期刊文献+
共找到7篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
蛇毒金属蛋白酶抑制剂基因的合成及杆状病毒表达载体的构建 被引量:7
1
作者 徐剑文 林建银 +2 位作者 林旭 齐元麟 张晓艳 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期755-764,共10页
研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建。根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)... 研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建。根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)中,PCR扩增、酶切及测序鉴定;根据测序结果用定点突变法逐一改正错误位点。随后将该基因插入到转座载体pFastBac HT C的MCS中,转化大肠杆菌DH5-αT1,以LB/AP平板筛选阳性重组子,PCR扩增、酶切鉴定,提取pFastBac HT C-BJ46a重组体进一步转化DH10Bac感受态细胞,48h后通过蓝白筛选,挑取单个白色菌落划线,证实所得菌落均为白斑,挑克隆PCR鉴定。结果表明成功构建杆状病毒重组转座载体、重组穿梭载体。含BJ46a基因的重组杆状病毒感染Sf 9昆虫细胞,获得目的蛋白的表达。BJ46a基因的合成及杆状病毒表达载体的成功构建,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a) 基因合成 基因克隆 基因突变 重组杆状病毒载体
在线阅读 下载PDF
眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A诱导人内皮细胞释放炎症介质及凋亡 被引量:3
2
作者 叶巧玲 孙黔云 李敏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1001-1006,共6页
目的研究眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对人内皮细胞的作用。方法采用MTT法、SRB法、形态学观察分别检测atrase A对人微血管内皮细胞生长的影响;内皮细胞经at-rase A处理后,ELISA法检测内皮细胞释放IL-8、ICAM-1、MCP-1、E-selectin的变化... 目的研究眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对人内皮细胞的作用。方法采用MTT法、SRB法、形态学观察分别检测atrase A对人微血管内皮细胞生长的影响;内皮细胞经at-rase A处理后,ELISA法检测内皮细胞释放IL-8、ICAM-1、MCP-1、E-selectin的变化,萤光发光法检测各组caspase-8、caspase-3/7的表达情况。经尾静脉给予大鼠atrase A后,检测大鼠血清中ICAM-1、IL-8、TNF-α的变化情况。结果At-rase A(400、40 mg.L-1)对内皮细胞的生长具有明显的抑制作用。而MTT法结果显示,atrase A对高接种密度的内皮细胞基本上没有影响;镜检结果显示,atrase A(400、40 mg.L-1)可使贴壁生长的内皮细胞解离悬浮。而4 mg.L-1的atrase A对内皮细胞的生长没有影响。高剂量atrase A(400mg.L-1)可诱导内皮细胞IL-8、ICAM-1、MCP-1释放增加,而低剂量atrase A(4 mg.L-1)对各炎症介质的表达没有影响。Atrase A还可诱导内皮细胞caspase-8、caspase-3/7的表达,12 h达峰值。经尾静脉分别给予2 240μg.kg-1和400μg.kg-1的atrase A后,高剂量组SD大鼠血清中ICAM-1、IL-8、TNF-α表达增加;而低剂量组中没有明显变化。结论眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A可抑制内皮细胞生长,诱导内皮细胞释放炎症介质和凋亡。 展开更多
关键词 蛇毒金属蛋白酶 内皮细胞 炎症 凋亡 炎症因子 细胞粘附分子 眼镜蛇毒
在线阅读 下载PDF
眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A抗血小板聚集作用及机制 被引量:2
3
作者 王彩娥 孙黔云 +1 位作者 李敏 石京山 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期743-747,共5页
目的研究中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对血小板聚集的影响及其相关的机制。方法测定atrase A对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导血小板聚集的影响情况,并通过蛋白质免疫印迹检测atrase A对血... 目的研究中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对血小板聚集的影响及其相关的机制。方法测定atrase A对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导血小板聚集的影响情况,并通过蛋白质免疫印迹检测atrase A对血小板膜糖蛋白和血管假血友病因子的酶切情况。结果中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A能明显抑制由瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集,这种抑制作用呈量效、时效关系。而atrase A和血小板预孵5min后对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸诱导的血小板聚集有微弱的抑制作用,预孵时间延长至30min对血小板聚集有明显的抑制作用。蛋白质免疫印迹结果显示atrase A能特异性酶切血小板膜糖蛋白GPIb,但对vWF几乎没有酶切作用。结论中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导的血小板聚集均有抑制作用,其中对瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集具有明显的抑制作用,其机制是通过酶切血小板膜糖蛋白GPIb。 展开更多
关键词 中华眼镜蛇毒 蛇毒金属蛋白酶 血小板聚集 血小板膜糖蛋白 瑞斯托霉素 凝血酶
在线阅读 下载PDF
两个菜花烙铁头蛇毒金属蛋白酶去整合素基因的克隆与序列分析(英文) 被引量:1
4
作者 陈润强 金扬 +3 位作者 周兴丁 吕秋敏 王婉瑜 熊郁良 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期6-12,共7页
从菜花烙铁头蛇的毒腺中 ,利用RT PCR进行体外扩增 ,克隆到 2个金属蛋白酶 去整合素基因 ,命名为TJM 1、TJM 2 .TJM 1cDNA全长为 15 2 8bp ,编码 4 81个氨基酸 ;TJM 2cDNA全长为 15 78bp ,编码 4 84个氨基酸 .TJM 1和TJM 2都属于Ⅱ型... 从菜花烙铁头蛇的毒腺中 ,利用RT PCR进行体外扩增 ,克隆到 2个金属蛋白酶 去整合素基因 ,命名为TJM 1、TJM 2 .TJM 1cDNA全长为 15 2 8bp ,编码 4 81个氨基酸 ;TJM 2cDNA全长为 15 78bp ,编码 4 84个氨基酸 .TJM 1和TJM 2都属于Ⅱ型蛇毒金属蛋白酶 ,由信号肽、前肽、金属蛋白酶、间隔肽和去整合素 5部分组成 .Ⅱ型蛇毒金属蛋白酶氨基酸序列的比较及进化分析显示 ,它可进一步分为两类 ,一类包括大多数Ⅱ型蛇毒金属蛋白酶 (其中含有TJM 1) ,而TJM 2和agkistin则组成了另一类 .并且TJM 2和agkistin的第 4 0 7位和第 4 2 6位残基都是半胱氨酸 ,而在其它Ⅱ型金属蛋白酶的相应位置 ,4 0 7位是丝氨酸 ,4 2 6位则缺失 .TJM 2和agkistin均有可与整合素α2 Ⅰ区域特异性结合的片段Q NRKRHDNAQ(残基 2 76~ 2 84 ) ,这个片段在其它Ⅱ型金属蛋白酶中并没有发现 .因此推断 ,TJM 2和agkistin可能属于一类新型的Ⅱ型蛇毒金属蛋白酶 . 展开更多
关键词 菜花烙铁头蛇 蛇毒金属蛋白酶 克隆 序列分析
在线阅读 下载PDF
烙铁头蛇毒中一个具有抗补体活性金属蛋白酶的纯化和性质研究 被引量:5
5
作者 闫银萍 孙黔云 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1220-1225,共6页
目的从烙铁头蛇毒中筛选分离抗补体活性蛋白,并对其部分生物学活性开展研究,以了解其在蛇伤中的病理生理作用和潜在的应用价值。方法采用蛋白层析技术分离纯化抗补体活性蛋白,测定其分子量、等电点、抗补体作用、多种蛋白水解酶活性、... 目的从烙铁头蛇毒中筛选分离抗补体活性蛋白,并对其部分生物学活性开展研究,以了解其在蛇伤中的病理生理作用和潜在的应用价值。方法采用蛋白层析技术分离纯化抗补体活性蛋白,测定其分子量、等电点、抗补体作用、多种蛋白水解酶活性、水肿活性及出血活性。结果从烙铁头蛇毒中分离纯化出一个抗补体活性蛋白TMAC-1,表观分子量约为25ku,等电点为9.0。TMAC-1能够抑制补体经典途径和替代途径的溶血,预孵条件下,其IC50分别为62、29mg·L-1;不预孵条件下,其IC50为263、246mg·L-1。TMAC-1能够裂解C3、C5,但裂解产物不能诱导内皮细胞P-selectin的表达。TMAC-1能依次降解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ链,该活性能被EDTA、1,10-phenanthroline、EGTA完全抑制,不受PMSF、SBTI的抑制。TMAC-1具有水肿活性和微弱的偶氮酪蛋白水解活性,没有精氨酸酯酶水解活性和皮下出血活性。结论 TMAC-1是一个非出血性的金属蛋白酶,它可通过酶切补体特定成分抑制补体激活。 展开更多
关键词 蛇毒 抗补体蛋白 蛇毒金属蛋白酶 烙铁头蛇 纤维蛋白原水解酶 炎症 蛇伤
在线阅读 下载PDF
皖南尖吻蝮蛇毒出血毒素Ⅰ氨基酸序列初步研究 被引量:2
6
作者 龚为民 朱中良 +3 位作者 牛立文 腾脉坤 王淳 沈为群 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期366-368,共3页
中国皖南尖吻蝮蛇(Agkistrodonacutus)毒出血毒素I(AaHI)氨基酸序列得到初步测定.AaHI的N端13个残基序列为STEFQRYMEIVIV.序列比较表明AaHI与其它种属来源的低分子量(20~24... 中国皖南尖吻蝮蛇(Agkistrodonacutus)毒出血毒素I(AaHI)氨基酸序列得到初步测定.AaHI的N端13个残基序列为STEFQRYMEIVIV.序列比较表明AaHI与其它种属来源的低分子量(20~24kD)蛇毒出血毒素和金属蛋白酶有较高的同源性. 展开更多
关键词 出血毒素 蛇毒金属蛋白酶 氨基酸序列 尖吻蝮蛇
在线阅读 下载PDF
尖吻蝮蛇AaHⅣ催化结构域和非催化结构域免疫保护性比较
7
作者 张雷 曹宇亮 刘明华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1055-1058,共4页
目的表达尖吻蝮蛇出血性P-Ⅲb型金属蛋白酶AaHⅣ催化结构域和非催化结构域,并鉴定其免疫小鼠后抗体的中和保护性。方法采用基因合成的方法合成尖吻蝮蛇P-Ⅲ6型金属蛋白酶AaHⅣ的催化结构域和非催化结构域cDNA,分别重组在质粒pET28a(+)上... 目的表达尖吻蝮蛇出血性P-Ⅲb型金属蛋白酶AaHⅣ催化结构域和非催化结构域,并鉴定其免疫小鼠后抗体的中和保护性。方法采用基因合成的方法合成尖吻蝮蛇P-Ⅲ6型金属蛋白酶AaHⅣ的催化结构域和非催化结构域cDNA,分别重组在质粒pET28a(+)上,转入BL21(DE3)中表达,产物经亲和层析纯化。昆明小鼠随机分为催化结构域蛋白免疫组、非催化结构域蛋白免疫组、AaHⅣ免疫组、PBS免疫组,每组6只[4周龄,体质量(20±2)g,雌雄各半],3次免疫后分离血清,与AaHⅣ体外孵育后行出血中和实验。结果 ELISA显示重组表达的AaHⅣ催化结构域和非催化结构域均具有免疫原性。出血中和实验显示:催化结构域免疫组和非催化结构域免疫组均较PBS免疫组显著减少出血面积(P<0.05);AaHⅣ免疫组与催化结构域免疫组之间无统计学差异(P>0.05),而与非催化结构域免疫组之间存在统计学差异(P<0.05)。结论 AaHⅣ催化结构域免疫小鼠产生的抗体在中和AaHⅣ出血毒性方面效果更为显著。 展开更多
关键词 尖吻蝮蛇 蛇毒金属蛋白酶 SVMPs 催化结构域 非催化结构域
在线阅读 下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部