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尘螨肠道微生物蛋白核苷二磷酸激酶的克隆、表达及纯化
被引量：
2
1
作者
杨小猛
王俊轶
+2 位作者
陈涛
刘志刚
杨平常
《江西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2014年第5期485-488,共4页
根据GenBank中NDP kinase的基因序列,采用生物信息学方法将其中稀有密码子改造为大肠埃希菌常用密码子并进行二级结构优化,合成NDP kinase基因,构建原核表达载体pET28a-NDP kinase并酶切鉴定其序列,在大肠埃希菌BL21(DE3)中用异丙基-β...
根据GenBank中NDP kinase的基因序列,采用生物信息学方法将其中稀有密码子改造为大肠埃希菌常用密码子并进行二级结构优化,合成NDP kinase基因,构建原核表达载体pET28a-NDP kinase并酶切鉴定其序列,在大肠埃希菌BL21(DE3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,重组产物采用镍离子金属螯合亲和层析柱纯化.经密码子改造和二级结构优化后NDP kinase基因长度为490 bp,其编码蛋白理论分子量为21.5 kDa,重组表达载体经酶切鉴定与理论推测结果相符,在大肠埃希菌BL21(DE3)中该基因经IPTG诱导可高效表达,纯化后的重组蛋白分子量约为21.5 kDa,其单一蛋白纯度达95%以上.本研究成功构建了尘螨肠道微生物蛋白核苷二磷酸酶(NDP kinase)基因的pET28a原核重组质粒,为进一步研究NDP kinase在尘螨疫苗免疫治疗中的作用机理提供了基础.
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关键词
尘螨
肠道微生物
蛋白核苷二磷酸激酶
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职称材料
题名
尘螨肠道微生物蛋白核苷二磷酸激酶的克隆、表达及纯化
被引量：
2
1
作者
杨小猛
王俊轶
陈涛
刘志刚
杨平常
机构
深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所
泸州医学院附属医院呼吸内科
深圳市过敏反应与免疫学重点实验室
出处
《江西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2014年第5期485-488,共4页
基金
国家自然科学基金(31328014
81300028)
+1 种基金
广东省高等学校国际暨港澳台科技合作创新平台(2012gjhz0009)
深圳市科技计划基础研究(JCYJ20120613100657482)资助项目
文摘
根据GenBank中NDP kinase的基因序列,采用生物信息学方法将其中稀有密码子改造为大肠埃希菌常用密码子并进行二级结构优化,合成NDP kinase基因,构建原核表达载体pET28a-NDP kinase并酶切鉴定其序列,在大肠埃希菌BL21(DE3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,重组产物采用镍离子金属螯合亲和层析柱纯化.经密码子改造和二级结构优化后NDP kinase基因长度为490 bp,其编码蛋白理论分子量为21.5 kDa,重组表达载体经酶切鉴定与理论推测结果相符,在大肠埃希菌BL21(DE3)中该基因经IPTG诱导可高效表达,纯化后的重组蛋白分子量约为21.5 kDa,其单一蛋白纯度达95%以上.本研究成功构建了尘螨肠道微生物蛋白核苷二磷酸酶(NDP kinase)基因的pET28a原核重组质粒,为进一步研究NDP kinase在尘螨疫苗免疫治疗中的作用机理提供了基础.
关键词
尘螨
肠道微生物
蛋白核苷二磷酸激酶
Keywords
dust mite
intestinal microflora
nucleoside diphosphate kinase
分类号
Q938 [生物学—微生物学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
尘螨肠道微生物蛋白核苷二磷酸激酶的克隆、表达及纯化
杨小猛
王俊轶
陈涛
刘志刚
杨平常
《江西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2014
2
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