcR具有较好的结合力,其中化合物I-15可以很好地结合到EcR的活性位点,其结合模式和虫酰肼相似;靶标蛋白结合实验证明,I-15在40 mg/L下与EcR具有较好的结合活性(75.8%±7.2%)。初步杀虫活性测定结果表明,部分目标化合物在500 mg/L下对鳞翅目害虫小菜蛾表现出一定的杀虫活性,但总体活性均不如虫酰肼和先导化合物C;进一步分析发现,目标化合物的脂水分配系数(ClogP)普遍低于先导化合物和对照药剂虫酰肼,推测是由于目标化合物的亲脂性较差,从而影响其穿透昆虫表皮的能力,导致杀虫活性较弱。该研究对后续化合物的结构优化具有重要参考价值。 展开更多

关键词 蜕皮激素受体 昆虫生长调节剂 4 5 6 7-四氢-2H-吲唑酰肼衍生物 合成 杀虫活性 蛋白结合活性

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低温对麦红吸浆虫滞育解除及蜕皮激素受体基因EcR和热激蛋白基因Hsp70和Hsp90表达水平的影响 被引量：2

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作者 张国军 王稳 +2 位作者 南江磊 成卫宁 朱克岩 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1398-1406,共9页

【目的】本研究旨在明确破茧率和破茧所需时间作为典型的专性幼虫期滞育昆虫麦红吸浆虫Sitodiplosis mosellana滞育解除指标的可行性,探讨蜕皮激素受体基因EcR和热激蛋白基因Hsp 70和Hsp 90在低温解除滞育中的作用。【方法】9月上旬采... 【目的】本研究旨在明确破茧率和破茧所需时间作为典型的专性幼虫期滞育昆虫麦红吸浆虫Sitodiplosis mosellana滞育解除指标的可行性,探讨蜕皮激素受体基因EcR和热激蛋白基因Hsp 70和Hsp 90在低温解除滞育中的作用。【方法】9月上旬采自田间的麦红吸浆虫滞育幼虫在低温(4℃)和自然变温处理不同时间(0~90 d)后转移至24℃化蛹,调查幼虫的破茧率、化蛹率及破茧和化蛹所需时间;采用qPCR技术分析4℃低温终止滞育并在24℃下恢复发育的幼虫EcR,Hsp 70和Hsp 90的mRNA水平。【结果】不同时间低温(4℃)和自然变温处理的麦红吸浆虫滞育幼虫破茧率和化蛹率以及破茧和化蛹所需时间均存在显著差异。未经低温(4℃)处理的幼虫在水分满足的条件下破茧率为71.3%,但均不能化蛹;低温(4℃)处理60 d内,随着处理时间的延长破茧率和化蛹率逐渐升高,破茧和化蛹所需时间逐渐缩短;与4℃低温处理30~60 d相比,自然变温处理30~60 d的幼虫化蛹率显著较低;4℃低温处理60 d和自然变温处理90 d后幼虫的化蛹率均超过91%。低温(4℃)处理显著提高了麦红吸浆虫幼虫EcR,Hsp 70和Hsp 90的表达量,其中处理30 d时其表达量最高,随着低温(4℃)处理时间的延长,表达量逐渐降低,大部分幼虫滞育解除后表达量趋于恒定。【结论】低温能显著促进麦红吸浆虫的滞育解除,效果优于9-10月自然变温;破茧率及破茧所需时间可作为评判麦红吸浆虫幼虫滞育强度的参考,但不能独立作为滞育解除的指标;EcR,Hsp 70和Hsp 90的表达水平与滞育强度密切相关,在麦红吸浆虫滞育解除中发挥潜在作用。 展开更多

关键词 麦红吸浆虫 滞育 低温 滞育解除 蜕皮激素受体 热激蛋白

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家蚕蜕皮激素受体基因EcR-A的启动子活性区域分析

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作者 杜杰 黄明霞 +3 位作者 刘云垒 赵国栋 卫正国 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1000-1005,共6页

昆虫蜕皮激素(20-羟基蜕皮酮)与蜕皮激素受体(EcR)和超气门蛋白(USP)相互作用启动蜕皮级联反应过程,由EcR和USP组成的复合物是蜕皮激素的作用靶标。为研究家蚕EcR-A基因(Bm EcR-A)的转录调控机制,利用双荧光素酶报告系统和Bac-to-Bac表... 昆虫蜕皮激素(20-羟基蜕皮酮)与蜕皮激素受体(EcR)和超气门蛋白(USP)相互作用启动蜕皮级联反应过程,由EcR和USP组成的复合物是蜕皮激素的作用靶标。为研究家蚕EcR-A基因(Bm EcR-A)的转录调控机制,利用双荧光素酶报告系统和Bac-to-Bac表达系统制备含5'端长度不同Bm EcR-A基因启动子片段的重组杆状病毒,分别将重组杆状病毒感染家蚕后检测启动子的活性。结果表明,在Bm EcR-A启动子的-637^-518 bp和-278^-177 bp区域存在正调控元件,并且能被0.002 g/L 20E诱导。通过构建含5'端长度不同Bm EcR-A启动子片段的荧光素酶报告质粒,在细胞水平上进一步分析Bm EcR-A启动子活性区域,结果显示:在-637^-612 bp和-278^-177 bp区域包含Bm EcR-A基因启动子转录调控必需的重要调控元件;当删除-197^-177 bp区域后,启动子活性明显增强,推测在该区域可能含有一个转录抑制因子结合位点。研究结果提示:上述启动子区域包含有转录调控元件的结合位点,是进一步研究Bm EcR-A启动子核心区域的重要线索。 展开更多

关键词 家蚕 蜕皮激素受体 EcR-A基因 启动子活性 双荧光素酶报告系统 Bac-to-Bac表达系统

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novel-m0287-3p调控斜纹夜蛾中肠蜕皮激素受体的表达 被引量：2

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作者 钟其恩 岑永杰 +2 位作者 马康 彭亚楠 郑思春 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2023年第4期988-996,共9页

microRNA(miRNA)是一类长度约为23个核苷酸的非编码内源性小分子RNA,参与真核生物基因表达的调控,从而在生物发育和应对环境中起着重要的作用。为了探讨novel miRNA在害虫发育中的作用,本研究对斜纹夜蛾Spodoptera litura miRNA数据库... microRNA(miRNA)是一类长度约为23个核苷酸的非编码内源性小分子RNA,参与真核生物基因表达的调控,从而在生物发育和应对环境中起着重要的作用。为了探讨novel miRNA在害虫发育中的作用,本研究对斜纹夜蛾Spodoptera litura miRNA数据库中表达量较高的novel-m0287-3p进行了研究。通过生物信息学分析,确定了novel-m0287-3p是一个新的miRNA,并预测其可能靶向蜕皮激素受体EcRb1,表明novel-m0287-3p可能参与斜纹夜蛾发育的调控。双荧光素酶实验表明,novel-m0287-3p分别结合于EcRb13′非编码区的2个位点上。实时荧光PCR结果显示novel-m0287-3p和EcRb1均在斜纹夜蛾的中肠中表达。为了进一步揭示novel-m0287-3p对EcRb1表达的调控以及对幼虫发育的影响,本研究进行了体内实验。将novel-m0287-3p的模拟体类似物注射入斜纹夜蛾幼虫,结果显示斜纹夜蛾体内EcRb1的mRNA水平发生了下调,证明novel-m0287-3p能够抑制幼虫EcRb1的表达。向4龄第1天的斜纹夜蛾幼虫注射novel-m0287-3p后,幼虫的生长受到抑制;而注射斜纹夜蛾6龄幼虫则导致其化蛹滞后。研究结果表明,novel-m0287-3p可通过调控蜕皮激素受体EcRb1的表达,从而影响斜纹夜蛾的生长发育。 展开更多

关键词 斜纹夜蛾 novel-m0287-3p 生长发育 蜕皮激素受体

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沉默蜕皮激素受体对雌性中黑盲蝽生殖力的影响

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作者 黄星星 郑宛莹 +2 位作者 薛汇 焦盼阳 陈利珍 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期164-177,共14页

中黑盲蝽Adelphocoris suturalis是一种重要的农业害虫,主要为害棉花、果树和牧草等作物。昆虫保幼激素(juvenile hormone, JH)与蜕皮激素(molting hormone, 20E)是调控昆虫生殖的主要因素。本研究运用基因克隆、基因沉默(RNAi)、实时... 中黑盲蝽Adelphocoris suturalis是一种重要的农业害虫,主要为害棉花、果树和牧草等作物。昆虫保幼激素(juvenile hormone, JH)与蜕皮激素(molting hormone, 20E)是调控昆虫生殖的主要因素。本研究运用基因克隆、基因沉默(RNAi)、实时荧光定量PCR(qPCR)等技术研究蜕皮激素受体(ecdysone receptor, EcR)、超气门蛋白(ultraspiracle protein, USP)在中黑盲蝽生殖调控中的作用。结果表明,中黑盲蝽EcR基因的ORF全长1 413 bp,编码470个氨基酸。预测蛋白质分子量为53.65 kD,pI值为7.79。中黑盲蝽USP基因ORF全长1 209 bp,编码402个氨基酸。预测蛋白质分子量为44.99 kD, pI值为7.94。与对照相比,注射dsEcR、dsUSP后6~18 d的中黑盲蝽体内EcR基因、USP基因在转录水平分别被显著抑制;卵巢的挂卵量分别仅有对照组的31.5%、86.6%;单雌产卵量减少36.0%~80.4%,显著低于对照。EcR和USP基因沉默后,产卵前期与对照相比无显著差异;雌成虫寿命比对照组减少2.4~5 d。上述研究表明,沉默蜕皮激素信号通路的2个关键基因EcR和USP对中黑盲蝽的生殖力产生显著的影响,蜕皮激素信号通路可能是中黑盲蝽生殖调控的关键信号通路之一。 展开更多

关键词 中黑盲蝽 生殖调控 20-羟基蜕皮酮(20E) 蜕皮激素受体 超气门蛋白

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