化学发光自显影免疫印迹法(Western Blotting)检测绒山羊皮肤组织中催乳素受体蛋白 被引量：3

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作者 孙庆林 王和平 德伟 《科学技术与工程》 2003年第1期55-57,共3页

采集不同季节绒山羊皮肤组织样品,提取总蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,将电泳结果转移到醋酸纤维薄膜,然后与催乳素抗体结合、辣根过氧化物酶标记二抗结合,后者作用于化学发光底物,暗室中置X-光胶片上自显影数分钟,经显影、定影,得到黑色... 采集不同季节绒山羊皮肤组织样品,提取总蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,将电泳结果转移到醋酸纤维薄膜,然后与催乳素抗体结合、辣根过氧化物酶标记二抗结合,后者作用于化学发光底物,暗室中置X-光胶片上自显影数分钟,经显影、定影,得到黑色曝光斑,根据胶片上曝光斑的位置确定出催乳素受体的分子量为87kD。根据不同时期样品黑斑的大小得出各时期催乳素受体表达量与绒毛生长趋势是一致的。 展开更多

关键词 绒毛生长 分子量 日照时间 化学发光自显影免疫印迹法 绒山羊 皮肤组织 催乳素受体蛋白

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超敏化学发光液稀释法降低蛋白印迹的发光强度

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作者 范才文 唐娟 +2 位作者 罗琴 李璐 向秋 《广西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2017年第2期108-111,共4页

蛋白印迹(western blot)分析是根据抗原、抗体特异性结合的原理检测复杂样品中某蛋白的技术。然而当样品中的蛋白浓度过低,特别是目标蛋白为低丰度蛋白时,采用普通化学发光检测,有时出现蛋白条带发光弱,曝光不够,而采用超敏化学发光检... 蛋白印迹(western blot)分析是根据抗原、抗体特异性结合的原理检测复杂样品中某蛋白的技术。然而当样品中的蛋白浓度过低,特别是目标蛋白为低丰度蛋白时,采用普通化学发光检测,有时出现蛋白条带发光弱,曝光不够,而采用超敏化学发光检测则出现蛋白条带发光强,曝光过度,两者的蛋白条带显影图像均不理想。本文将超敏化学发光液稀释后再检测,显影效果显著提高,蛋白条带图像清晰,可见超敏化学发光液稀释法降低蛋白印迹的发光强度,提高了蛋白条带的显影效果。 展开更多

关键词 蛋白印迹 超敏发光液 化学发光 稀释

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增强疏水膜半干式蛋白电泳印迹作用的实验 被引量：1

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作者 李闻捷 Joseph-Fu SC 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期F002-F002,共1页

关键词 半干式电转移 印迹法 蛋白质 增强疏水膜

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蛋白质印迹技术 被引量：4

4

作者 汪渊 朱华庆 +7 位作者 张素梅 王雪 伍权 储兵 陈厚早 卜丽佳 周青 桂淑玉 《安徽医科大学学报》 CAS 2004年第3期245-246,F003,共3页

关键词 印迹法 蛋白质/方法 化学发光 角膜 上皮细胞

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Western blot检测家兔动脉组织蛋白质表达条件的优化 被引量：7

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作者 马艳琴 孙子龙 +2 位作者 王彬 郭超 陈鹏晓 《农学学报》 2011年第4期52-56,共5页

蛋白质免疫印记技术是研究和分析蛋白质的重要手段,由于其步骤繁杂、影响因素众多,常出现背景噪音高、非特异条带多、拖尾等问题,严重影响后续蛋白质定量分析。为建立最佳的检测家兔动脉组织中蛋白质表达的蛋白质免疫印记技术实验条件,... 蛋白质免疫印记技术是研究和分析蛋白质的重要手段,由于其步骤繁杂、影响因素众多,常出现背景噪音高、非特异条带多、拖尾等问题,严重影响后续蛋白质定量分析。为建立最佳的检测家兔动脉组织中蛋白质表达的蛋白质免疫印记技术实验条件,以家兔动脉组织血管细胞粘附分子-1为目标蛋白,从电泳条件、抗体浓度、抗体孵育时间、温度及方法、免疫显色方法等方面进行了改良,成功建立了快速、灵敏、特异的蛋白质免疫印记技术体系;并比较了3种常用的酶免疫显色技术:3,3’-二氨基联苯胺(3,3’-diaminobenzidine,DAB)显色、增强化学发光法(enhanced chemil luminescence,ECL)X光片曝光及ECL化学发光冷却电感耦合成像系统(cooled charged-coupled device,CCD)成像的敏感性。结果表明ECL化学发光法比DAB显色法敏感性高出2～10倍,其中CCD系统敏感性高于X光片4倍,且操作简便,是最理想的检测方法。 展开更多

关键词 蛋白质免疫印记技术 聚丙烯酰胺凝胶电泳 增强化学发光法 冷却电感耦合成像系统

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血管生成素与绿色荧光蛋白融合蛋白的表达及纯化

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作者 李凌云 许正平 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期437-442,共6页

目的:表达并纯化血管生成素(ANG)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白,以进一步探讨血管生成素的生物学功能。方法:PCR扩增人ANG基因,将其与EGFP基因融合后克隆到高表达载体pMFHT,构建了原核表达质粒pHIS鄄ANG鄄EGFP。该质粒转化大肠杆... 目的:表达并纯化血管生成素(ANG)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白,以进一步探讨血管生成素的生物学功能。方法:PCR扩增人ANG基因,将其与EGFP基因融合后克隆到高表达载体pMFHT,构建了原核表达质粒pHIS鄄ANG鄄EGFP。该质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并用金属螯合亲和层析纯化目的蛋白。激光共聚焦显微镜和Westernblot鉴定融合蛋白的表达情况。结果:重组蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并从破菌上清中一步纯化目的蛋白,纯度可达95%以上。Westernblot分析表明表达产物具有良好的抗原性和特异性。诱导表达的菌体在激光共聚焦显微镜下可发射明亮的绿色荧光。结论:成功的表达并纯化了ANG鄄EGFP融合蛋白,利用EGFP的荧光示踪作用,该融合蛋白可用于血管生成素核转位和胞内共定位蛋白质研究。 展开更多

关键词 血管生成素 增强型绿色荧光蛋白 免疫印迹分析 金属螯合亲和层析 融合表达

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β淀粉样肽22-35单克隆抗体的制备和应用 被引量：3

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作者 盛敬伟 胡雅儿 夏宗勤 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2001年第2期110-112,140,共4页

目的制备稳定分泌Aβ2 2 -35单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,以Aβ2 2 -35单克隆抗体建立Aβ检测方法。　方法以人工合成的Aβ2 2 -35连接匙孔槭血蓝蛋白 ,免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0 细胞融合 ,制得能稳定分泌Aβ2 2 -35单克隆抗体... 目的制备稳定分泌Aβ2 2 -35单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,以Aβ2 2 -35单克隆抗体建立Aβ检测方法。　方法以人工合成的Aβ2 2 -35连接匙孔槭血蓝蛋白 ,免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0 细胞融合 ,制得能稳定分泌Aβ2 2 -35单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,采用Westernblotting增强化学发光技术观察大鼠脑内Aβ含量。　 结果得到 2株能稳定分泌Aβ2 2 -35单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,Aβ2 2 -35单克隆抗体的Ig亚类为IgG3 ,青年组和老年组大鼠脑Aβ含量分别为 9.8± 2 .8和 13 .3 6± 2 .65 pmol/ 12mg脑组织。　 结论制备得到的Aβ2 2 -35单克隆抗体特异性强 ,效价高 ,测得的老年大鼠脑Aβ含量显著高于青年大鼠。 展开更多

关键词 Aβ22-35单克隆抗体 免疫沉淀 蛋白印迹增强化学发光 Β淀粉样肽 制备

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快慢转法及不同滤膜和显色检测法在Western blotting中的应用分析 被引量：4

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作者 孔令泉 蒲莹晖 +2 位作者 马仕坤 涂刚 任国胜 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期26-29,共4页

目的探讨快、慢转法及不同滤膜和显色检测法在Western blotting中的应用及各实验环节分析。方法采用MDA-MB-231细胞制备细胞蛋白,应用不同印迹膜[硝酸纤维素膜、聚偏乙烯二氟(PVDF)膜和阳离子尼龙膜]分别采用快转法和慢转法进行增强化... 目的探讨快、慢转法及不同滤膜和显色检测法在Western blotting中的应用及各实验环节分析。方法采用MDA-MB-231细胞制备细胞蛋白,应用不同印迹膜[硝酸纤维素膜、聚偏乙烯二氟(PVDF)膜和阳离子尼龙膜]分别采用快转法和慢转法进行增强化学发光法(ECL)和DAB化学显色法检测,并对Western blotting的各实验环节进行了分析。结果(1)在快、慢转法中硝纤膜的蛋白预染marker条带略强于尼龙膜,而尼龙膜又略强于PVDF膜;PVDF膜和尼龙膜的正反面易于混淆,而硝纤膜的正反面不易混淆。(2)在快、慢转法中,PVDF膜的DAB化学显色法图像略强于尼龙膜和硝纤膜,而尼龙膜和硝纤膜无明显差异;与慢转法相比,快转的硝纤膜和尼龙膜中的蛋白条带略呈波浪状。(3)在慢转法中三种膜化学发光法的图像无明显背景,但在快转法中尼龙膜的背景较明显,而硝纤膜和PVDF膜亦无明显背景。结论应根据实验需要选用不同的印迹膜;慢转法通常优于快转法,增强化学发光法优于DAB化学显色法;增强化学发光法特异胜强、灵敏度高,是分析蛋白质表达较为理想的方法。 展开更多

关键词 WESTERN印迹 增强化学发光法 DAB化学显色法 印迹膜 快转法 慢转法

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Lef-1基因在棕色和白色羊驼皮肤差异表达 被引量：9

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作者 杨磊 王海东 +3 位作者 王祎 于秀菊 董彦君 董常生 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1061-1066,共6页

本实验旨在研究淋巴增强因子-1(Lef-1)在不同毛色羊驼皮肤中的表达和定位,探索其与毛色间的关系.采用实时荧光定量PCR、Western印迹以及免疫组织化学方法,研究白色和棕色羊驼皮肤中的mRNA、蛋白表达水平和定位.定量实时荧光PCR结果显示,... 本实验旨在研究淋巴增强因子-1(Lef-1)在不同毛色羊驼皮肤中的表达和定位,探索其与毛色间的关系.采用实时荧光定量PCR、Western印迹以及免疫组织化学方法,研究白色和棕色羊驼皮肤中的mRNA、蛋白表达水平和定位.定量实时荧光PCR结果显示,Lef-1在棕色羊驼皮肤组织相对基因表达量是3.372 7±0.198 9,在白色羊驼皮肤组织是1.000 3±0.022 7;Western印迹结果显示,在羊驼皮肤组织总蛋白中存在分子量约44 kD与兔抗Lef-1多克隆抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带,棕色羊驼平均蛋白表达量显著高于白色羊驼;免疫组织化学结果显示,在棕色羊驼皮肤组织中多表达在毛球部,表皮也有分布,在白色羊驼皮肤组织中多表达在表皮,在棕色和白色羊驼皮肤组织中外根鞘都有较强表达.结果显示,Lef-1在棕色和白色羊驼皮肤的定位和含量存在差异,提示Lef-1可能影响了羊驼被毛颜色的形成. 展开更多

关键词 淋巴增强因子-1(Lef-1) 羊驼 定量实时荧光PCR 蛋白质印迹 免疫组织化学

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铝暴露对大鼠海马的影响及其机制研究

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作者 贾晓杰 谢鑫 +1 位作者 王德山 王哲 《中华中医药学刊》 CAS 2012年第2期290-291,共2页

目的:通过观察铝暴露后大鼠记忆行为学、电生理长时程增强(LTP)、神经生化(ERK含量)变化,探讨铝物质对学习记忆的影响作用机制,并为中医理论"脑主神明"提供可靠的实验依据。方法:实施铝暴露:给大鼠自由饮用不同剂量AlCl3溶液... 目的:通过观察铝暴露后大鼠记忆行为学、电生理长时程增强(LTP)、神经生化(ERK含量)变化,探讨铝物质对学习记忆的影响作用机制,并为中医理论"脑主神明"提供可靠的实验依据。方法:实施铝暴露:给大鼠自由饮用不同剂量AlCl3溶液。观察鼠Morris水迷宫行为学表现、细胞外微电极记录各组海马DG-CA3途径的LTP(长时程增强)、蛋白免疫印迹(Western-Blot)方法测定细胞外信号调节激酶(ERKs)活性。结果:对照组、低剂量组、高剂量组的行为学表现、LTP、Western-Blot ERKs表达比较有显著差异(P<0.05)。结论:铝在体内蓄积可以影响大鼠的学习记忆,并为中医理论"脑主神明"提供实验依据。 展开更多

关键词 脑主神明 长时程增强 蛋白免疫印迹 细胞外信号调节激酶

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其他

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《中国光学》 EI CAS 2008年第3期17-17,共1页

关键词 胰蛋白酶 有机磷农药 化学发光增强法 鲁米诺 离子轰击 流动注射化学发光 发光强度 线性关系 自然科学版 定量测定

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