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基于聚丙烯酰胺凝胶电泳结合在线荧光成像的蛋白质特异性定量分析方法
1
作者
邹睿
吁子贤
+4 位作者
郭泽华
戴皓正
张强
刘伟文
曹成喜
《色谱》
北大核心
2025年第9期1070-1077,共8页
蛋白质的特异性检测在生物分析和临床诊断中具有重要意义。现有方法如免疫固定电泳和蛋白质印迹法,需要手工染色和脱色等步骤,操作繁琐,耗时久且定量能力有限。本文结合在线荧光成像技术开发了一种蛋白质免疫聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)...
蛋白质的特异性检测在生物分析和临床诊断中具有重要意义。现有方法如免疫固定电泳和蛋白质印迹法,需要手工染色和脱色等步骤,操作繁琐,耗时久且定量能力有限。本文结合在线荧光成像技术开发了一种蛋白质免疫聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)定量检测方法。该方法首先采用荧光标记抗体结合目标蛋白质,使用甲醛交联免疫复合物后进行电泳和在线成像,最终通过计算凝胶电泳图像中游离抗体的荧光信号强度实现定量分析。整个检测流程可在1.5 h内完成。本文以人转铁蛋白(transferrin,TRF)为模式蛋白进行方法学验证,结果显示该方法的线性范围为5.0~200.0 mg/L,线性相关系数(R2)为0.9930,制作标准曲线的标准溶液中荧光信号强度的最大相对标准偏差(RSD)为1.65%,检出限为0.5 mg/L,加标回收率为98.2%~105.0%,表明该检测方法具有良好的精密度、灵敏度和准确度。相较于传统的PAGE方法,该方法利用实时荧光成像技术实现了对目标蛋白质的在线定量检测,具有分辨率高、特异性强、操作简便、分析快速以及重现性好等优点。该方法具有普适性,可应用于其他蛋白质的定量检测,在药物制备和临床诊疗等领域具有重要的应用价值。
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关键词
凝胶电泳
在线荧光成像
特异性检测
蛋白质定量分析
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职称材料
集成化蛋白质组定量分析平台的构建及应用
被引量：
1
2
作者
周愿
张珅
+2 位作者
袁辉明
张丽华
张玉奎
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期355-360,共6页
为提高蛋白质组定量分析的准确度、通量和自动化程度,构建了由微升级混合离子交换色谱、亲水型固定化酶反应器(hIMER)和纳升级反相色谱-电喷雾串级质谱(nanoRPLC-ESI-MS/MS)组成的集成化蛋白质定量分析平台。该平台实现了二甲基化标记...
为提高蛋白质组定量分析的准确度、通量和自动化程度,构建了由微升级混合离子交换色谱、亲水型固定化酶反应器(hIMER)和纳升级反相色谱-电喷雾串级质谱(nanoRPLC-ESI-MS/MS)组成的集成化蛋白质定量分析平台。该平台实现了二甲基化标记蛋白质样品在线分离、酶解、肽段分离鉴定和定量分析。采用质量比为1∶1的轻、重标记的蛋白质样品考察该平台的定量性能,发现蛋白质水平二甲基化标记效率为90%;蛋白质经hIMER在线酶解10 min产生的漏切及酶解产物在hIMER柱上的非特异性吸附对定量准确度的影响较小,所有定量到的重/轻标记的蛋白质质量比的平均值为1.01。最后将该平台应用于小鼠腹水型肝癌淋巴道高、低转移细胞系差异蛋白质的分析,发现了12种蛋白质在高转移细胞系中低表达,15种蛋白质在高转移细胞系中高表达。以上结果证明了该平台可以实现高准确度和高通量的蛋白质组定量分析。
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关键词
集成化
蛋白质
组
定量分析
平台
蛋白质
标记
定量
蛋白质
组学
亲水型固定化酶反应器
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职称材料
题名
基于聚丙烯酰胺凝胶电泳结合在线荧光成像的蛋白质特异性定量分析方法
1
作者
邹睿
吁子贤
郭泽华
戴皓正
张强
刘伟文
曹成喜
机构
上海交通大学自动化与感知学院
出处
《色谱》
北大核心
2025年第9期1070-1077,共8页
基金
国家自然科学基金项目(22104082,22074091,31727801).
文摘
蛋白质的特异性检测在生物分析和临床诊断中具有重要意义。现有方法如免疫固定电泳和蛋白质印迹法,需要手工染色和脱色等步骤,操作繁琐,耗时久且定量能力有限。本文结合在线荧光成像技术开发了一种蛋白质免疫聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)定量检测方法。该方法首先采用荧光标记抗体结合目标蛋白质,使用甲醛交联免疫复合物后进行电泳和在线成像,最终通过计算凝胶电泳图像中游离抗体的荧光信号强度实现定量分析。整个检测流程可在1.5 h内完成。本文以人转铁蛋白(transferrin,TRF)为模式蛋白进行方法学验证,结果显示该方法的线性范围为5.0~200.0 mg/L,线性相关系数(R2)为0.9930,制作标准曲线的标准溶液中荧光信号强度的最大相对标准偏差(RSD)为1.65%,检出限为0.5 mg/L,加标回收率为98.2%~105.0%,表明该检测方法具有良好的精密度、灵敏度和准确度。相较于传统的PAGE方法,该方法利用实时荧光成像技术实现了对目标蛋白质的在线定量检测,具有分辨率高、特异性强、操作简便、分析快速以及重现性好等优点。该方法具有普适性,可应用于其他蛋白质的定量检测,在药物制备和临床诊疗等领域具有重要的应用价值。
关键词
凝胶电泳
在线荧光成像
特异性检测
蛋白质定量分析
Keywords
gel electrophoresis
online fluorescence imaging
specific detection
protein quan-titation
分类号
O658 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
集成化蛋白质组定量分析平台的构建及应用
被引量：
1
2
作者
周愿
张珅
袁辉明
张丽华
张玉奎
机构
中国科学院大连化学物理研究所 中国科学院分离分析化学重点实验室 国家色谱研究分析中心
中国科学院大学
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期355-360,共6页
基金
国家重大科学研究计划(2012CB910604)
国家重大科学仪器设备开发专项(2012YQ120044-2)
国家自然科学基金项目(21190043)
文摘
为提高蛋白质组定量分析的准确度、通量和自动化程度,构建了由微升级混合离子交换色谱、亲水型固定化酶反应器(hIMER)和纳升级反相色谱-电喷雾串级质谱(nanoRPLC-ESI-MS/MS)组成的集成化蛋白质定量分析平台。该平台实现了二甲基化标记蛋白质样品在线分离、酶解、肽段分离鉴定和定量分析。采用质量比为1∶1的轻、重标记的蛋白质样品考察该平台的定量性能,发现蛋白质水平二甲基化标记效率为90%;蛋白质经hIMER在线酶解10 min产生的漏切及酶解产物在hIMER柱上的非特异性吸附对定量准确度的影响较小,所有定量到的重/轻标记的蛋白质质量比的平均值为1.01。最后将该平台应用于小鼠腹水型肝癌淋巴道高、低转移细胞系差异蛋白质的分析,发现了12种蛋白质在高转移细胞系中低表达,15种蛋白质在高转移细胞系中高表达。以上结果证明了该平台可以实现高准确度和高通量的蛋白质组定量分析。
关键词
集成化
蛋白质
组
定量分析
平台
蛋白质
标记
定量
蛋白质
组学
亲水型固定化酶反应器
Keywords
integrated proteome quantification platform
protein labeling
quantitative pro-teomics
hydrophilic immobilized enzymatic reactor（hIMER）
分类号
O658 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于聚丙烯酰胺凝胶电泳结合在线荧光成像的蛋白质特异性定量分析方法
邹睿
吁子贤
郭泽华
戴皓正
张强
刘伟文
曹成喜
《色谱》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
集成化蛋白质组定量分析平台的构建及应用
周愿
张珅
袁辉明
张丽华
张玉奎
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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职称材料
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