蛇毒类凝血酶的纯化及鉴定 被引量：5

1

作者 段涛 程波 +1 位作者 王旻 孔毅 《化学与生物工程》 CAS 2006年第7期40-41,62,共3页

采用Source 30Q及Phenyl sepharose HP柱层析进行纯化,并用体外MTT实验研究了蛇毒类凝血酶抗肿瘤转移作用。结果得到SDS-PAGE条带均一、分子量为27.6 ku的类凝血酶I11-H2,体外MTT实验证明,I11-H2具有较理想的抗肿瘤转移作用。

关键词 蛇毒类凝血酶 纯化 抗肿瘤转移

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蛇毒类凝血酶基因在大肠埃希菌中诱导表达及影响因素 被引量：1

2

作者 闫强 何桂梅 +2 位作者 陆一鸣 陈明勇 孙树汉 《动物医学进展》 CSCD 2006年第8期77-79,共3页

将蛇毒类凝血酶基因(TLE)亚克隆到原核表达载体pMAL-p2X上,对重组表达质粒鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21进行诱导表达;同时采用不同的OD值、诱导时间I、PTG浓度和诱导温度对尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶基因重组表达质粒pMAL-p2X进行了条件优... 将蛇毒类凝血酶基因(TLE)亚克隆到原核表达载体pMAL-p2X上,对重组表达质粒鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21进行诱导表达;同时采用不同的OD值、诱导时间I、PTG浓度和诱导温度对尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶基因重组表达质粒pMAL-p2X进行了条件优化。研究发现,不同的诱导时间、IPTG诱导浓度和诱导温度与融合蛋白表达量有很大关系。SDS-PAGE结果显示,当OD值为0.5,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导温度为37℃时,诱导3 h后蛋白表达量最高,超出此范围可使表达量显著减少。在优化诱导条件后,融合蛋白的表达量可达全菌总蛋白量的66%。 展开更多

关键词 蛇毒类凝血酶基因 原核表达 影响因素

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注射用蛇毒类凝血酶的Ⅰ期临床耐受性试验研究

3

作者 徐勤娥 李建勇 +4 位作者 陆化 刘彭 蒋秀梅 赵俊 于浩 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期706-707,736,共3页

关键词 蛇毒类凝血酶 出血时间 耐受性试验

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一种来自于尖吻蝮蛇毒的新类凝血酶对血液止血机制的研究 被引量：2

4

作者 周振香 李红枝 +2 位作者 张旭东 张娟辉 唐松山 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2015年第12期1367-1372,共6页

目的：研究尖吻蝮蛇蛇毒止血酶Agacutase的止血机制。方法：水蛭素、肝素、苯甲基磺酰氟（PMSF）、钙离子或尿素等分别与Agacutase酶混合,在体外研究它们对酶凝结活性的影响。新西兰白兔静脉注射Agacutase,观察新西兰白兔的血凝和纤溶... 目的：研究尖吻蝮蛇蛇毒止血酶Agacutase的止血机制。方法：水蛭素、肝素、苯甲基磺酰氟（PMSF）、钙离子或尿素等分别与Agacutase酶混合,在体外研究它们对酶凝结活性的影响。新西兰白兔静脉注射Agacutase,观察新西兰白兔的血凝和纤溶指标。结果：水蛭素和肝素对该酶没有影响,PMSF和尿素明显抑制酶的凝结活性,而钙离子激活酶凝结活性。静脉注射Agacutase 0.03-0.12 U/kg剂量后,各组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短,给药后2 h药效达高峰,药效持续24 h。与给药前比较,各组兔血纤维蛋白原含量和血黏度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致,对活化部分凝血活酶时间（APTT）无影响。结论：Agacutase在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白,但不激活凝血因子II和XIII,在伤口部位加速止血。在正常的血管内,不会造成血栓形成。所有实验结果显示,Agacutase是一个有效的潜在止血剂。 展开更多

关键词 尖吻蝮蛇毒 蛇毒类凝血酶 止血剂 Agacutase

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基于特征肽的超高效液相色谱-串联质谱法检测矛头蝮蛇蛇毒种属来源及类凝血酶含量 被引量：8

5

作者 咸瑞卿 杭宝建 +4 位作者 巩丽萍 王聪聪 张迅杰 彭丽 石峰 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期810-816,共7页

蛇毒血凝酶类药物是以蝮蛇蛇毒为原料制备的止血药,主要活性成分为蛇毒类凝血酶(svTLEs)。不同蛇种来源的svTLEs结构不同,止血机制不同,药理作用也存在差异,因此准确鉴别蛇毒种属来源和svTLEs含量对于保障该类产品的质量至关重要。研究... 蛇毒血凝酶类药物是以蝮蛇蛇毒为原料制备的止血药,主要活性成分为蛇毒类凝血酶(svTLEs)。不同蛇种来源的svTLEs结构不同,止血机制不同,药理作用也存在差异,因此准确鉴别蛇毒种属来源和svTLEs含量对于保障该类产品的质量至关重要。研究基于蛋白质组学技术,筛选出了具有种属特异性的矛头蝮蛇svTLE特征肽,并建立了基于特征肽的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测矛头蝮蛇蛇毒种属来源及类凝血酶含量的方法。采用胰蛋白酶对纯化的矛头蝮蛇svTLE进行酶解,利用纳升液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(Nano LC-Q-Exactive-MS)和Proteome Discoverer^(2).2软件分别进行多肽的检测和鉴定,通过BLAST搜索与Uniprot数据库对比分析,筛选出具有种属特异性的矛头蝮蛇svTLEs特征肽“EAYNGLPAK”。针对该特征肽对酶解温度、酶解时间和酶用量等样品前处理方法进行了优化,利用超高效液相色谱-串联质谱,以m/z 481.9>315.2和481.9>485.2作为检测离子对,采用ESI+模式进行了多反应监测(MRM)定性定量分析。结果显示,特征肽在2.5~30 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)大于0.9996,多水平加标回收率范围为95.5%~101.9%,各水平平行测定结果的相对标准偏差(RSD)为1.1%~3.2%,完全能够满足实际样品检测需求。方法简便快捷,灵敏度高,专属性强,可用于矛头蝮蛇蛇毒种属鉴别及svTLE含量测定,从源头保证血凝酶类产品的质量,并可为其他蛇毒类产品的质量控制提供参考。 展开更多

关键词 超高效液相色谱-串联质谱 特征肽 蛇毒类凝血酶 矛头蝮蛇 蛇毒

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蛇毒类凝血酶的研究进展 被引量：1

6

作者 胡慧珍 董淑清 《当代畜禽养殖业》 2009年第9期12-16,共5页

蛇毒是从毒蛇的毒腺中分泌出来的一种毒液，属于生物毒素（biotoxin），含有多种生物活性成分．其中大部分是酶和多肽。丝氨酸蛋白酶是蛇毒中的重要组成成分，特别是蝰亚科（Crotalinae）和腹亚科（Viperinae）蛇毒，含有大量丝氨酸蛋... 蛇毒是从毒蛇的毒腺中分泌出来的一种毒液，属于生物毒素（biotoxin），含有多种生物活性成分．其中大部分是酶和多肽。丝氨酸蛋白酶是蛇毒中的重要组成成分，特别是蝰亚科（Crotalinae）和腹亚科（Viperinae）蛇毒，含有大量丝氨酸蛋白酶。这是自然界长期进化过程中演化出的一类。既和哺乳动物蛋白酶相似，又存在相当程度结构与功能分化的生物大分子，通过激活、灭活和转变机体中的凝血因子而广泛作用于血液凝固系统同。 展开更多

关键词 毒蛇 蛇毒类凝血酶 生物毒素 丝氨酸蛋白酶

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尖吻蝮蛇类凝血酶基因的克隆及生物信息学分析 被引量：4

7

作者 张艳宇 马平 +5 位作者 陆一鸣 吕丽萍 姜升阳 周锡鹏 孙树汉 许金波 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期542-547,共6页

为了获得蛇毒类凝血酶基因,本研究根据不同蛇毒类凝血酶cDNA5'和3'保守性序列设计了引物;通过RT-PCR从尖吻蝮蛇毒腺总RNA中扩增到1个808bp特异性片段,将该cDNA重组到pMD18-T载体中,利用生物信息学的方法对测序结果进行了分析。... 为了获得蛇毒类凝血酶基因,本研究根据不同蛇毒类凝血酶cDNA5'和3'保守性序列设计了引物;通过RT-PCR从尖吻蝮蛇毒腺总RNA中扩增到1个808bp特异性片段,将该cDNA重组到pMD18-T载体中,利用生物信息学的方法对测序结果进行了分析。结果表明:该特异性片段中有一个783bp的开放阅读框架,其编码蛋白质序列与蛇的类凝血酶序列有98.5%的同源性,也具有蛇毒类凝血酶的典型特征。结论:本实验获得了一个新的尖吻蝮蛇类凝血酶基因。 展开更多

关键词 尖吻蝮蛇 蛇毒类凝血酶 RT-PCR 生物信息学

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用苯眯分离纯化类凝血酶

8

作者 龙姝 黄永华 杨青 《长沙电力学院学报（自然科学版）》 2004年第1期71-73,共3页

用亲和层析分离纯化类凝血酶是一种迅速、高效的方法.根据酶与其竞争性抑制剂之间存在特异性相互作用的原理,本文制备了一种以类凝血酶竞争性抑制剂Benzamidine作为专一性配基的亲和吸附剂用于分离纯化类凝血酶.结果表明,用该吸附剂纯... 用亲和层析分离纯化类凝血酶是一种迅速、高效的方法.根据酶与其竞争性抑制剂之间存在特异性相互作用的原理,本文制备了一种以类凝血酶竞争性抑制剂Benzamidine作为专一性配基的亲和吸附剂用于分离纯化类凝血酶.结果表明,用该吸附剂纯化重组类凝血酶能达SDS-PAGE电泳纯. 展开更多

关键词 亲和吸附剂 配基 苯眯啶 纯化 亲和层析 心血管疾病 蛇毒类凝血酶 苯眯 分离

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超声造影引导下局部注射止血剂治疗脾外伤出血的实验研究 被引量：5

9

作者 李文秀 唐杰 +4 位作者 吕发勤 张惠琴 张立海 罗渝昆 李俊来 《中国医学影像学杂志》 CSCD 2008年第5期328-331,共4页

目的:研究超声造影(CEUS)引导局部注射止血剂治疗脾外伤出血的止血效果。材料和方法:犬脾脏制作大小相同的病灶,随机分四组行止血治疗。Ⅰ组为蛇毒凝血酶组,Ⅱ组为可吸收性氰基丙烯酸酯组,Ⅲ组为联合治疗组,Ⅳ组为对照组。记录治疗后30... 目的:研究超声造影(CEUS)引导局部注射止血剂治疗脾外伤出血的止血效果。材料和方法:犬脾脏制作大小相同的病灶,随机分四组行止血治疗。Ⅰ组为蛇毒凝血酶组,Ⅱ组为可吸收性氰基丙烯酸酯组,Ⅲ组为联合治疗组,Ⅳ组为对照组。记录治疗后30min内的出血量,观察病灶局部变化,取组织行病理检查。结果:对照组出血量明显多于治疗组。30min后Ⅰ组所有病灶表面均可见血凝块形成,但病灶仍有出血;Ⅱ组可见胶膜形成,3处病灶胶膜旁渗血;Ⅲ组止血完全;Ⅳ组未能止血。结论:超声造影引导下止血剂联合治疗脾外伤出血,效果可靠,明显优于单独止血剂治疗效果。 展开更多

关键词 超声造影 脾脏 外伤 蛇毒凝血酶 可吸收性氰基丙烯酸酯

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去纤酶对血管损伤后内膜sis基因转录及PDGF-BB表达的影响 被引量：5

10

作者 向定成 黄大显 盖鲁粤 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期21-22,共2页

为探讨ｓｉｓ基因及其表达产物在血管损伤后内膜增生反应中的作用及去纤酶对该癌基因转录和表达的影响，在１９只犬冠状动脉内植入过大钽丝支架。随机分为去纤酶组（ｎ＝１０）及对照组（ｎ＝９），分别用去纤酶及肝素治疗。２８天后取... 为探讨ｓｉｓ基因及其表达产物在血管损伤后内膜增生反应中的作用及去纤酶对该癌基因转录和表达的影响，在１９只犬冠状动脉内植入过大钽丝支架。随机分为去纤酶组（ｎ＝１０）及对照组（ｎ＝９），分别用去纤酶及肝素治疗。２８天后取材作血小板源生长因子－ＢＢ（ＰＤＧＦ－ＢＢ）免疫组化及ｓｉｓ基因ｍＲＮＡ原位杂交，用图像分析系统测定染色密度指数。结果支架植入后２８天，新生内膜中可检测到ｓｉｓ基因的转录和表达。去纤酶组原位杂交及免疫组化染色密度均低于对照组（Ｐ＜０．０５）。表明ｓｉｓ基因及ＰＤＧＦ－ＢＢ在血管损伤后内膜增生晚期仍起着一定的作用，去纤酶可能通过影响该癌基因的转录及表达而抑制内膜增生反应。 展开更多

关键词 癌基因 蛇毒凝血酶 冠心病

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巴曲酶对狗心脏缺血/再灌注损伤中血栓素A_2水平的影响 被引量：2

11

作者 郑直 张勇刚 +3 位作者 符民桂 夏春芳 唐朝枢 刘乃奎 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期25-28,共4页

目的 :研究巴曲酶 (BAT)对狗心脏缺血 /再灌注 (I/R)损伤过程中血栓素A2 (TXA2 )水平的影响。方法 :结扎狗左冠状动脉前降支 3 0min ,恢复血流 90min ,造成I/R模型 ,于缺血前或缺血后 15min静注BAT( 1U/kg) ,测定血浆、心肌TXB2 浓度以... 目的 :研究巴曲酶 (BAT)对狗心脏缺血 /再灌注 (I/R)损伤过程中血栓素A2 (TXA2 )水平的影响。方法 :结扎狗左冠状动脉前降支 3 0min ,恢复血流 90min ,造成I/R模型 ,于缺血前或缺血后 15min静注BAT( 1U/kg) ,测定血浆、心肌TXB2 浓度以及血浆磷酸肌酸激酶 (CK)和乳酸脱氢酶 (LDH)活性 ,并检测心脏功能 ,观察病理学变化。结果 :I/R组心肌组织及血浆TXB2 水平明显升高 ,血浆CK及LDH活性明显降低 ,心功能受损。病理学发现心肌纤维水肿、排列紊乱、线粒体水肿、嵴明显断裂、细胞核皱缩。给予BAT后 ,动物死亡率、再灌期血浆及心肌TXB2 水平、血浆CK及LDH活性以及LVEDP明显低于I/R组 ,而±dp/dtmax明显高于I/R组 ,病理学检查无明显损伤。结论 :BAT能够降低血浆及心肌TXA2 水平减轻心肌组织I/R损伤。 展开更多

关键词 蛇毒凝血酶 局部缺血 再灌注损伤 心脏

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巴曲酶降低血浆及心肌血管紧张素Ⅱ水平减轻心肌组织缺血/再灌注损伤

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作者 张勇刚 郑直 +7 位作者 符民桂 夏春芳 姜志胜 欧和生 王晓红 柴三葆 唐朝枢 刘乃奎 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期335-338,共4页

目的 :研究巴曲酶对狗心缺血 /再灌注 (ischemia/reperfusion ,I/R)损伤过程中血管紧张素Ⅱ (angiotensinⅡ ,AngⅡ )水平的影响及其抗损伤机制。方法 :将狗左冠状动脉前降支结扎 30min ,恢复血流 90min ,造成I/R模型 ,分别于缺血前或... 目的 :研究巴曲酶对狗心缺血 /再灌注 (ischemia/reperfusion ,I/R)损伤过程中血管紧张素Ⅱ (angiotensinⅡ ,AngⅡ )水平的影响及其抗损伤机制。方法 :将狗左冠状动脉前降支结扎 30min ,恢复血流 90min ,造成I/R模型 ,分别于缺血前或缺血后 15min静注巴曲酶 (1u·kg-1) ,测定血浆、心肌AngⅡ浓度以及肌酸磷酸激酶 (creatinephosphokinase,CK)和乳酸脱氢酶 (lacatedehydrogenase ,LDH)活性及心功能。 结果 :I/R组心肌组织及血浆AngⅡ水平明显升高 ,心肌组织明显损伤 ,给予巴曲酶 ,可显著降低再灌期心肌与血浆AngⅡ水平及血浆CK、LDH活性 ,增加左心室内压最大变化速率 ,降低左室舒张末压 ,减轻心肌组织损伤 ,降低动物死亡率。结论 :巴曲酶能够降低血浆及组织AngⅡ水平 ,减轻心肌组织I/R损伤。 展开更多

关键词 巴曲酶 心肌缺血 再灌注损伤 药物疗法 血管紧张素Ⅱ 蛇毒凝血酶 药理学

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兆科蝮蛇抗栓酶治疗急性脑梗塞的疗效观察

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作者 钱传忠 林菊香 +4 位作者 强丽娟 杨杞华 恽文伟 梅今 高萍 《安徽医科大学学报》 CAS 1997年第4期415-417,共3页

兆科蝮蛇抗栓酶治疗急性脑梗塞的疗效观察钱传忠林菊香强丽娟杨杞华恽文伟梅今高萍作者单位：江苏省常州市第二人民医院神经内科２１３００３我院于１９９５年６月～１９９６年５月期间，采用兆科蝮蛇抗栓酶治疗动脉硬化性脑梗塞，与尿... 兆科蝮蛇抗栓酶治疗急性脑梗塞的疗效观察钱传忠林菊香强丽娟杨杞华恽文伟梅今高萍作者单位：江苏省常州市第二人民医院神经内科２１３００３我院于１９９５年６月～１９９６年５月期间，采用兆科蝮蛇抗栓酶治疗动脉硬化性脑梗塞，与尿激酶作对照进行疗效观察，各３０例。... 展开更多

关键词 急性 脑梗塞 药物疗法 蛇毒凝血酶 蝮蛇抗栓酶

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