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酵母双杂交系统筛选与狂犬病病毒M蛋白相互作用的宿主蛋白 被引量:1
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作者 张欢欢 王甲慧 +2 位作者 段铭 张茂林 关振宏 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第8期19-23,共5页
为筛选人脑cDNA文库中与狂犬病病毒基质蛋白(M蛋白)具有相互作用的蛋白基因,并对阳性克隆进行初步的分析和鉴定。首先构建了含有M基因的诱饵质粒pGBKT7-CVS11-M,并对其进行自激活和毒性检测,然后采用酵母双杂交技术初步筛选出与M蛋白具... 为筛选人脑cDNA文库中与狂犬病病毒基质蛋白(M蛋白)具有相互作用的蛋白基因,并对阳性克隆进行初步的分析和鉴定。首先构建了含有M基因的诱饵质粒pGBKT7-CVS11-M,并对其进行自激活和毒性检测,然后采用酵母双杂交技术初步筛选出与M蛋白具有相互作用的12个阳性克隆,对阳性克隆进行PCR鉴定及测序分析,并通过酵母回复性试验最终获得3个无重复性克隆,编码的蛋白质分别为TAB2、P4HA2和RCN1。为研究狂犬病病毒M蛋白在致病机制中的作用提供了参考。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 M蛋白 酵母双杂交 蛋白质的相互作用
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邻近标记在蛋白质组学中的发展及应用 被引量:3
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作者 苏田 韩笑 刘华东 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期36-41,共6页
人体内各种复杂的生命活动离不开蛋白质之间的相互作用。这种相互作用具有瞬时性和结合力弱等特点,并受到多种动态调节,特别是蛋白质翻译后修饰(post-translation modifications,PTM)。传统的亲和质谱检测方法存在蛋白纯化的局限性,在... 人体内各种复杂的生命活动离不开蛋白质之间的相互作用。这种相互作用具有瞬时性和结合力弱等特点,并受到多种动态调节,特别是蛋白质翻译后修饰(post-translation modifications,PTM)。传统的亲和质谱检测方法存在蛋白纯化的局限性,在高效检测到动态变化方面存在不足。邻近标记是一种能够给与靶蛋白质瞬时靠近,或者互作(邻近)的蛋白质加上生物素的技术,它与质谱检测技术的联合使用能检测细胞过程中弱的、瞬时的蛋白质相互作用,有效解决上述问题。本文综述了基于生物素的邻近标记方法的发展现状,从依赖于融合序列的生物素标记开始,依次介绍有关生物素连接酶、过氧化物酶及其进化后的2代标记方法等经典生物素标记的方法和原理,比较各个方法间的差异和优缺点;也列举了一些近年来新出现的标记方法,如将生物素连接酶进行拆分、鉴定蛋白质在不同复合物中功能的方法、抗体靶向的标记方法,以及其他来源的生物素连接酶突变体,例如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的C端氨基酸突变的生物素连接酶,能够应用在苍蝇和蠕虫中的生物素连接酶突变体。本文对这些方法进行归纳总结,旨在为初步接触该领域的科研工作者提供参考,同时也希望能够提供一些新的思路,推动蛋白质相互作用组学的发展。 展开更多
关键词 蛋白质之间的相互作用 邻近标记 蛋白质翻译后修饰 生物素标记
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蛋白互作研究方法在水稻中的应用及主要互作数据库汇总
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作者 陈丽娟 刘西西 +4 位作者 罗金金 陈明花 匡瑜 田志宏 张健 《寒旱农业科学》 2023年第1期82-87,共6页
实验设计时选择合适的方法,有利提高科研效率。综述了多种研究蛋白质相互作用的方法,分析了各类方法的优缺点以及在水稻中的研究应用,归纳整理了现有的大型蛋白互作数据库。
关键词 水稻 蛋白质的相互作用 互作方法 互作数据库
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时间分辨荧光光谱在反应机理研究中的应用
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作者 祖莉莉 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2020年第S01期197-197,共1页
分子的荧光强度与激发态的分子数目成正比,荧光强度的衰减速率反映了分子在激发态的停留时间。当激发态的分子发生了化学反应或分子间的能量转移等过程时,分子荧光强度的衰减速率将发生变化。因此,研究荧光强度随时间的变化能够获得反... 分子的荧光强度与激发态的分子数目成正比,荧光强度的衰减速率反映了分子在激发态的停留时间。当激发态的分子发生了化学反应或分子间的能量转移等过程时,分子荧光强度的衰减速率将发生变化。因此,研究荧光强度随时间的变化能够获得反应物分子在激发态发生化学反应的速率、反应物分子与猝灭剂分子的相互作用、溶剂对反应的影响等反应动力学信息。自时间相关单光子技术出现以来,时间分辨荧光光谱被广泛应用于溶液中生物化学反应的机理研究。将以凝血酶与其抑制剂达比加群的作用机理研究为例,讨论时间分辨荧光光谱在研究蛋白质与药物分子、多肽与DNA等生物化学反应动力学过程中的应用。 展开更多
关键词 时间分辨荧光光谱 反应动力学 蛋白质与药物分子的相互作用
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