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富硒海洋球石藻(Emiliania huxleyi)的培养及其硒蛋白的初步分离纯化 被引量:7
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作者 刘静雯 张稚兰 +1 位作者 杜翠红 黄志勇 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期879-884,共6页
在不同浓度亚硒酸钠(Na2SeO3)条件下培养海洋球石藻,分析其生长和富集硒情况,并采用(NH4)2SO4分级盐析、DEAE-Sepharose离子交换柱层析和SephacrylS-200凝胶过滤层析方法,对球石藻硒蛋白进行了初步分离纯化。结果表明,在本实验条件下,... 在不同浓度亚硒酸钠(Na2SeO3)条件下培养海洋球石藻,分析其生长和富集硒情况,并采用(NH4)2SO4分级盐析、DEAE-Sepharose离子交换柱层析和SephacrylS-200凝胶过滤层析方法,对球石藻硒蛋白进行了初步分离纯化。结果表明,在本实验条件下,不添加外源硒的f/2培养基本底硒浓度(约3.2nmol/L)为海洋球石藻最佳生长和富硒的硒浓度,其细胞内硒含量可达到6475?g/g干重。离子交换和凝胶层析分离的含硒蛋白结合的最高硒含量分别达到392.3ng/mg和663.5ng/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定显示,在分子量分别约为41.3kDa和30.1kDa处各有单一电泳条带。结果提示,海洋球石藻能在环境硒浓度极低的条件下大量吸收硒并将大部分无机硒转化为硒蛋白。富硒能力较强的海洋球石藻有望作为一种新的有机硒资源,对开发含硒安全性食品具有很大的应用潜力。 展开更多
关键词 海洋球石藻 富硒培养 蛋白分离纯化
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冰核活性细菌中冰核活性蛋白质的分离与纯化的研究 被引量:3
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作者 陈庆森 王昌禄 +2 位作者 高秀芝 阎亚丽 庞广昌 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第10期398-401,共4页
解决生物冰核应用中的安全问题,从产冰核活性的细菌中分离纯化天然冰核活性蛋白质是一条重要途径,对其应用具有重要价值。本研究以冰核活性细菌(Erwinia herbicola 10025A)为实验菌种,经培养获得高浓度发酵液,离心处理后,采用超声波破... 解决生物冰核应用中的安全问题,从产冰核活性的细菌中分离纯化天然冰核活性蛋白质是一条重要途径,对其应用具有重要价值。本研究以冰核活性细菌(Erwinia herbicola 10025A)为实验菌种,经培养获得高浓度发酵液,离心处理后,采用超声波破碎、凝胶层析的方法,分离纯化得到了Erwiniaherbicola10025A的I型冰核活性蛋白质。该蛋白质经SDS-PAGE的分析鉴定,证实了该冰核活性蛋白质的分子量为150kD左右。 展开更多
关键词 冰核活性细菌 冰核活性蛋白 蛋白分离纯化 分子量测定
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肺腺癌组织中HSP70多肽复合物的分离及纯化 被引量:1
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作者 李杰 梁守沛 +5 位作者 陆皓泉 孙鹏辉 王小龙 许东 姚武 周舫 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第6期753-755,共3页
目的:探讨肺腺癌组织中HSP70多肽复合物分离及纯化的可行性方案。方法:采用裂解液裂解、超声破碎、ConA-sepharose亲和层析和DEAE阴离子交换层析方法,从肺腺癌组织中分离纯化HSP70蛋白复合物;通过SDS-PAGE电泳、Westernblot检测获得蛋白... 目的:探讨肺腺癌组织中HSP70多肽复合物分离及纯化的可行性方案。方法:采用裂解液裂解、超声破碎、ConA-sepharose亲和层析和DEAE阴离子交换层析方法,从肺腺癌组织中分离纯化HSP70蛋白复合物;通过SDS-PAGE电泳、Westernblot检测获得蛋白;运用Bradford法对其进行定量分析。结果:通过该实验方法可以从1g肺癌组织中获取110μg左右的HSP70多肽复合物,其相对分子质量为70000。结论:采用ConA-sepharose亲和层析和DEAE阴离子亲和层析相结合的蛋白纯化法可以获取高纯度的HSP70多肽复合物。 展开更多
关键词 肺腺癌 HSP70多肽复合物 蛋白分离纯化
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蛋清溶菌酶分离纯化实验的改进 被引量:2
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作者 刘奕君 赵宇煊 +6 位作者 高松民 王雅 郝帅林 杨志伟 陈志玲 刘晓晴 王海龙 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2020年第8期200-203,共4页
蛋白质分离纯化技术是生化及分子生物学实验技术的重要组成部分,在本科实验教学中占有重要地位。为了探索合适的实验方法和实验条件,优化本科实验教学中的溶菌酶分离纯化实验,以获得更好的纯化结果和教学效果,该文使用离子交换层析、硫... 蛋白质分离纯化技术是生化及分子生物学实验技术的重要组成部分,在本科实验教学中占有重要地位。为了探索合适的实验方法和实验条件,优化本科实验教学中的溶菌酶分离纯化实验,以获得更好的纯化结果和教学效果,该文使用离子交换层析、硫铵沉淀、分子筛层析等方法成功地从蛋清中纯化出高纯度的溶菌酶,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法鉴定了样品纯度,并用溶壁微球菌做为底物测定了纯化酶的活力及比活力。结果显示,使用改进后的方法能够得到较高纯度和比活力的溶菌酶,整个实验重复性好、易于操作,适合作为本科教学实验项目。 展开更多
关键词 溶菌酶 蛋白分离纯化技术 实验教学
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蛋白质层析系统在实验教学中的应用 被引量:3
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作者 赵玉红 李欣 +5 位作者 崔建林 赵立青 李小菊 李登文 张金红 周浩 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2016年第5期48-51,57,共5页
设计"KTAprime plus蛋白质层析系统纯化绿色荧光蛋白(GFP)"的综合实验,以GFP蛋白为研究对象,在大肠杆菌中大量表达重组GFP蛋白,经镍柱亲和层析、离子交换层析以及凝胶过滤层析3种常用层析技术逐步纯化,各步纯化样品经SDS-P... 设计"KTAprime plus蛋白质层析系统纯化绿色荧光蛋白(GFP)"的综合实验,以GFP蛋白为研究对象,在大肠杆菌中大量表达重组GFP蛋白,经镍柱亲和层析、离子交换层析以及凝胶过滤层析3种常用层析技术逐步纯化,各步纯化样品经SDS-PAGE鉴定分析,最终获得高纯度的GFP蛋白。通过该实验使学生深入、全面、系统地掌握生命科学研究中最新的蛋白质分离纯化技术,提高学生的科研水平和综合能力。 展开更多
关键词 蛋白质层析系统 蛋白分离纯化 镍柱亲和层析 离子交换层析 凝胶过滤层析
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烟草多酚氧化酶的分离提纯及性质研究 被引量:30
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作者 戴亚 唐宏 +1 位作者 施春华 刘清亮 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 2001年第4期7-12,共6页
本文用丙酮干粉,硫酸铵分级沉淀,阴离子交换层析,阳离子交换层析和凝胶过滤方法从新鲜的烟叶中分离纯化出了一种多酚氧化酶Ⅰ和多酚氧化酶Ⅱ(根据过DEAE-Sephadex A-50柱后的前后顺序,命名A-5柱先洗脱的活性组分为... 本文用丙酮干粉,硫酸铵分级沉淀,阴离子交换层析,阳离子交换层析和凝胶过滤方法从新鲜的烟叶中分离纯化出了一种多酚氧化酶Ⅰ和多酚氧化酶Ⅱ(根据过DEAE-Sephadex A-50柱后的前后顺序,命名A-5柱先洗脱的活性组分为多酚氧化酶Ⅰ(PPOⅠ),后洗脱的为多酚氧化酶Ⅱ(PPO Ⅱ)))。分离后多酚氧化酶Ⅰ的比活力是原来的71倍,而多酚氧化酶Ⅱ的比活力为原来的100倍。SDS-PAGE电泳显示分离所得的多酚氧化酶为纯品,其分子量分别为42kDa和42.5kDa。最后测量了分离得到的PPO的一些基本性质,结果表明多酚氧化酶Ⅰ在pH=7,t=40℃时具有最大活力,多酚氧化酶Ⅱ在pH=6,t=40℃时具有最大活力。动力学研究表明在pH=6.5,以邻苯二酚为底物的条件下,两种酶Km值分别为6.8mmol/L和1.2mmol/L。 展开更多
关键词 烟草 多酚氧化酶 蛋白分离纯化 含铜蛋白
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