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鸭干扰素刺激基因的克隆、表达及其多克隆抗体的制备
被引量：
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作者
黄惠兰
李文俊
+4 位作者
谢梓民
杨惠湖
崔惠仪
黄淑坚
张雪莲
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第11期3713-3721,共9页
本研究旨在克隆、表达鸭干扰素刺激基因(interferon-induced proteins with tetratricopeptide repeats 5,IFIT5)并制备其多克隆抗体。根据GenBank公布的绿头鸭IFIT5(登录号:KF956064)序列设计特异性引物,PCR扩增获得鸭IFIT5基因,并构...
本研究旨在克隆、表达鸭干扰素刺激基因(interferon-induced proteins with tetratricopeptide repeats 5,IFIT5)并制备其多克隆抗体。根据GenBank公布的绿头鸭IFIT5(登录号:KF956064)序列设计特异性引物,PCR扩增获得鸭IFIT5基因,并构建原核表达重组质粒pET-30a-IFIT5和pET-32a-IFIT5及真核表达重组质粒pcDNA3.1-IFIT5。原核表达获得鸭IFIT5重组蛋白后,进行SDS-PAGE分析,并利用镍柱亲和层析方法对重组蛋白进行纯化。以纯化的鸭IFIT5重组蛋白为免疫原制备兔抗鸭IFIT5多克隆抗体。利用间接ELISA测定多克隆抗体效价、用Western blotting鉴定其特异性;将真核表达重组质粒pcDNA3.1-IFIT5转化BHK21细胞,通过间接免疫荧光法鉴定多克隆抗体的反应性。结果表明:目的蛋白主要以包涵体的形式存在;制备的兔抗鸭IFIT5多克隆抗体效价达1∶49600,可特异性识别鸭IFIT5重组蛋白,间接免疫荧光试验则表明纯化的多克隆抗体可特异性识别BHK21瞬时真核表达的鸭IFIT5蛋白。综上,成功克隆了鸭干扰素刺激基因IFIT5,制备的兔抗鸭IFIT5多克隆抗体可用于鸭IFIT5蛋白的检测,可为鸭IFIT5蛋白的后续研究提供材料支撑。
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关键词
鸭
干扰素刺激基因(IFIT5)
基因克隆
蛋白表达及检测
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职称材料
题名
鸭干扰素刺激基因的克隆、表达及其多克隆抗体的制备
被引量：
1
1
作者
黄惠兰
李文俊
谢梓民
杨惠湖
崔惠仪
黄淑坚
张雪莲
机构
佛山科学技术学院生命科学与工程学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第11期3713-3721,共9页
基金
广东省教育厅青年创新人才项目(2018KQNCX277)
佛山科学技术学院动物新发疫病防控重点实验室“开放基金”项目(KLPREAD201801-09、KLPREAD201801-08)
+2 种基金
广东省现代农业产业技术体系创新团队(2019KJ137)
广东省教育厅预防兽医学重点实验室项目(2014KTSPT037)
广东省教育厅普通高校重点领域专项(乡村振兴)(2020ZDZX1004)。
文摘
本研究旨在克隆、表达鸭干扰素刺激基因(interferon-induced proteins with tetratricopeptide repeats 5,IFIT5)并制备其多克隆抗体。根据GenBank公布的绿头鸭IFIT5(登录号:KF956064)序列设计特异性引物,PCR扩增获得鸭IFIT5基因,并构建原核表达重组质粒pET-30a-IFIT5和pET-32a-IFIT5及真核表达重组质粒pcDNA3.1-IFIT5。原核表达获得鸭IFIT5重组蛋白后,进行SDS-PAGE分析,并利用镍柱亲和层析方法对重组蛋白进行纯化。以纯化的鸭IFIT5重组蛋白为免疫原制备兔抗鸭IFIT5多克隆抗体。利用间接ELISA测定多克隆抗体效价、用Western blotting鉴定其特异性;将真核表达重组质粒pcDNA3.1-IFIT5转化BHK21细胞,通过间接免疫荧光法鉴定多克隆抗体的反应性。结果表明:目的蛋白主要以包涵体的形式存在;制备的兔抗鸭IFIT5多克隆抗体效价达1∶49600,可特异性识别鸭IFIT5重组蛋白,间接免疫荧光试验则表明纯化的多克隆抗体可特异性识别BHK21瞬时真核表达的鸭IFIT5蛋白。综上,成功克隆了鸭干扰素刺激基因IFIT5,制备的兔抗鸭IFIT5多克隆抗体可用于鸭IFIT5蛋白的检测,可为鸭IFIT5蛋白的后续研究提供材料支撑。
关键词
鸭
干扰素刺激基因(IFIT5)
基因克隆
蛋白表达及检测
Keywords
duck
interferon-induced proteins with tetratricopeptide repeats 5(IFIT5)
gene cloning
protein expression and detection
分类号
S834 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸭干扰素刺激基因的克隆、表达及其多克隆抗体的制备
黄惠兰
李文俊
谢梓民
杨惠湖
崔惠仪
黄淑坚
张雪莲
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020
1
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引证文献
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