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蜜蜂蜂王不同于工蜂的关键因素-蜂王浆主蛋白1 被引量:2
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作者 柳丹丹 肖发 +6 位作者 杨晓丽 李玫璐 曾艳军 于张颖 沈立荣 裘卫 尹志红 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期371-375,共5页
蜂王浆是决定蜜蜂幼虫发育中级型分化,即成为蜂王还是工蜂的关键环境因素,而蜂王浆主蛋白(main royal jelly proteins,MRJPs)是反映蜂王浆新鲜度的重要指标。日本镰仓昌树以蜜蜂和果蝇为模型的最新研究表明,MRJP1是蜂王浆中决定蜜蜂级... 蜂王浆是决定蜜蜂幼虫发育中级型分化,即成为蜂王还是工蜂的关键环境因素,而蜂王浆主蛋白(main royal jelly proteins,MRJPs)是反映蜂王浆新鲜度的重要指标。日本镰仓昌树以蜜蜂和果蝇为模型的最新研究表明,MRJP1是蜂王浆中决定蜜蜂级型分化的关键因子,该蛋白可通过激活虫体脂肪体中的表皮生长因子信号通路,引发个体增大、发育时间缩短和卵巢发育等蜂王特征的出现。因此,今后很有必要进一步开展MRJP1对人体的营养功能和作用机理研究,为MRJP1应用于功能食品提供科学依据。 展开更多
关键词 蜜蜂 蜂王浆 蜂王浆蛋白1(mrjp1) 级型分化
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蜂王浆主蛋白1低聚体的分离纯化及其圆二色谱分析 被引量:2
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作者 张新 张红城 +1 位作者 董捷 张根生 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第17期63-67,共5页
蜂王浆主蛋白1(major royal jelly protein 1,MRJP1)是蜂王浆主蛋白家族中最重要的成员之一,MRJP1存在单体和低聚体两种形式。为了研究MRJP1低聚体的二级结构信息,首先利用ToyoScreen GigaCap Q-650M离子交换柱从新鲜蜂王浆中纯化出MRJP... 蜂王浆主蛋白1(major royal jelly protein 1,MRJP1)是蜂王浆主蛋白家族中最重要的成员之一,MRJP1存在单体和低聚体两种形式。为了研究MRJP1低聚体的二级结构信息,首先利用ToyoScreen GigaCap Q-650M离子交换柱从新鲜蜂王浆中纯化出MRJP1低聚体,经分析超速离心和高效液相色谱-串联质谱技术鉴定其为MRJP1低聚体后,再通过圆二色谱技术检测MRJP1低聚体在不同浓度Ca2+条件下(10、50、200 mmol/L)二级结构的变化情况,并测定其变性温度。结果表明:该分离方法可以一步纯化出MRJP1低聚体,MRJP1低聚体的二级结构中β-折叠占比最高(55%左右),其次是无规卷曲(20%左右)和α-螺旋(15%左右),β-转角(10%左右)含量最低;MRJP1低聚体的变性温度为55℃。实验提出了MRJP1低聚体新的纯化方法及其二级结构的基本信息。 展开更多
关键词 蜂王浆 mrjp1 纯化 圆二色谱
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利用不同疏水色谱柱分离蜂王浆主蛋白1
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作者 汪雪玉 乔江涛 +2 位作者 刘印康 张红城 董捷 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第1期121-127,共7页
目的:比较不同疏水色谱柱对蜂王浆主蛋白1(major royal jelly protein 1,MRJP 1)的分离效果,并筛选出适合分离MRJP 1寡聚体和单体的色谱柱。方法:首先分别采用12种疏水色谱柱对蜂王浆蛋白粗提液进行分离,然后使用非变性电泳验证所分离MR... 目的:比较不同疏水色谱柱对蜂王浆主蛋白1(major royal jelly protein 1,MRJP 1)的分离效果,并筛选出适合分离MRJP 1寡聚体和单体的色谱柱。方法:首先分别采用12种疏水色谱柱对蜂王浆蛋白粗提液进行分离,然后使用非变性电泳验证所分离MRJP 1组分的寡聚体和单体形式。结果:Hitrap Butyl HP疏水色谱柱可以将所有的MRJP 1从蜂王浆蛋白粗提液中分离出来,并得到分别以MRJP 1寡聚体和MRJP 1单体为主的2个组分。结论:利用疏水色谱柱可以有效地分离MRJP 1。 展开更多
关键词 蜂王浆蛋白1 疏水色谱柱 非变性电泳 蛋白分离
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蜂王浆主蛋白2在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定
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作者 段香媛 武江利 +1 位作者 魏俏红 冯毛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第10期3779-3786,共8页
本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达蜂王浆主蛋白2(MRJP2),为后续MRJP2功能的深入研究提供材料。根据GenBank中意大利蜜蜂(Apis mellifera L.)MRJP2基因序列,经PCR扩增、克隆至真核表达载体pFastBac1,构建重组杆状病毒质粒MRJ... 本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达蜂王浆主蛋白2(MRJP2),为后续MRJP2功能的深入研究提供材料。根据GenBank中意大利蜜蜂(Apis mellifera L.)MRJP2基因序列,经PCR扩增、克隆至真核表达载体pFastBac1,构建重组杆状病毒质粒MRJP2-Bacmid并转染至Sf9昆虫细胞,以P2代杆状病毒感染Sf9细胞进行诱导表达,利用层析柱和离子交换柱对表达产物进行纯化,并通过SDS-PAGE、Western blotting及四极杆静电场轨道阱高分辨质谱仪(Q Exactive)对目的蛋白进行分析验证。结果显示,本试验成功构建杆状病毒质粒MRJP2-Bacmid,转染至Sf9昆虫细胞并获得表达产物。SDS-PAGE和Western blotting验证结果表明,本研究成功利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达出大小约为52 ku的MRJP2重组蛋白,且纯度较高;质谱分析结果显示,该重组蛋白匹配到蜜蜂蛋白质数据库中MRJP2的特异性肽段为39个,序列覆盖率为61%,且与MRJP2的匹配得分最高,进一步确认该重组蛋白为MRJP2。本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统成功表达出MRJP2,为后续该蛋白生物学功能的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蜂王浆蛋白2(mrjp2) 昆虫细胞-杆状病毒表达系统 蛋白纯化
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山茱萸多糖对难治性癫痫幼鼠行为学和海马组织中多药耐药基因1b及主穹隆蛋白表达的影响 被引量:2
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作者 冶秀兰 李明 +6 位作者 王兆建 赵海燕 马建宁 刘婧 郑怡 李顺清 张玉 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期644-651,共8页
目的:探讨山茱萸多糖对难治性癫痫(RE)幼鼠行为学和海马组织中多药耐药基因1b(MDR1b)及主穹隆蛋白(MVP)的影响,并阐明其作用机制。方法:40只幼鼠建立RE模型,随机分为模型组(n=8)、低剂量山茱萸多糖组(n=9)、高剂量山茱萸多糖组(n=10)和... 目的:探讨山茱萸多糖对难治性癫痫(RE)幼鼠行为学和海马组织中多药耐药基因1b(MDR1b)及主穹隆蛋白(MVP)的影响,并阐明其作用机制。方法:40只幼鼠建立RE模型,随机分为模型组(n=8)、低剂量山茱萸多糖组(n=9)、高剂量山茱萸多糖组(n=10)和阳性对照组(n=10),同时另设假手术组(n=10)。低和高剂量山茱萸多糖组幼鼠分别给予0.14和0.56 g·kg^(-1)山茱萸多糖灌胃,阳性对照组幼鼠给予154 mg·kg^(-1)拉莫三嗪灌胃,对照组和模型组幼鼠给予等量生理盐水灌胃。观察各组幼鼠癫痫行为学变化,HE染色观察各组幼鼠海马组织病理形态表现,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组幼鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting法分别检测各组幼鼠海马组织中核因子κB(NF-κB)、MDR1b及MVP mRNA和蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组幼鼠癫痫发作总次数增加(P<0.05),总持续时间延长(P<0.05),血清中TNF-α和IL-1β水平、海马组织中NF-κB、MDR1b和MVP mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,低和高剂量山茱萸多糖组及阳性对照组幼鼠癫痫发作总次数减少(P<0.05),总持续时间缩短(P<0.05),血清中TNF-α和IL-1β水平、海马组织中MDR1b、MVP mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。HE染色,假手术组幼鼠海马区细胞形态结构正常;模型组幼鼠海马区细胞排列紊乱,大量细胞呈空泡样变,可见大量核破裂和核固缩;低和高剂量山茱萸多糖组及阳性对照组幼鼠海马区细胞排列较为整齐,细胞轮廓较清晰,可见少量空泡变性、核破裂和核固缩。结论:山茱萸多糖可改善RE幼鼠癫痫发作情况,其机制可能与抑制MDR1b和MVP mRNA和蛋白表达有关。 展开更多
关键词 难治性癫痫 山茱萸多糖 多药耐药基因1b 穹隆蛋白 核因子κB
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巴西橡胶树棒孢霉落叶病病菌蛋白激酶基因突变体⊿CCK1的互补载体构建及转化
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作者 曹申文 蒲金基 +3 位作者 张欣 漆艳香 韦运谢 刘晓妹 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第4期27-30,共4页
为了明确蛋白激酶CCK1在巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌中的致病相关功能,在前期研究基础上通过PCR扩增,获得了该基因1 604 bp的5'端片段(L-C5)和131 bp的3'端片段(L-C3),同时以p CAMBIA3300质粒为模板扩增获得了552 bp抗性标记基因(... 为了明确蛋白激酶CCK1在巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌中的致病相关功能,在前期研究基础上通过PCR扩增,获得了该基因1 604 bp的5'端片段(L-C5)和131 bp的3'端片段(L-C3),同时以p CAMBIA3300质粒为模板扩增获得了552 bp抗性标记基因(L-Bar),并用In-FusionHD Cloning Kit将L-Bar基因反向插入了L-C5和L-C3序列之间,克隆至p UC19载体上,成功构建了⊿CCK1突变体的互补载体p⊿CCK1-C。再从该载体上扩增互补片段,借助PEG介导法转化⊿CCK1突变体的原生质体,经Basta平板筛选、PCR检测和测序鉴定表明,获得了⊿CCK1突变体的互补转化子。为进一步明确CCK1基因在巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌中的致病相关功能打下了材料基础。 展开更多
关键词 棒孢菌 蛋白激酶基因CCK1 ⊿CCK1突变体 互补载体 互补转化子
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基于CRISPR/Cas9构建血管平滑肌细胞特异性Mrjp 1基因敲入小鼠
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作者 沙芳芳 范沛 +2 位作者 杨培长 张璐 李建科 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期4392-4402,共11页
【目的】探究蜂王浆中含量最高的活性分子——蜂王浆主蛋白1(MRJP1)基因敲入血管平滑肌细胞后,在体内水平上是否具有调节小鼠血压的功能。【方法】利用CRISPR/Cas9技术,将可识别小鼠Hipp11位点的gRNA、Cas9和包含Sm22α启动子+Mrjp 1 c... 【目的】探究蜂王浆中含量最高的活性分子——蜂王浆主蛋白1(MRJP1)基因敲入血管平滑肌细胞后,在体内水平上是否具有调节小鼠血压的功能。【方法】利用CRISPR/Cas9技术,将可识别小鼠Hipp11位点的gRNA、Cas9和包含Sm22α启动子+Mrjp 1 cDNA的载体共显微注射小鼠受精卵,制备在血管平滑肌细胞中特异性表达的Mrjp 1基因定点敲入小鼠,并验证敲入位点的正确性。小鼠背部皮下包埋微渗透压缓释泵,持续将血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导野生型(WT)和纯合子(Mrjp 1^(+/-))小鼠,比较不同时间收缩压和舒张压,以及胸主动脉中膜面积/管腔面积(Media/Lumen area)比值的差异。【结果】F0代嵌合体小鼠与野生型交配,产生杂合子(Mrjp 1^(+/-))小鼠,对Mrjp 1^(+/-)小鼠敲入位点同源重组片段的PCR扩增、测序和Southern blotting检测结果显示,Mrjp 1基因成功整合到小鼠染色体Hipp11位点。Mrjp 1^(+/-)小鼠之间交配产生WT、Mrjp 1^(+/-)和Mrjp 1^(+/-)小鼠,Mrjp 1基因在胸主动脉中能够顺利转录和翻译。持续给予AngⅡ,Mrjp 1^(+/-)小鼠收缩压和舒张压升高趋势整体低于WT小鼠,收缩压在第3、6、9、12天差异显著(P<0.05),舒张压在第3(P<0.05)、6(P<0.01)天差异显著;经AngⅡ刺激后,M rjp 1^(+/-)小鼠胸主动脉Media/Lumen area比值亦显著低于WT小鼠(P<0.05)。【结论】Mrjp 1基因特异性敲入小鼠血管平滑肌细胞,可在体内水平上抑制AngⅡ诱导的高血压,为深入了解MRJP1蛋白功能及精准开发蜂王浆提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 小鼠 基因敲入 蜂王浆蛋白1 血压调节
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