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题名内含肽介导谷氨酰胺转胺酶酶原的活化
被引量：6
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作者
杜坤
周丽
堵国成
陈坚
周哲敏
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机构
江南大学工业生物技术教育部重点实验室
江南大学食品科学与技术国家重点实验室
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出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013年第9期90-94,共5页
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基金
国家自然科学基金项目(31070711)
教育部科学技术研究重大项目(311023)
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文摘
链霉菌来源的谷氨酰胺转胺酶(microbial transglutaminase,MTG)以酶原(pro-MTG)的形式表达,需要蛋白酶将其活化。蛋白酶有降解MTG及其底物的可能,且增加MTG的分离纯化成本。为解决上述问题,将一种pH值依赖型的内含肽(intein)插入pro区和MTG之间,用以介导二者之间的断裂,实现MTG的pH值控制活化。结果表明:重组蛋白(pro-Intein-MTG)在大肠杆菌中实现了可溶高表达。在pH7.0、25℃的体外环境下,重组蛋白经24h即可完全转化为MTG,且最高酶活力为0.23U/mL(菌体浓度稀释至OD600nm为1.0时测得)。重组型MTG的酶比活力和Km值分别为14.3U/mg、69.4mmol/L,与野生型MTG相近;且圆二色谱显示二者具有相似的二级结构,说明内含肽的插入对于MTG的功能和结构无显著影响。
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关键词
蛋白质剪接技术
内含肽
酶原活化
谷氨酰胺转胺酶
吸水链霉菌
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Keywords
protein splicing
intein
pro-enzyme activation
transglutaminase
Streptomyces hygroscopicus
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分类号
Q816
[生物学—生物工程]
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