-
题名考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的优化
- 1
-
-
作者
刘金铭
李丽
王培
刘力强
刘浩
周晓辉
-
机构
河北科技大学食品与生物学院
河北科技大学资产与实验室管理处
-
出处
《河北科技大学学报》
北大核心
2025年第5期553-560,共8页
-
基金
国家药典委员会国家药品标准提高项目(2021Y04)
河北省外专百人计划项目(2200626)
河北省农业科技成果转化资金项目(202460101010040)。
-
文摘
针对传统考马斯亮蓝法在痕量蛋白质检测中灵敏度不足、稳定性差的问题,根据其反应原理对各个环节进行优化。首先,用酶标仪和96孔板替代传统的紫外分光光度计和比色皿,以提高检测通量与精度;其次,用20 mmol/L磷酸盐缓冲液(phosphate buffer,PB)替代水作为稀释液,以增强蛋白质溶出度;最后,将考马斯亮蓝G-250溶液优化为最佳配方——5 mg考马斯亮蓝G-250溶于含5%(体积分数,下同)的95%乙醇和13%的85%磷酸的水溶液中。结果表明:最佳反应体系为等体积牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)与考马斯亮蓝G-250溶液反应,最优反应条件为避光反应10 min;蛋白质浓度在0~21 mg/L范围内线性关系良好(线性相关系数R 2>0.99),检测限低至1μg/mL,准确度(80%~115%)和精密度(RSD<4%)均在药典参考值限度内。本文成功实现了痕量蛋白质的精准定量分析,且具有低成本、快速、高通量的特点,为蛋白质相关研究提供了更为精准、高效的技术支持。
-
关键词
应用生物化学
蛋白质含量测定方法
考马斯亮蓝
稳定性
检测限
-
Keywords
applied biochemistry
method for determination of protein content
Coomassie Brilliant Blue
stability
detection limit
-
分类号
Q599
[生物学—生物化学]
-
