酪氨酸蛋白激酶抑制剂的高通量筛选模型 被引量：17

1

作者 韩光亮 尚念勇 杜冠华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期628-631,共4页

目的建立酪氨酸激酶抑制剂的高通量筛选模型。方法以多聚酪氨酸多肽为底物,用提取的酪氨酸激酶催化酪氨酸的磷酸化,用酶标记的单克隆抗体检测酪氨酸激酶的活性,根据待测样品对激酶活性的抑制程度,筛选酪氨酸激酶抑制剂。结果酶标板包被... 目的建立酪氨酸激酶抑制剂的高通量筛选模型。方法以多聚酪氨酸多肽为底物,用提取的酪氨酸激酶催化酪氨酸的磷酸化,用酶标记的单克隆抗体检测酪氨酸激酶的活性,根据待测样品对激酶活性的抑制程度,筛选酪氨酸激酶抑制剂。结果酶标板包被液的浓度为20mg·L-1PGT,使用25mg·L-1蛋白质的PTK初提物,在37℃条件下孵育60min,再使用2000倍稀释的辣根过氧化物酶标记的小鼠抗磷酸化酪氨酸单克隆抗体IgG2bk与反应产物结合、测定。同一微孔板各样品间的测定误差为0.26,微孔板间和日间的测定误差分别为0.79和0.69。Genistein对PTK的IC50为110μmol·L-1。从收集的7680个样品中,筛选出具有活性的样品16个,选中率约2‰。结论建立的酪氨酸激酶抑制剂高通量药物筛选模型,具有灵敏度高、结果稳定的特性,在每块实验上同时设立空白和对照,测定结果具有可比性。 展开更多

关键词 蛋白质酪氨酸激酶 抑制剂 模型 高通量筛选

在线阅读 下载PDF 职称材料

钙黏蛋白与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂治疗肝细胞癌敏感性的相关性 被引量：3

2

作者 邢荣春 郑军 +4 位作者 陈平 郑卫红 刘伟 何政 姚汝铖 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期915-919,共5页

目的探讨钙黏蛋白(E-cadherin)表达在表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗肝细胞癌耐药形成中的作用。方法选取常见的4种肝细胞癌细胞HepG2、BEL-7404、SK-HEP-1和MHCC97,用蛋白质印迹法检测这4种肝癌细胞中E-cadherin的蛋... 目的探讨钙黏蛋白(E-cadherin)表达在表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗肝细胞癌耐药形成中的作用。方法选取常见的4种肝细胞癌细胞HepG2、BEL-7404、SK-HEP-1和MHCC97,用蛋白质印迹法检测这4种肝癌细胞中E-cadherin的蛋白表达,MTT法检测E-cadherin的表达与肝癌细胞EGFR-TKI治疗抑制率的相关性。结果 4种肝癌细胞中HepG2、BEL-7404表达E-cadherin呈阳性并对EGFR-TKI治疗敏感,PD153035和吉非替尼两种EGFR-TKI的药物浓度与肝癌细胞HepG2、BEL-7404的生存率之间存在相关性(P<0.05);然而,肝癌细胞SK-HEP-1和MHCC97中E-cadherin表达阴性并对EGFR-TKI治疗耐药,PD153035和吉非替尼两种药物浓度与肝癌细胞MHCC97、SK-HEP-1的生存率之间不存在相关性(P>0.05)。另外,E-cadherin表达阴性细胞SK-HEP-1转染E-cadherin目的基因后与转入空载体的肝癌细胞相比,EGFR-TKI治疗的敏感性上调(P<0.05)。结论 E-cadherin在调节EGFR分子靶向治疗的敏感性方面起重要作用。 展开更多

关键词 钙黏蛋白 表皮生长因子 酪氨酸激酶抑制剂 肝细胞癌 肿瘤抗药性

在线阅读 下载PDF 职称材料

吲哚衍生物类VEGFR-2酪氨酸激酶抑制剂的从头设计 被引量：5

3

作者 康从民 赵绪浩 +1 位作者 于玉琪 吕英涛 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第3期550-554,共5页

以血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)酪氨酸激酶的晶体结构为基础,采用从头药物设计方法,设计了一系列吲哚类化合物,并用类药性和分子对接进行了筛选,最后得到10个对接能量较低的化合物分子,对具有最低结合能的化合物与VEGFR-2酪氨酸激... 以血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)酪氨酸激酶的晶体结构为基础,采用从头药物设计方法,设计了一系列吲哚类化合物,并用类药性和分子对接进行了筛选,最后得到10个对接能量较低的化合物分子,对具有最低结合能的化合物与VEGFR-2酪氨酸激酶的复合物进行了10 ns的分子动力学模拟,并对其结合模式进行了分析.这些化合物结构新颖,可能作为抗肿瘤的先导化合物或候选药物.本文结果为VEGFR-2酪氨酸激酶抑制剂的进一步改造、设计及合成提供了理论基础,并有助于开发高活性和高选择性的抗肿瘤药物. 展开更多

关键词 血管内皮生长因子受体-2 酪氨酸激酶抑制剂 从头药物设计 类药性 分子对接

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗Gleevec(STI-571)耐受的Bcr-Abl蛋白酪氨酸激酶抑制剂研究进展 被引量：2

4

作者 王立升 于海侠 +2 位作者 郭鑫 肖军海 李松 《广西大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2006年第1期10-14,48,共6页

综述了抗G leevec(ST I-571)耐受的B cr-A b l蛋白酪氨酸激酶抑制剂的研究进展,主要介绍了PD 166326,BM S-354825,AM N 107和ON 012380四种酪氨酸激酶抑制剂.

关键词 Gleevec(STI-571) Bcr-Abl蛋白酪氨酸激酶 抑制剂

在线阅读 下载PDF 职称材料

蛋白酪氨酸激酶抑制剂Genistein抑制肺癌细胞A549体外侵袭作用的研究 被引量：3

5

作者 刘士君 方长清 李建华 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期88-93,共6页

观察蛋白酪氨酸激酶抑制剂Genistein对人肺腺癌细胞株A549细胞侵袭能力的影响,探讨Genistein抑制肺癌细胞侵袭的可能机制。以不同浓度Genistein(20μmol/L和40μmol/L)作用于A549细胞3 d后,分别用基质胶侵袭模型、黏附基质分析、Transw... 观察蛋白酪氨酸激酶抑制剂Genistein对人肺腺癌细胞株A549细胞侵袭能力的影响,探讨Genistein抑制肺癌细胞侵袭的可能机制。以不同浓度Genistein(20μmol/L和40μmol/L)作用于A549细胞3 d后,分别用基质胶侵袭模型、黏附基质分析、Transwell小室趋化运动模型、细胞骨架蛋白染色及RT-PCR法来研究药物处理后细胞侵袭、黏附、运动、聚合型骨架蛋白(F-actin)以及基质金属蛋白酶基因表达的改变。经Genistein处理后,A549细胞的F-actin聚合减少,侵袭能力明显下降,趋化运动能力降低,基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)基因相对表达量增加,但黏附率没有降低。Genistein可降低肺癌细胞的迁移、侵袭能力。F-actin聚合减少,TIMP-1的相对表达量增加,可能是Genistein抑制肺癌细胞侵袭的机制之一。 展开更多

关键词 GENISTEIN 肺癌 侵袭 蛋白酪氨酸激酶抑制剂

在线阅读 下载PDF 职称材料

酪氨酸蛋白激酶抑制剂Tyrphostin AG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用(英文) 被引量：2

6

作者 刘新光 梁念慈 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期8-14,共7页

目的　为了观察TyrphostinAG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机理。方法　利用基因工程克隆 ,表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK... 目的　为了观察TyrphostinAG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机理。方法　利用基因工程克隆 ,表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的 [γ 32 P]ATP或 [γ 32 P]GTP的 [32 P]放射活度来检测。结果　重组人CK2是一种Ca2 +、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。AG114对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 2 0 .8μmol·L- 1,抑制强度介于已知CK2抑制剂 5 ,6 二氯 1 β 呋喃糖苯并咪唑 (DRB)和N (2 氨乙基 ) 5 氯萘 1 硫胺 (A3)之间。AG114对重组人CK2的动力学研究表明 :它与GTP呈混合竞争性抑制作用 ,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论　AG114不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂 ,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂。 展开更多

关键词 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 TYRPHOSTIN AG114 重组人蛋白激酶CK2全酶 抑制作用

在线阅读 下载PDF 职称材料

蛋白酪氨酸激酶抑制剂对RPE细胞趋化因子表达和Ca^(2+)的影响 被引量：1

7

作者 张世杰 张皙 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第9期828-831,共4页

目的研究蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)抑制剂染料木黄酮(Genistein)对白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞趋化因子表达和细胞内Ca2+的影响。方法应用不同剂... 目的研究蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)抑制剂染料木黄酮(Genistein)对白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞趋化因子表达和细胞内Ca2+的影响。方法应用不同剂量IL-1β对RPE细胞进行刺激,RT-PCR法观察细胞IL-8和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)mRNA表达的变化。应用Genistein对RPE细胞培养进行干预,观察其对IL-1β诱导RPE细胞IL-8和MCP-1 mRNA表达的影响。应用Fura2/AM、荧光分光光度计检测IL-1β和Genistein对RPE细胞内Ca2+的影响。结果 RT-PCR结果显示,0.1μg.L-1、1μg.L-1、10μg.L-1IL-1β刺激组IL-8 mRNA相对表达值分别为0.446±0.133、0.727±0.054和0.523±0.106,对照组为0.272±0.088;1μg.L-1、10μg.L-1IL-1β刺激组与对照组比较,差异有统计学意义(P=0.001、0.015)。10μg.L-1IL-1β诱导的RPE细胞MCP-1 mRNA相对表达值与对照组比较,差异有显著统计学意义(P=0.002)。10mg.L-1、50mg·L-1 Genistein对IL-1β诱导的IL-8和MCP-1 mRNA表达具有明显的抑制作用,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。IL-1β引起细胞内Ca2+浓度升高,Genistein对细胞内Ca2+作用与之相反。结论 Genistein对IL-1β诱导的IL-8和MCP-1 mRNA表达具有明显的抑制作用,其机制可能为抑制IL-1β诱导的细胞内Ca2+增加。 展开更多

关键词 视网膜色素上皮细胞 趋化因子 蛋白酪氨酸激酶抑制剂 白介素-1Β 细胞内CA2+

在线阅读 下载PDF 职称材料

体外Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂筛选模型的建立

8

作者 汪辰卉 史影 龚兴国 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期646-650,共5页

在体外构建一个以Src蛋白为靶位点的蛋白酪氨酸激酶抑制剂快速筛选模型,为筛选Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂奠定基础.基因工程表达GST-v-Src蛋白,收集包涵体蛋白,并经变性复性处理.以生物素化的聚Glu∶Tyr(4∶1)为激酶反应底物、以辣根过氧... 在体外构建一个以Src蛋白为靶位点的蛋白酪氨酸激酶抑制剂快速筛选模型,为筛选Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂奠定基础.基因工程表达GST-v-Src蛋白,收集包涵体蛋白,并经变性复性处理.以生物素化的聚Glu∶Tyr(4∶1)为激酶反应底物、以辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的磷酸酪氨酸特异性单克隆抗体(HRP-PY20)检测磷酸酪氨酸残基的酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定获得蛋白的激酶活性,并进行抑制剂筛选.该模型具有靶向性强、快速、简便可行、高通量的特点.用该方法对6种治疗肿瘤配方中常用的中草药进行筛选,筛选出3种中草药水煎剂富含Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂成分. 展开更多

关键词 SRC 蛋白酪氨酸激酶 抑制剂 筛选 中草药

在线阅读 下载PDF 职称材料

酪氨酸激酶抑制剂逆转K562／A02细胞多药耐药的研究 被引量：3

9

作者 单学赟 陈宝安 +12 位作者 夏国华 许文林 丁家华 高冲 孙耘玉 王骏 程坚 赵刚 鲍文 宋慧慧 高峰 王飞 王雪梅 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期90-95,共6页

本研究旨在比较酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼(Imatinib)、尼洛替尼(Nilotinib)对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用。用RT-PCR法检测各组mdr-1mRNA、bcr-abl mRNA表达;用Western blot法检测各组P-gp、P210蛋白表达;用流式细胞术检测各组细胞... 本研究旨在比较酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼(Imatinib)、尼洛替尼(Nilotinib)对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用。用RT-PCR法检测各组mdr-1mRNA、bcr-abl mRNA表达;用Western blot法检测各组P-gp、P210蛋白表达;用流式细胞术检测各组细胞内柔红霉素(DNR)的蓄积。结果表明:0.0625μmol/L伊马替尼、5nmol/L尼洛替尼对K562/A02细胞无明显细胞毒性,伊马替尼和尼洛替尼上述剂量单独作用48小时均下调mdr-1mRNA、bcr-abl mRNA、P-gp、P210蛋白的表达,且尼洛替尼较伊马替尼作用更强。荧光强度检测显示,K562/A02细胞经伊马替尼、尼洛替尼单独处理48小时后,其细胞内DNR浓度分别为K562细胞中的7.85%、12.02%。结论:酪氨酸激酶抑制剂具有很好的逆转细胞耐药作用,且尼洛替尼较伊马替尼逆转作用更强。 展开更多

关键词 酪氨酸激酶抑制剂 伊马替尼 尼洛替尼 MDR1基因 BCR-ABL基因 P-gp P210蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

表观扩散系数在非小细胞肺癌酪氨酸激酶抑制剂治疗效果评价中的应用 被引量：7

10

作者 郑雪萍 马明平 +1 位作者 黄劲柏 俞顺 《中国医学影像学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第4期264-269,共6页

目的研究扩散加权成像(DWI)技术中表观扩散系数(ADC)值在非小细胞肺癌(NSCLC)应用酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗效果评估中的价值。资料与方法前瞻性收集2014年5月-2015年12月经病理证实的19例拟接受TKI的晚期NSCLC患者,于靶向治疗前、治疗... 目的研究扩散加权成像(DWI)技术中表观扩散系数(ADC)值在非小细胞肺癌(NSCLC)应用酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗效果评估中的价值。资料与方法前瞻性收集2014年5月-2015年12月经病理证实的19例拟接受TKI的晚期NSCLC患者,于靶向治疗前、治疗1周后以及治疗4周后进行3次CT及MRI扫描,比较不同时间点肿瘤长径、平均ADC值的变化;分析不同时间点肿瘤平均ADC值与肿瘤最大径及最大径变化率的相关性;比较有效组及无效组各个时间点ADC值组内及组间差异。用Bland-Altman分析法分析操作的可重复性。结果治疗1周后ADC值较治疗前显著增加(t=-6.329,P<0.05),而治疗1周后肿瘤最大径与治疗前差异无统计学意义(P>0.05)。与治疗前相比,治疗4周后ADC值明显升高(t=-4.878,P<0.05),肿瘤最大径与治疗前差异有统计学意义(t=7.054,P<0.05)。靶向治疗前肿瘤ADC值与治疗4周后的最大径变化率呈负相关(r^2=-0.474,P<0.05)。有效组内靶向治疗前与治疗1周后ADC值差异有统计学意义(P<0.05),治疗4周后有效组与无效组间ADC值差异有统计学意义(P<0.05)。Bland-Altman分析显示操作者间可重复性好。结论靶向治疗1周后的ADC值能较肿瘤最大径更敏感地反映肿瘤治疗后的改变,并且治疗前的ADC值在预测靶向治疗4周后的最大径变化趋势方面有一定的价值,具有可重复性。 展开更多

关键词 癌 非小细胞肺 磁共振成像 扩散加权成像 表观扩散系数 体层摄影术 螺旋计算机 蛋白酪氨酸激酶类 蛋白激酶抑制剂 治疗结果

在线阅读 下载PDF 职称材料

酪氨酸激酶抑制剂的比较分子场分析 被引量：3

11

作者 彭涛 裴剑锋 周家驹 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第6期1076-1079,共4页

采用比较分子场分析 (Co MFA)方法研究了一组嘧啶类衍生物酪氨酸激酶抑制剂活性与结构的关系 .所得模型不仅能够很好地预报训练集中的化合物的活性 ,而且还可以准确地预报预报集中的化合物活性 .通过分析分子场等值面图在空间的分布 ,... 采用比较分子场分析 (Co MFA)方法研究了一组嘧啶类衍生物酪氨酸激酶抑制剂活性与结构的关系 .所得模型不仅能够很好地预报训练集中的化合物的活性 ,而且还可以准确地预报预报集中的化合物活性 .通过分析分子场等值面图在空间的分布 ,可以观察到叠加分子周围的立体和静电特征对化合物活性的影响 . 展开更多

关键词 酪氨酸激酶抑制剂 比较分子场分析 嘧啶类衍生物 活性 结构 三维定量构效关系 药物设计

在线阅读 下载PDF 职称材料

VEGFR-2酪氨酸激酶抑制剂的三维定量构效关系研究 被引量：4

12

作者 伍小云 张嘉杰 吴曙光 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期57-61,共5页

运用比较分子力场分析对28个氨基吡唑并吡啶二芳基脲类VEGFR-2酪氨酸激酶抑制剂进行了三维定量构效关系研究。所得CoMFA模型交叉验证系数q2=0.681,回归系数r2=0.958,统计方差比F=64.964,影响药效的立体场和静电场的贡献分别为65.7%和34... 运用比较分子力场分析对28个氨基吡唑并吡啶二芳基脲类VEGFR-2酪氨酸激酶抑制剂进行了三维定量构效关系研究。所得CoMFA模型交叉验证系数q2=0.681,回归系数r2=0.958,统计方差比F=64.964,影响药效的立体场和静电场的贡献分别为65.7%和34.3%。CoMFA模型的三维等值图为化合物的结构改造提供了参考。 展开更多

关键词 三维定量构效关系 比较分子力场分析 氨基吡唑并吡啶二芳基脲类 VEGFR-2酪氨酸激酶抑制剂

在线阅读 下载PDF 职称材料

蛋白酪氨酸激酶抑制剂对血-视网膜屏障损害的影响及其作用机制 被引量：1

13

作者 张世杰 张皙 朱琦 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期610-614,共5页

背景白介素1p（IL-1β）等细胞因子与血一视网膜屏障损害关系密切，细胞因子的信号传导主要由蛋白酪氨酸激酶受体传导通路介导。目的研究蛋白酪氨酸激酶（PTK）抑制剂-Genistein对IL-1β诱导血一视网膜屏障损害的影响，探讨PTK信号转导... 背景白介素1p（IL-1β）等细胞因子与血一视网膜屏障损害关系密切，细胞因子的信号传导主要由蛋白酪氨酸激酶受体传导通路介导。目的研究蛋白酪氨酸激酶（PTK）抑制剂-Genistein对IL-1β诱导血一视网膜屏障损害的影响，探讨PTK信号转导通路在血一视网膜屏障损害中的作用和机制。方法健康sD大鼠24只玻璃体腔内注射2mg／LIL-1β10ng建立血一视网膜屏障损害的动物模型，再随机分为IL-1β模型组和0．2、1、5P,gGenistein干预组。Genistein干预组大鼠于造模后立即用1μl各剂量Genistein行玻璃体腔内注射，IL-1β模型组应用1μ1DMSO以同样的方法注射。分别于注射后3h和47h每组各取2只鼠经颈静脉10S内快速注射Evansblue（45ing／kg）并收集动脉血，检测血一视网膜屏障通透性的变化；分别于玻璃体注射后4h和48h收集视网膜，用苏木精一伊红染色观察视网膜的组织学变化，RT-PCR法观察视网膜中IL．8和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA表达的变化，用免疫组织化学法染色观察视网膜中MCP-1蛋白表达的变化。结果大鼠玻璃体腔注射Genistein后，视网膜与血浆Evansblue比值明显下降，各组间的总体比较差异有统计学意义（F4h=7．510，P=0．010；F48h=5．960，P=0．019）；随着玻璃体腔注射Genistein的剂量增加，Genistein各剂量组的视网膜与血浆Evansblue比值逐渐下降，与IL-1β比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。视网膜苏木精一伊红染色结果表明，IL-1β在玻璃体腔注射后4h视网膜血管扩张并有炎性细胞浸润，注射48h后上述症状减轻，而Genistein干预组视网膜血管反应轻，无明显炎性细胞浸润。RT-PCR法结果显示，各剂量Genistein组玻璃体腔注射后视网膜中IL-8和MCP-1mRNA的表达量均明显减少，与IL-1β组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。免疫组织化学染色提示Genistein大鼠神经视网膜中MCP-1蛋白表达与IL-1β组比较明显减弱。结论PTK抑制剂Genistein通过抑制IL-1β诱导的视网膜趋化因子的分泌及减少白细胞在视网膜中的浸润，进而减轻IL-1β诱导的血-视网膜屏障损害。Genistein的作用强度呈剂量依赖性。 展开更多

关键词 血-视网膜屏障 蛋白酪氨酸激酶抑制剂 趋化因子 白介素-1Β

在线阅读 下载PDF 职称材料

酪氨酸激酶抑制剂STI571治疗慢性粒细胞白血病的研究 被引量：1

14

作者 王玮 孙秉中 +1 位作者 药立波 刘新平 《实用医学杂志》 CAS 2005年第19期2108-2111,共4页

目的:研究特异性酪氨酸激酶抑制剂STI571对慢性粒细胞白血病(简称慢粒)细胞增殖、凋亡、周期调控及bcr-abl融合基因表达的影响,为慢粒的基因治疗提供理论依据。方法:细胞培养慢粒急变细胞系K562细胞株,通过MTT检测STI571作用下细胞存活... 目的:研究特异性酪氨酸激酶抑制剂STI571对慢性粒细胞白血病(简称慢粒)细胞增殖、凋亡、周期调控及bcr-abl融合基因表达的影响,为慢粒的基因治疗提供理论依据。方法:细胞培养慢粒急变细胞系K562细胞株,通过MTT检测STI571作用下细胞存活率,流式细胞仪检测周期变化,电镜及DNA电泳检测细胞凋亡,半定量RT-PCR检测STI571对bcr-abl融合基因表达的影响。结果:STI571作用后K562细胞中G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少。流式细胞图中的二倍体峰前可见一明显亚二倍体峰———凋亡峰(apoptosispeak),提示STI571能明显诱导K562细胞凋亡。电镜发现STI571作用于K562细胞12～72h后,诱导出各期凋亡细胞及凋亡小体。半定量PCR灰度扫描结果显示bcr-abl基因的mRNA表达下降,电泳检测扩增产物,荧光亮度减弱。结论:STI571能明显抑制白血病细胞增殖,细胞阻滞于G0/G1期,且具有明显的诱导凋亡作用,反馈抑制bcr-abl融合基因的表达。 展开更多

关键词 蛋白质酪氨酸激酶 白血病 髓样 慢性 细胞周期 凋亡 STI571 BCR-ABL融合基因 慢性粒细胞白血病 酪氨酸激酶抑制剂 基因治疗 K562细胞凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于类器官构建泛TKI提高ET+CDK4/6抑制剂治疗HR^(+)/HER2-low乳腺癌疗效的筛选工具

15

作者 吴迎朝 陈柳汕 +4 位作者 梁裕琪 陈洁婷 黄俊峰 左谦 陈前军 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第18期2786-2795,共10页

目的探讨HR^(+)/HER2-low乳腺癌ET+CDK4/6抑制剂治疗效果不佳的机制,并构建乳腺癌类器官模型工具以筛选泛TKI敏感的HR^(+)/HER2-low乳腺癌患者。方法转录组学分析HR^(+)/HER2-0与HR^(+)/HER2-low乳腺癌样本差异表达基因并进行富集分析... 目的探讨HR^(+)/HER2-low乳腺癌ET+CDK4/6抑制剂治疗效果不佳的机制,并构建乳腺癌类器官模型工具以筛选泛TKI敏感的HR^(+)/HER2-low乳腺癌患者。方法转录组学分析HR^(+)/HER2-0与HR^(+)/HER2-low乳腺癌样本差异表达基因并进行富集分析。使用临床来源的乳腺癌组织构建肿瘤类器官模型,并通过Calcein-AM/PI细胞活死双染和EdU细胞增殖检测分析不同样本对治疗药物的敏感性。结果转录组学富集分析结果显示,HR^(+)/HER2-low乳腺癌的EGFR存在显著激活并具有酪氨酸激酶抑制剂耐药的特性。成功构建了乳腺癌类器官,通过药敏试验结果显示,部分HR^(+)/HER2-low乳腺癌ET+CDK4/6抑制剂治疗效果较差,TKI可以恢复HR^(+)/HER2-low乳腺癌ET+CDK4/6抑制剂治疗的敏感性(P<0.05)。结论TKI可以逆转HR^(+)/HER2-low乳腺癌对ET+CDK4/6抑制剂治疗的敏感性下降,乳腺癌类器官有望成为临床HR^(+)/HER2-low乳腺癌药敏试验筛选工具。 展开更多

关键词 乳腺癌 HR^(+)/HER2-low ET+CDK4/6抑制剂 类器官 酪氨酸激酶抑制剂

在线阅读 下载PDF 职称材料

BTK抑制剂BGB-3111联合硼替佐米对人多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响及其机制

16

作者 李洪杰 兰茂卓 +4 位作者 王潇 冯冉冉 陶燕燕 刘佳庆 孙海柏 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期599-609,共11页

目的:探讨泽布替尼(BGB-3111)联合硼替佐米(Btz)对人多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡的影响,并阐明其可能的机制。方法:体外培养人MM U266、PS-R、RPMI8226、KMS28-PE、KMS28-BM和H929细胞,Western blotting法检测不同细胞中布鲁顿酪氨酸激酶(... 目的:探讨泽布替尼(BGB-3111)联合硼替佐米(Btz)对人多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡的影响,并阐明其可能的机制。方法:体外培养人MM U266、PS-R、RPMI8226、KMS28-PE、KMS28-BM和H929细胞,Western blotting法检测不同细胞中布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)蛋白表达水平。采用细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测0、10、20、30、40和50μmol·L^(-1)BGB-3111处理的RPMI8226、U266及KMS28-BM细胞存活率。取对数生长期RPMI8226、U266和KMS28-BM细胞,分为对照组、 BGB-3111组、 Btz组和BGB-3111+Btz组,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中髓细胞白血病因子1 (MCL-1)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相互作用细胞死亡介质蛋白(Bim)、磷酸化Bim (p-Bim)、P65、磷酸化P65 (p-P65)、肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF) 2和肿瘤坏死因子α (TNF-α)诱导蛋白3 (A20)蛋白表达水平。U266细胞分为A20过表达组(A20-OE组)和空载对照组(EV组),2组细胞各分为对照组、BGB-311组、BTZ组和BGB-311+BTZ组,转染相应质粒,采用Western blotting法检测各组细胞转染效率,流式细胞术检测过表达A20后各组细胞凋亡率。结果:Western blotting法检测,与KMS28-BM细胞比较,U266、RPMI8226和H929细胞中BTK蛋白表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。CCK-8法检测,与0μmol·L^(-1)BGB-3111组比较,10、20、30、40和50μmol·L^(-1)BGB-3111组RPMI8226细胞及U266细胞存活率均明显降低(P<0.05或P<0.01),20、30、40和50μmol·L^(-1)BGB-3111组KMS28-BM细胞存活率均明显降低(P<0.01)。与RPMI8226和U266细胞比较,20、30和40μmol·L^(-1)BGB-3111组KMS28-BM细胞存活率均明显升高(P<0.05),选取10μmol·L^(-1)BGB-3111用于后续实验。流式细胞术检测,与对照组比较,BGB-3111组、Btz组和BGB-3111+Btz组RPMI8226及U266细胞凋亡率均明显升高(P<0.05或P<0.01);与BGB-3111组和Btz组比较,BGB-3111+Btz组RPMI8226及U266细胞凋亡率均明显升高(P<0.01);与对照组比较,Btz组和BGB-3111+Btz组KMS28-BM细胞凋亡率均明显升高(P<0.01);与BGB-3111组比较,BGB-3111+Btz组KMS28-BM细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与EV组细胞比较,Btz组和BGB-3111+Btz组中A20-OE细胞凋亡率均明显升高(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组比较,BGB-3111组、 Btz组和BGB-3111+Btz组RPMI8226细胞及U266细胞中Bim蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),Btz组和BGB-3111+Btz组RPMI8226细胞及U266细胞中MCL-1、 p-Bim和Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与BGB-3111组和Btz组比较,BGB-3111+Btz组RPMI8226细胞和U266细胞中Bim蛋白表达水平均明显升高(P<0.05), MCL-1、p-Bim和Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与对照组比较,Btz组和BGB-3111+Btz组RPMI8226及U266细胞中p-P65蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),TRAF2和A20蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与BGB-3111组和Btz组比较,BGB-3111+Btz组RPMI8226和U266细胞中p-P65蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),TRAF2和A20蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与EV组比较,A20-OE组细胞中A20蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:BGB-3111通过抑制BTK活性诱导MM细胞发生凋亡,并增强Btz的促凋亡作用,过表达A20增加MM细胞对联合用药的敏感性,其抗肿瘤作用可能与核因子κB (NF-κB)信号通路抑制有关。 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂 硼替佐米 肿瘤坏死因子α诱导蛋白3 核因子ΚB

在线阅读 下载PDF 职称材料

Bruton酪氨酸激酶泛素化调节的研究 被引量：1

17

作者 房宜嘉 胡媛媛 +5 位作者 凌兰兰 陈月 史玉叶 张莉 王春玲 于亮 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1559-1565,共7页

目的:探讨Bruton酪氨酸激酶(Bruton's Tyrosine Kinase,Btk)的代谢调节途径和可能的分子机制。方法:用蛋白酶体抑制剂和/或佛波酯(PMA)处理内源性表达Btk的B细胞系A20、Ramos细胞及转染了外源性Btk的293T、COS-7细胞,应用RT-PCR法... 目的:探讨Bruton酪氨酸激酶(Bruton's Tyrosine Kinase,Btk)的代谢调节途径和可能的分子机制。方法:用蛋白酶体抑制剂和/或佛波酯(PMA)处理内源性表达Btk的B细胞系A20、Ramos细胞及转染了外源性Btk的293T、COS-7细胞,应用RT-PCR法检测上述细胞Btk mRNA表达水平,Western blot法检测Btk蛋白表达水平;通过抗Ig M抗体交联BCR刺激A20细胞,检测细胞Btk泛素化水平;用Btk、泛素和Cbl共转染COS-7细胞,检测其泛素化Btk水平;用Btk和编码野生型或突变型泛素(K29R、K48R、K63R)即单泛素的质粒共转染293T细胞,经蛋白酶体抑制剂处理后用抗泛素抗体和抗Btk抗体检测泛素化Btk水平;稳定转染并表达Btk-GFP的293T细胞经氯喹处理后,应用Western blot检测其Btk蛋白表达水平。结果:蛋白酶体特异性抑制剂和/或佛波酯可减少Btk转录,从而引起Btk蛋白表达下降。Btk通过泛素化进行翻译后修饰,泛素化修饰程度与Btk的表达及活化水平有关。Cbl为Btk的E3泛素连接酶,它可导致Btk泛素化。Btk受多聚和/或单泛素化调节,Btk可在溶酶体内发生泛素化和降解,溶酶体抑制剂氯喹可上调Btk的表达。结论:Btk蛋白的表达水平受泛素化途径调节,该调节与Btk的表达水平有关。 展开更多

关键词 Bruton酪氨酸激酶 泛素化 蛋白酶体抑制剂 B细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

新型双芳基脲类Bcr-Abl激酶抑制剂的设计与合成

18

作者 卢遥 赵砚瑾 +5 位作者 黄洪林 江发龙 姚郑林 刘兰祥 王惠嘉 李庶心 《科学技术与工程》 北大核心 2015年第13期129-132,148,共5页

设计一系列新型双芳基脲类化合物作为潜在的Bcr-Abl激酶抑制剂。以2-吡啶甲酸,5-硝基吲唑,6-硝基喹啉等为原料合成了6个双芳基脲类化合物,结构经过1H-NMR鉴定。合成的6个目标化合物,均未见文献报道。

关键词 肿瘤 蛋白酪氨酸激酶 Bcr-Abl激酶抑制剂 双芳基脲类化合物 合成

在线阅读 下载PDF 职称材料

组蛋白去乙酰基酶抑制剂NL101对大鼠神经元的作用

19

作者 王晓蓉 张霞燕 +5 位作者 徐栋敏 余舒莹 方三华 卢韵碧 张纬萍 魏尔清 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期265-272,共8页

目的：观察组蛋白去乙酰基酶新抑制剂NL101对同型半胱氨酸（HCA）诱导大鼠神经元毒性损伤的保护作用,以及对正常神经元的损伤作用.方法：使用HCA（5 mmol/L）诱导大鼠皮层混合细胞及原代神经元的损伤,观察不同浓度NL101对损伤的影响,检... 目的：观察组蛋白去乙酰基酶新抑制剂NL101对同型半胱氨酸（HCA）诱导大鼠神经元毒性损伤的保护作用,以及对正常神经元的损伤作用.方法：使用HCA（5 mmol/L）诱导大鼠皮层混合细胞及原代神经元的损伤,观察不同浓度NL101对损伤的影响,检测神经元及胶质细胞的活性、数量、形态以及坏死的变化,并观察NL101对正常神经元的作用;以同类药SAHA（suberoylanilide hydroxamic acid）作为对照.结果：0.001 ～ 10 μmol/L的NL101对HCA诱导的皮层混合细胞数量减少没有明显影响;但1、10 μmol/L的NL101可明显减少细胞坏死（P＜0.05）;1μmol/L的NL101可增加神经元数量.1、10μmol/L的NL101可明显降低原代神经元活性（均P ＜0.05）;但0.01 ～ 10 μmol/L的NL101可显著减轻HCA诱导的神经元活性降低（均P＜0.05）;1、10 μmol/L的NL101可减少HCA引起的神经元坏死（均P ＜0.05）.NL101的作用与SAHA大致相当.结论：NL101对HCA诱导的神经元损伤有保护作用,高浓度NL101对神经元有明显的毒性作用,与经典的SAHA作用相似. 展开更多

关键词 神经元 药物作用 高半胱氨酸 药理学 组蛋白脱乙酰基酶类 拮抗剂和抑制剂 细胞 培养的

在线阅读 下载PDF 职称材料

新型BCR-ABL抑制剂的设计合成与构效关系 被引量：1

20

作者 王永健 郭明 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期357-366,共10页

通过对现有的BCR-ABL变构抑制剂阿西米尼(asciminib)进行结构优化研究,得到N-苯基吲哚啉-5-甲酰胺分子骨架Ⅰ,并以该分子骨架为基础,利用分子对接辅助设计合成化合物1~12,使用ESI-MS和NMR对其进行结构表征,后续采用CCK-8法测定目标化合... 通过对现有的BCR-ABL变构抑制剂阿西米尼(asciminib)进行结构优化研究,得到N-苯基吲哚啉-5-甲酰胺分子骨架Ⅰ,并以该分子骨架为基础,利用分子对接辅助设计合成化合物1~12,使用ESI-MS和NMR对其进行结构表征,后续采用CCK-8法测定目标化合物在体外抗BCR-ABL1依赖型Luc-Ba/F3细胞增殖能力。最终筛选出高活性先导化合物1,针对该化合物在后续成药性评价中暴露出的清除率高、半衰期短等问题进行了其成药性质优化,引入亲水性基团,后续设计并合成化合物13~22,其中化合物17具有较好的细胞抑制活性,清除率较低,半衰期较长,有望作为临床候选化合物展开进一步的生物活性和成药性的评价。 展开更多

关键词 慢性髓细胞性白血病 BCR-ABL融合蛋白 酪氨酸激酶抑制剂

在线阅读 下载PDF 职称材料