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一种基于HIV-1TAT蛋白质转导结构域细胞内转导系统的成功改建被引量：8: 1; 作者郭爱华刘志锋 +3 位作者孙学刚李海玉邓鹏姜勇《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期545-548,共4页; 目的探索本室构建的pET14b-His-TAT-Flag重组载体表达的融合蛋白在细胞中转导效率低的原因,建立高效的细胞内转导系统。方法通过PCR方法去除原有载体中的Flag序列,在改建正确的pET14b-His-TAT重组载体基础上插入EGFP编码序列,将经酶切、... 展开更多; 关键词 HIV-1反式激活因子蛋白质转导结构域融合蛋白细胞内转导; 在线阅读下载PDF 职称材料

蛋白质转导结构域的跨血脑屏障药物递送被引量：6: 2; 作者周建平孙曼霁《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1401-1405,共5页; 药物递送入脑的主要障碍是血脑屏障,为克服血脑屏障,目前主要采取神经外科手术、增加分子脂溶性、通过内源性血脑屏障转运载体的递送策略。PTD介导跨血脑屏障药物递送是近来出现的新技术,可以方便、高效地使各种分子通过外周血、腹腔等... 展开更多; 关键词蛋白质转导结构域血脑屏障药物递送; 在线阅读下载PDF 职称材料

分泌型PTD4-Apoptin融合蛋白诱导HepG2细胞凋亡被引量：1: 3; 作者陈庆杨辰苏 +3 位作者陈虎陈道达龙跃平郑海《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期137-141,共5页; 目的研究分泌型的含蛋白质转导结构域的凋亡素(PTD4-Apoptin)融合基因经人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)表达和分泌后,对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响,探讨其用于肝癌治疗的可能性。方法构建PTD4-Apop-tin融合基因的pSecTag2分泌型真核表达载... 展开更多; 关键词蛋白质转导结构域凋亡素肝癌; 在线阅读下载PDF 职称材料

腺病毒介导的NT4p53(N15)Ant异源融合基因对肝癌细胞的杀伤作用被引量：2: 4; 作者李跃萍邱曙东 +2 位作者宋丽萍王全颖杨广笑《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期936-940,共5页; 目的构建包括神经营养因子4(NT4)信号肽,p53氨基端短活性肽(12～26位氨基酸)及蛋白质转导结构域-黑腹果蝇触足肽(Ant)序列在内的异源融合基因,并以腺病毒作为基因转移载体观察NT4p53(N15)Ant基因在体外对肝癌细胞系HepG2的杀伤效应。方... 展开更多; 关键词神经营养因子4信号肽 p53 蛋白质转导结构域腺病毒载体 HEPG2细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

以寡聚精氨酸为PTD的嵌合基因的表达及其对HER2阳性SGC-7901胃癌细胞的杀伤作用被引量：1: 5; 作者赵智凝王涛 +5 位作者任君琳张瑞赵晶温伟红贾林涛杨安钢《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期735-737,共3页; 目的：构建以寡聚精氨酸（R9）为蛋白质转导结构域的嵌合抗体／caspase-3的真核表达载体，并检测瞬时转染该载体对HER2阳性SGC-7901肿瘤细胞及HER2阴性HeLa肿瘤细胞生长的影响。方法：用PCR法获得融合了R9的活性caspase-3基因片段，并... 展开更多; 关键词寡聚精氨酸蛋白质转导结构域嵌合基因靶向治疗; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一种基于HIV-1TAT蛋白质转导结构域细胞内转导系统的成功改建被引量：8: 1; 作者郭爱华刘志锋孙学刚李海玉邓鹏姜勇; 机构南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期545-548,共4页; 基金国家高技术研究发展(863)计划课题(2001AA234061) 广东省科技计划项目(A1090202) +1 种基金广州市科技计划项目(2001-Z-035-01-1)~~; 文摘目的探索本室构建的pET14b-His-TAT-Flag重组载体表达的融合蛋白在细胞中转导效率低的原因,建立高效的细胞内转导系统。方法通过PCR方法去除原有载体中的Flag序列,在改建正确的pET14b-His-TAT重组载体基础上插入EGFP编码序列,将经酶切、DNA测序鉴定正确的pET14b-His-TAT-EGFP质粒转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定正确,再经蛋白透析、过滤处理。将His-TAT-EGFP融合蛋白加入ECV304细胞中,用荧光显微镜观察。结果重组质粒pET14b-His-TAT融合表达载体和pET14b-His-TAT-EGFP重组载体经酶切、DNA测序鉴定证实构建成功。表达纯化出了高纯度His-TAT-EGFP融合蛋白并具有较高细胞内转导活性。结论成功改建pET14b-His-TAT-Flag重组载体,正确构建pET14b-His-TAT-EGFP载体,His-TAT-EGFP融合蛋白高效表达,并具有明确的细胞内转导活性。; 关键词 HIV-1反式激活因子蛋白质转导结构域融合蛋白细胞内转导; Keywords human immunodeficiency virus type-1 trans-activator protein transduction domain recombinant protein intracellular transduction; 分类号 R341 [医药卫生—基础医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名蛋白质转导结构域的跨血脑屏障药物递送被引量：6: 2; 作者周建平孙曼霁; 机构军事医学科学院毒物药物研究所; 出处《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1401-1405,共5页; 基金军队十一.五科技攻关资助项目(No06G119); 文摘药物递送入脑的主要障碍是血脑屏障,为克服血脑屏障,目前主要采取神经外科手术、增加分子脂溶性、通过内源性血脑屏障转运载体的递送策略。PTD介导跨血脑屏障药物递送是近来出现的新技术,可以方便、高效地使各种分子通过外周血、腹腔等途径,跨越血脑屏障进入脊髓、脑组织细胞。PTD递送快捷、简单、安全,为中枢神经系统疾病的治疗提供了新的研究思路。; 关键词蛋白质转导结构域血脑屏障药物递送; Keywords protein transduction domain blood brain barrier drug delivery; 分类号 R322.81 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学] R341 [医药卫生—基础医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名分泌型PTD4-Apoptin融合蛋白诱导HepG2细胞凋亡被引量：1: 3; 作者陈庆杨辰苏陈虎陈道达龙跃平郑海; 机构华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科华中科技大学同济医学院第一临床学院; 出处《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期137-141,共5页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.31171027 No.31000471) +1 种基金湖北省自然科学基金面上项目(No.2007ABA065); 文摘目的研究分泌型的含蛋白质转导结构域的凋亡素(PTD4-Apoptin)融合基因经人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)表达和分泌后,对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响,探讨其用于肝癌治疗的可能性。方法构建PTD4-Apop-tin融合基因的pSecTag2分泌型真核表达载体,并采用脂质体介导将其转染入HUVEC细胞,Western blot检测PTD4-Apoptin融合蛋白的表达及分泌,转染48h后收集培养上清作为条件培养液,用于HepG2、L02细胞培养,共培养24h后,采用Western blot检测细胞内和核内Apoptin的含量,流式细胞术检测细胞凋亡。结果瞬时转染pSecTag2-PTD4-Apoptin的HUVEC细胞可表达及分泌PTD4-Apoptin融合蛋白,其培养上清中的PTD4-Apoptin融合蛋白可有效进入HepG2和L02细胞,并可在HepG2细胞核内聚积,显著诱导HepG2细胞凋亡达47.4%(P<0.001),而对L02细胞无此效应。结论 HUVEC细胞表达分泌的PTD4-Apoptin融合蛋白可显著诱导邻近HepG2细胞凋亡,而对L02正常肝细胞无损伤。; 关键词蛋白质转导结构域凋亡素肝癌; Keywords protein transduction domains（PTDs） Apoptin hepatocellular carcinoma; 分类号 R735.7 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名腺病毒介导的NT4p53(N15)Ant异源融合基因对肝癌细胞的杀伤作用被引量：2: 4; 作者李跃萍邱曙东宋丽萍王全颖杨广笑; 机构西安交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学系生殖医学中心西安交通大学第一附属医院放疗科西安华广生物工程公司; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期936-940,共5页; 基金国家自然科学基金(30471942) 陕西省攻关项目(2004k11-G3)~~; 文摘目的构建包括神经营养因子4(NT4)信号肽,p53氨基端短活性肽(12～26位氨基酸)及蛋白质转导结构域-黑腹果蝇触足肽(Ant)序列在内的异源融合基因,并以腺病毒作为基因转移载体观察NT4p53(N15)Ant基因在体外对肝癌细胞系HepG2的杀伤效应。方法应用互为模板的引物PCR技术及T载体克隆法获得p53(N15)Ant基因克隆,经酶切后连入pBV220/NT4质粒,再将融合基因NT4p53(N15)Ant亚克隆至腺病毒的穿梭质粒内,与辅助质粒pJM17共转染HEK293细胞,通过同源重组获得重组腺病毒,经PCR鉴定后,NT4p53(N15)Ant重组腺病毒感染HepG2细胞,用MTT比色法和PI染色流式细胞计数仪分析Ad.NT4p53(N15)Ant对肿瘤细胞和正常细胞的杀伤效应及凋亡率。结果克隆出NT4p53(N15)Ant基因,得到高滴度的重组腺病毒,提取病毒DNA经PCR证实含目的基因。MTT测定结果显示,与平行对照病毒Ad.GFP相比,Ad.NT4p53(N15)Ant对HepG2细胞有强烈的杀伤效应,且以病毒感染后48h作用最为明显,对肿瘤细胞抑制率达到63.3%,而对正常细胞NIH3T3的影响很小。Ad.NT4p53(N15)Ant感染HepG2细胞30h后的流式细胞仪分析结果显示:Ad.NT4p53(N15)Ant可使HepG2细胞发生凋亡,凋亡率为18.16%。结论通过分子克隆体外重组技术我们首次成功制备了NT4p53(N15)Ant复制缺陷型重组腺病毒;初步的研究发现Ad.NT4p53(N15)Ant对HepG2细胞有强烈的杀伤效应,这种效应部分是通过诱导HepG2细胞的凋亡而实现的。; 关键词神经营养因子4信号肽 p53 蛋白质转导结构域腺病毒载体 HEPG2细胞; Keywords neurotrophin 4 signal peptide p53 protein transduction domains adenovirus vector HepG2 cells; 分类号 R735.7 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名以寡聚精氨酸为PTD的嵌合基因的表达及其对HER2阳性SGC-7901胃癌细胞的杀伤作用被引量：1: 5; 作者赵智凝王涛任君琳张瑞赵晶温伟红贾林涛杨安钢; 机构第四军医大学免疫学教研室第四军医大学生物化学与分子生物学教研室解放军第; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期735-737,共3页; 基金国家重点基础研究发展规划(973)资助项目(2010CB529905) 国家自然科学基金资助项目(30701006); 文摘目的：构建以寡聚精氨酸（R9）为蛋白质转导结构域的嵌合抗体／caspase-3的真核表达载体，并检测瞬时转染该载体对HER2阳性SGC-7901肿瘤细胞及HER2阴性HeLa肿瘤细胞生长的影响。方法：用PCR法获得融合了R9的活性caspase-3基因片段，并将其克隆人含有HER2单链抗体e23sFv基因的真核表达载体，以脂质体法转染SGC-7901细胞及HeLa细胞，用间接免疫荧光、细胞计数等方法，检测其在两种细胞中的表达及其对两种细胞生长的影响。结果：成功构建了以R9为蛋白质转导结构域的嵌合抗体／caspase-3基因真核表达载体pCMV—e23sFv-R9-casp3，瞬时转染该质粒发现SGC-7901细胞和HeLa细胞均以分泌形式表达e23sFv—R9-casp3蛋白，但SGC-7901细胞生长受到明显抑制，细胞形态发生改变，出现核浓缩等凋亡特征；而HeLa细胞生长未受抑制，细胞形态无明显变化。结论：以分泌形式表达的嵌合蛋白，其HER2抗体部分能够介导靶向识别，R9可以辅助效应分子活化、转位至细胞液，活性caspase-3能高效杀伤细胞。; 关键词寡聚精氨酸蛋白质转导结构域嵌合基因靶向治疗; Keywords poly-arginine PTD chimeric gene targeted therapy; 分类号 Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	一种基于HIV-1TAT蛋白质转导结构域细胞内转导系统的成功改建	郭爱华刘志锋孙学刚李海玉邓鹏姜勇	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2006	8	在线阅读下载PDF 职称材料
2	蛋白质转导结构域的跨血脑屏障药物递送	周建平孙曼霁	《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心	2007	6	在线阅读下载PDF 职称材料
3	分泌型PTD4-Apoptin融合蛋白诱导HepG2细胞凋亡	陈庆杨辰苏陈虎陈道达龙跃平郑海	《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2012	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	腺病毒介导的NT4p53(N15)Ant异源融合基因对肝癌细胞的杀伤作用	李跃萍邱曙东宋丽萍王全颖杨广笑	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2007	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	以寡聚精氨酸为PTD的嵌合基因的表达及其对HER2阳性SGC-7901胃癌细胞的杀伤作用	赵智凝王涛任君琳张瑞赵晶温伟红贾林涛杨安钢	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2010	1	在线阅读下载PDF 职称材料