适于双向电泳分析的苹果叶片蛋白质提取方法 被引量：14

1

作者 曾广娟 李春敏 +2 位作者 张新忠 滕云龙 董文轩 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期484-488,共5页

为了探索适用于双向电泳（2-DE）分析的苹果叶片蛋白质提取方法,比较了三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法、二硫苏糖醇（DTT）/丙酮法、Tris-HCl提取法和改良的Tris-HCl提取法等4种蛋白质提取方法。以7cm、pH3-10的线性固相pH梯度（immobilize... 为了探索适用于双向电泳（2-DE）分析的苹果叶片蛋白质提取方法,比较了三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法、二硫苏糖醇（DTT）/丙酮法、Tris-HCl提取法和改良的Tris-HCl提取法等4种蛋白质提取方法。以7cm、pH3-10的线性固相pH梯度（immobilized pH gradient,IPG）胶条作为第一向电泳,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）（12.5%的分离胶）作为第二向电泳,对提取物进行2-DE分离,采用银染显色。结果表明,上述4种方法在2-DE图谱上分别得到140,215,181和616个蛋白质点。其中以改良的Tris-HCl提取法得到的蛋白质点数最多,且背景清晰、图谱上没有明显的横纵条纹。为了进一步验证改良的Tris-HCl提取法的有效性,用18cm、pH3-10的线性IPG胶条和12.5%的分离胶对提取的苹果叶片蛋白质进行2-DE分离,考马斯亮蓝R-250染色,共检测到455个蛋白质点,其相对分子质量主要分布在14000-66000范围内,图谱背景清晰,再次证明应用该方法制备的样品适用于双向电泳分析,可用于苹果叶片的蛋白质组学分析。 展开更多

关键词 双向电泳 蛋白质提取方法 苹果叶片 蛋白质组学分析

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玉米叶片2种总蛋白质提取方法的比较 被引量：1

2

作者 齐建双 王彦玲 +5 位作者 铁双贵 卢彩霞 岳润清 韩小花 燕树锋 孙若楠 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期162-164,共3页

为比较不同方法提取的玉米叶片蛋白质对双向电泳效果的影响。采用TCA-丙酮沉淀和TRIzol试剂盒2种方法，提取国审玉米品种郑单958叶片全基因组蛋白质，并对提取的蛋白质样品进行双向电泳。结果表明：TCA-丙酮方法提取的蛋白质一向水平聚... 为比较不同方法提取的玉米叶片蛋白质对双向电泳效果的影响。采用TCA-丙酮沉淀和TRIzol试剂盒2种方法，提取国审玉米品种郑单958叶片全基因组蛋白质，并对提取的蛋白质样品进行双向电泳。结果表明：TCA-丙酮方法提取的蛋白质一向水平聚焦电压上升缓慢且达不到程序设置的电压，而TRIzol试剂盒方法实时监测图与程序设置图相吻合；对电泳胶图分析后可知，TRIzol试剂盒法分离出的蛋白点多于900个，低丰度蛋白质得到充分显现，大多数蛋白点分子量为20～80 kDa，pH值为4～7，蛋白点的形状较规则；TCA-丙酮沉淀法分离出的蛋白点仅有350个，表明样品中蛋白质分离种类较少，高丰度蛋白质过度显现，低丰度蛋白质检出率大大降低。 展开更多

关键词 玉米叶片 蛋白质提取方法 双向电泳

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莲种子蛋白质提取方法比较与双向电泳分析 被引量：5

3

作者 曹锐 陈浩 丁毅 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期127-135,共9页

莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)不仅是重要的水生蔬菜作物之一,而且是进行基础研究的好材料。本文采用4种蛋白质提取方法(新型TCA/丙酮法、传统TCA/丙酮法、改良的Tris-HCl法、Tris-饱和酚法)并结合双向电泳技术,对莲子蛋白质提取方法进... 莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)不仅是重要的水生蔬菜作物之一,而且是进行基础研究的好材料。本文采用4种蛋白质提取方法(新型TCA/丙酮法、传统TCA/丙酮法、改良的Tris-HCl法、Tris-饱和酚法)并结合双向电泳技术,对莲子蛋白质提取方法进行筛选与优化。双向电泳实验结果显示,所得蛋白质图谱与莲种子蛋白质组成分布特点一致。通过PDQuest软件分析表明,新型TCA/丙酮法适用于莲子叶和胚芽组织的双向电泳蛋白质提取,而传统TCA/丙酮法则适用于莲胚轴组织双向电泳的蛋白质提取。研究结果为进一步利用质谱进行莲子蛋白质组研究奠定了基础。 展开更多

关键词 莲子 蛋白质提取方法 双向电泳 蛋白质图谱

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不同方法提取蚱蝉若虫蛋白质效果比较 被引量：9

4

作者 金会鑫 谢寿安 +2 位作者 史睿杰 汤耀宗 王翻艳 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期128-130,138,共4页

以蚱蝉(Cryptotympana pustulata)若虫为材料,采用正交试验法,对蚱蝉若虫蛋白质的提取条件进行了研究。结果表明,碱提蛋白法的蛋白质得率最高,其次为盐提蛋白法,Tris-HCl提蛋白法得率最低。碱提蛋白法的主要工艺指标为:碱液质量分数0.5... 以蚱蝉(Cryptotympana pustulata)若虫为材料,采用正交试验法,对蚱蝉若虫蛋白质的提取条件进行了研究。结果表明,碱提蛋白法的蛋白质得率最高,其次为盐提蛋白法,Tris-HCl提蛋白法得率最低。碱提蛋白法的主要工艺指标为:碱液质量分数0.5%、温度60℃、时间60min、固液体积比为1∶5时蛋白质得率有最大值;盐提蛋白法的主要工艺指标为:盐液质量分数1.5%、温度40℃、时间120min、固液体积比为1∶10时蛋白质得率有最大值;Tris-HCl提蛋白法的主要工艺指标为:Tris-HCl液pH值8.1、抽提温度20℃、抽提时间30min、固液体积比1∶10时蛋白质得率有最大值。 展开更多

关键词 蚱蝉若虫 蛋白质提取方法 正交试验

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不同方法提取车前草蛋白质效果比较

5

作者 李蒙 《陕西农业科学》 2019年第2期42-44,共3页

以车前草叶片为材料,采用正交试验方法,对车前草蛋白质的提取条件进行优化研究。结果表明,碱提蛋白法的蛋白质得率高于盐提蛋白法和Tris-HCl提蛋白法。碱提取蛋白质的优化工艺指标为:碱液浓度为1. 5%,浸提温度为60℃,抽提时间为60 min,... 以车前草叶片为材料,采用正交试验方法,对车前草蛋白质的提取条件进行优化研究。结果表明,碱提蛋白法的蛋白质得率高于盐提蛋白法和Tris-HCl提蛋白法。碱提取蛋白质的优化工艺指标为:碱液浓度为1. 5%,浸提温度为60℃,抽提时间为60 min,固液比为1:10。 展开更多

关键词 车前草 蛋白质提取方法 正交试验

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土壤宏蛋白质组学之土壤蛋白质提取技术的发展 被引量：3

6

作者 熊艺 林欣萌 兰平 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期835-843,共9页

随着土壤宏基因组学的日益成熟和发展,作为后基因组时代重要技术平台的土壤宏蛋白质组学越来越受到关注。土壤宏蛋白质组学的研究是解析土壤宏基因功能的重要手段之一,对于碳氮磷的生物地球化学循环以及土壤有机质积累的研究具有重大价... 随着土壤宏基因组学的日益成熟和发展,作为后基因组时代重要技术平台的土壤宏蛋白质组学越来越受到关注。土壤宏蛋白质组学的研究是解析土壤宏基因功能的重要手段之一,对于碳氮磷的生物地球化学循环以及土壤有机质积累的研究具有重大价值,可将蛋白信息与相关的生态系统过程联系起来。但是,土壤蛋白含量少,样品复杂程度高,极大限制了土壤蛋白的分离提取和进一步分析。因此,通过改进和优化土壤蛋白的提取技术,得到高浓度的蛋白是土壤宏蛋白质组学研究的前提条件。本文总结了近几年来土壤蛋白提取方法,并对其适用的土壤性质以及适用的不同种类和功能的蛋白进行了分析。此外,本文也对现有的土壤蛋白提取技术以及土壤蛋白鉴定技术的方法改进进行了探讨。 展开更多

关键词 土壤蛋白质 宏蛋白质组学 蛋白质提取方法

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小麦花药蛋白质组双向电泳技术体系的优化 被引量：42

7

作者 陈蕊红 张改生 +2 位作者 刘卫 叶景秀 牛娜 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期404-409,共6页

以小麦单核期花药为材料,比较了两种不同蛋白质提取方法TCA/丙酮法和酚提取法及不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在蛋白质上样量和SDS-PAGE胶浓度等方面也进行了探索与优化。结果表明,采用TCA/丙酮提取法比用酚提取法提取的... 以小麦单核期花药为材料,比较了两种不同蛋白质提取方法TCA/丙酮法和酚提取法及不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在蛋白质上样量和SDS-PAGE胶浓度等方面也进行了探索与优化。结果表明,采用TCA/丙酮提取法比用酚提取法提取的蛋白质所得的2-DE胶图谱上蛋白质点数增加,图谱背景也比较清晰;样品溶解于含有硫脲和TBP的蛋白质裂解液Ⅱ中,可显著提高蛋白质的溶解性,在2-DE图谱上可分辨出554个蛋白质点,比用蛋白质裂解液Ⅰ提取的蛋白多39个点。以TCA-丙酮法提取小麦花药组织中的蛋白,用蛋白质裂解液Ⅱ[7mol/L尿素、2mol/L硫脲、4%CHAPS、2%TBP、65mmol/L DTT、0.2%载体两性电解质（其中0.1%pH 3-10,0.1%pH4-6）]溶解蛋白,以pH4-7线性17cm的IPG胶条进行双向凝胶电泳,在上样量为800μg,13%SDS-PAGE胶浓度下,蛋白质得到了更好的分离,2-DE图谱上可分辨出631个蛋白点,图谱质量最佳。优化后的双向电泳技术体系,适合于小麦花药全蛋白质的双向电泳分析。 展开更多

关键词 小麦 花药蛋白 蛋白质提取方法 蛋白质裂解液 双向电泳技术

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文冠果枝条韧皮部蛋白质双向电泳体系的建立 被引量：4

8

作者 刘昭军 张胜 +2 位作者 赵忠 张博勇 宗建伟 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期55-61,共7页

以文冠果当年生硬枝韧皮部为材料,通过TCA/丙酮法提取总蛋白,研究了不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在胶条选择、蛋白质上样量和等电聚焦时间等方面进行了优化。结果表明,TCA/丙酮提取法适用于提取文冠果韧皮部组织总蛋白,... 以文冠果当年生硬枝韧皮部为材料,通过TCA/丙酮法提取总蛋白,研究了不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在胶条选择、蛋白质上样量和等电聚焦时间等方面进行了优化。结果表明,TCA/丙酮提取法适用于提取文冠果韧皮部组织总蛋白,得到的图谱背景低,蛋白质点清晰;样品溶解于含有尿素和硫脲的蛋白质裂解液Ⅱ中,可显著地提高蛋白质的溶解性,获得的总蛋白溶液浓度远大于裂解液Ⅰ提取的总蛋白溶液浓度。在适宜的时间范围用超声波破碎仪处理蛋白质粉溶液有助于大幅度提高裂解液中蛋白质的浓度。等电聚焦条件宜根据样品特性选择,80 000Vh能够使得文冠果韧皮部蛋白质双向凝胶碱性端的横条纹大大减少。 展开更多

关键词 文冠果 韧皮部 蛋白质提取方法 蛋白质裂解液 双向电泳技术

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蛋白质技术在甘薯病毒病研究的应用 被引量：2

9

作者 任凤仪 房伯平 高峰 《广东农业科学》 CAS CSCD 2008年第S1期59-62,共4页

甘薯病毒病是甘薯主要病害之一,对甘薯生产造成严重危害,是甘薯生产的一大问题。甘薯病毒种类多并且侵染存在复杂性给甘薯病毒研究以及防治带来困难。应用抗病毒蛋白是植物病毒病防治策略之一。通过对甘薯病毒、植物抗病毒蛋白相关研究... 甘薯病毒病是甘薯主要病害之一,对甘薯生产造成严重危害,是甘薯生产的一大问题。甘薯病毒种类多并且侵染存在复杂性给甘薯病毒研究以及防治带来困难。应用抗病毒蛋白是植物病毒病防治策略之一。通过对甘薯病毒、植物抗病毒蛋白相关研究以及蛋白质提取方法等方面的进展进行了综述,介绍蛋白质技术在甘薯病毒病中的应用。 展开更多

关键词 甘薯病毒 抗病毒蛋白 蛋白质提取方法

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叶用莴苣叶片总蛋白质双向电泳影响因素的研究 被引量：2

10

作者 陈曙红 韩莹琰 +1 位作者 范双喜 李洋 《北京农学院学报》 2012年第2期14-16,共3页

以叶用莴苣叶片为试材,研究17cm固相pH梯度胶条(pH 4～7)体系下双向电泳不同的提取方法、上样体积、定量方法等影响因素,力求确定其理想的双向电泳条件。结果表明,酚-甲醇/醋酸铵沉淀法对蛋白质提取更彻底,效果更好。对于蛋白质定量的试... 以叶用莴苣叶片为试材,研究17cm固相pH梯度胶条(pH 4～7)体系下双向电泳不同的提取方法、上样体积、定量方法等影响因素,力求确定其理想的双向电泳条件。结果表明,酚-甲醇/醋酸铵沉淀法对蛋白质提取更彻底,效果更好。对于蛋白质定量的试验,相比于常规的Bradford方法,利用无干扰蛋白质定量试剂盒具有更好的准确性。考虑叶片总蛋白质中大量Rubisco的存在,应相对增加上样量,采用考马斯亮蓝染色时取800μg到1 100μg蛋白质进行双向电泳比较合理。 展开更多

关键词 叶用莴苣 叶片 蛋白质提取方法 双向电泳技术

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棉花纤维蛋白双向电泳体系的建立 被引量：2

11

作者 王娟 倪志勇 +4 位作者 石庆华 吕萌 李波 白岩 范玲 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期31-35,共5页

【目的】探索一套适合于棉花纤维蛋白的双向电泳技术,为研究棉花纤维发育的蛋白质组学奠定基础。【方法】以陆地棉徐州142为材料,比较了三种不同蛋白质提取方法以及不同裂解液组成对双向电泳的影响,并在蛋白上样量和染色方法等方面进行... 【目的】探索一套适合于棉花纤维蛋白的双向电泳技术,为研究棉花纤维发育的蛋白质组学奠定基础。【方法】以陆地棉徐州142为材料,比较了三种不同蛋白质提取方法以及不同裂解液组成对双向电泳的影响,并在蛋白上样量和染色方法等方面进行了探索与优化。【结果】利用饱和酚-甲醇醋酸铵法提取的棉花纤维蛋白,其蛋白含量较高,且SDS-PAGE电泳条带清晰;样品溶解于含有硫脲和CHAPS的裂解液中,其蛋白溶解度增加;不同的蛋白上样量比较结果表明,第一向等电聚焦固相pH梯度胶条(7 cm)的最适上样量为300μg;同时,经改良后的考马斯亮蓝染-脱色后,2-D图谱的背景清晰,分辨蛋白斑点数增加。【结论】研究建立了一套适用于棉花纤维蛋白总蛋白质组分析的双向电泳方法。 展开更多

关键词 棉花 纤维蛋白 蛋白质提取方法 双向电泳技术

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甜菜双向电泳体系条件的优化 被引量：2

12

作者 张辉 白晨 +7 位作者 王华忠 张惠忠 李晓东 付增娟 赵尚敏 鄂圆圆 张自强 王良 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期112-116,共5页

为了获得甜菜叶片双向电泳中蛋白质最佳提取方法,建立甜菜叶片蛋白质双向电泳最佳的双向电泳体系。以甜菜叶片为材料,通过比较分析,研究甜菜叶片总蛋白提取方法、IPG胶条pH值及其对应上样量等因素对甜菜叶片蛋白质双向电泳结果的影响。... 为了获得甜菜叶片双向电泳中蛋白质最佳提取方法,建立甜菜叶片蛋白质双向电泳最佳的双向电泳体系。以甜菜叶片为材料,通过比较分析,研究甜菜叶片总蛋白提取方法、IPG胶条pH值及其对应上样量等因素对甜菜叶片蛋白质双向电泳结果的影响。结果表明:酚提取法、TCA/丙酮提取法和可溶性蛋白提取法3种蛋白提取方法中TCA/丙酮法提取效果较好,pH值4~7与pH值5~8的双向蛋白电泳比较发现:pH值4~7胶条蛋白点清晰且在图谱上的蛋白点分布均匀,无蛋白点集中现象,更适合甜菜叶片的蛋白质组分析。采用7 cm线性固相IPG胶条进行双向电泳,150μg上样量蛋白点明显增多,双向电泳效果更好,pH值4~7的17 cm胶条300μg上样量胶点更多更清晰,试验结果为甜菜蛋白质组学的研究提供了最佳的试验方法。 展开更多

关键词 甜菜 蛋白质提取方法 双向电泳 体系优化

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棉花叶片双向电泳体系的研究 被引量：7

13

作者 韩吉春 崔海峰 +3 位作者 时鹏涛 祝水金 叶子弘 俞晓平 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2012年第1期27-34,共8页

以棉花叶片为材料,比较分析了不同叶位棉花叶片总蛋白提取方法、线性固相pH梯度(Immobilized pHgradient,IPG)胶条pH值、上样量、水化上样缓冲液中还原剂和两性电解质等对电泳结果的影响。结果表明,三氯乙酸-丙酮沉淀法结合甲醇等有机... 以棉花叶片为材料,比较分析了不同叶位棉花叶片总蛋白提取方法、线性固相pH梯度(Immobilized pHgradient,IPG)胶条pH值、上样量、水化上样缓冲液中还原剂和两性电解质等对电泳结果的影响。结果表明,三氯乙酸-丙酮沉淀法结合甲醇等有机溶剂洗涤纯化样品能获得纯度较高的棉花叶片蛋白样品。24 cm pH 5～8的线性IPG胶条,300μg上样量,水化上样缓冲液中用还原剂TBP(三丁基膦)代替DTT(二硫苏糖醇),两性电解质pH 3～10和pH 5～8按1∶1(V/V)的比例混合使用,并结合适宜的双向电泳参数,可获得背景清晰、重复性较好、蛋白点数目多且分辨率高的双向电泳图谱。从而建立了一套适合于棉花叶片蛋白组学分析的双向电泳技术体系。 展开更多

关键词 棉花叶片 蛋白质提取方法 蛋白组学 双向电泳

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