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虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ突变体A1Y-HWTX-Ⅰ的固相合成和生物学活性测定
被引量：
17
1
作者
王贤纯
梁宋平
+1 位作者
罗泽民
public.cs.hn.cn
《中国生物化学与分子生物学报》
CSCD
2000年第3期357-362,共6页
用芴甲氧羰基 (Fmoc)固相多肽合成的方法在自制自动蛋白质化学工作站上合成了用酪氨酸 (Y)替代虎纹捕鸟蛛毒素 - (HWTX- )第一位丙氨酸 (A1 )的突变体 A1 Y- HWTX- .合成的突变体用 Edman降解和电喷雾质谱法进行鉴定 .活性分析结果证...
用芴甲氧羰基 (Fmoc)固相多肽合成的方法在自制自动蛋白质化学工作站上合成了用酪氨酸 (Y)替代虎纹捕鸟蛛毒素 - (HWTX- )第一位丙氨酸 (A1 )的突变体 A1 Y- HWTX- .合成的突变体用 Edman降解和电喷雾质谱法进行鉴定 .活性分析结果证明 ,合成的 A1 Y- HWTX- 在含有谷胱甘肽的缓冲体系中氧化折叠后显示出与天然 HWTX- 完全相同的生物学活性 ,提示 Y替代 HWTX- 的 A1后并不明显影响 HWTX- 的活性部位和空间构象 ;A1与 HWTX- 生物学活性无关 .此外 ,将 Y引入 HWTX- 分子有助于利用碘标记方法研究 HWTX-
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关键词
虎纹捕鸟蛛毒素-ⅰ
突变体
固相合成
生物活性
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职称材料
虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ天然突变体的分离纯化与鉴定
被引量：
1
2
作者
何小珍
胡卫军
+2 位作者
曹税
王贤纯
梁宋平
《湖南师范大学自然科学学报》
CAS
北大核心
2005年第3期76-79,共4页
通过离子交换及反相HPLC,从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离得到一种虎纹毒素-Ⅰ天然突变体,MALDI-TOF质谱仪分析表明该多肽天然突变体分子量为3 636 Da.Edman测序结合串联质谱和氨基酸组成分析鉴定出该天然突变体的序列为H2N-ACKGV FDACT PGKNE C...
通过离子交换及反相HPLC,从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离得到一种虎纹毒素-Ⅰ天然突变体,MALDI-TOF质谱仪分析表明该多肽天然突变体分子量为3 636 Da.Edman测序结合串联质谱和氨基酸组成分析鉴定出该天然突变体的序列为H2N-ACKGV FDACT PGKNE CCPNR VCSDK HKWCK WQ-COOH.其中6个Cys形成3对二硫键.小鼠脑室注射实验表明,该天然突变体能使小鼠致死,但不能阻断小鼠膈神经-膈肌标本的神经肌肉接头传递.本研究结果表明,K32残基对于HWTX-Ⅰ的生物学活性有关键性作用.
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关键词
天然突变体
虎纹捕鸟蛛毒素-ⅰ
虎
纹
捕
鸟
蛛
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职称材料
虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ cDNA克隆及序列
3
作者
李敏
周政
梁宋平
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第1期51-55,共5页
从中国珍稀毒蛛种虎纹捕鸟蛛 (Selenocosmia huwena)毒腺中分离纯化的虎纹捕鸟蛛毒素 - (Huwentoxin ,HWTX- ) ,其一级结构、二级结构和溶液构象均已阐明 ,生理功能实验已证实 HWTX- 是一种作用于突触前膜的神经毒素和高阈值钙通道抑...
从中国珍稀毒蛛种虎纹捕鸟蛛 (Selenocosmia huwena)毒腺中分离纯化的虎纹捕鸟蛛毒素 - (Huwentoxin ,HWTX- ) ,其一级结构、二级结构和溶液构象均已阐明 ,生理功能实验已证实 HWTX- 是一种作用于突触前膜的神经毒素和高阈值钙通道抑制剂 .为深入开展对 HWTX- 的应用研究 ,根据 HWTX- 多肽氨基酸序列 ,设计其 N-端、C-端和中间段 3组简并引物 (引物 、引物 和引物 ) .从虎纹捕鸟蛛毒腺提取制备 m RNA,逆转录合成 c DNA.以引物 和引物 为引物 ,采用 PCR方法对虎纹捕鸟蛛毒腺总 c DNA进行简并引物扩增 ,得到两条相对特异性的 DNA片段 ,产物直接与 PCR克隆载体 p UC- T连接 .重组子经原引物再次 PCR扩增和同位素标记引物 进行 Southern分子杂交鉴定 .对 4个重组子测序结果表明 ,有 1个重组子所对应的氨基酸顺序与 HWTX- 一致 ,Gen Bank数据检索说明 HWTX- c DNA编码序列确实是一个从未报道的序列 .本研究结果为 HWTX- 在真核细胞表达 ,大量获取蜘蛛毒素组分奠定了基础 .
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关键词
蜘
蛛
虎纹捕鸟蛛毒素-ⅰ
CDNA序列
克隆
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职称材料
题名
虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ突变体A1Y-HWTX-Ⅰ的固相合成和生物学活性测定
被引量：
17
1
作者
王贤纯
梁宋平
罗泽民
public.cs.hn.cn
机构
湖南师范大学生命科学学院
湖南农业大学生物技术系
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CSCD
2000年第3期357-362,共6页
基金
国家 8 6 3高技术发展计划资助项目 !(1 0 3 - 1 3 - 0 1 - 0 6 )
文摘
用芴甲氧羰基 (Fmoc)固相多肽合成的方法在自制自动蛋白质化学工作站上合成了用酪氨酸 (Y)替代虎纹捕鸟蛛毒素 - (HWTX- )第一位丙氨酸 (A1 )的突变体 A1 Y- HWTX- .合成的突变体用 Edman降解和电喷雾质谱法进行鉴定 .活性分析结果证明 ,合成的 A1 Y- HWTX- 在含有谷胱甘肽的缓冲体系中氧化折叠后显示出与天然 HWTX- 完全相同的生物学活性 ,提示 Y替代 HWTX- 的 A1后并不明显影响 HWTX- 的活性部位和空间构象 ;A1与 HWTX- 生物学活性无关 .此外 ,将 Y引入 HWTX- 分子有助于利用碘标记方法研究 HWTX-
关键词
虎纹捕鸟蛛毒素-ⅰ
突变体
固相合成
生物活性
Keywords
Huwentoxin
ⅰ
Mutant
Solid phase peptide synthesis
Spider
分类号
TQ93 [化学工程]
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职称材料
题名
虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ天然突变体的分离纯化与鉴定
被引量：
1
2
作者
何小珍
胡卫军
曹税
王贤纯
梁宋平
机构
湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室
出处
《湖南师范大学自然科学学报》
CAS
北大核心
2005年第3期76-79,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30370260)
文摘
通过离子交换及反相HPLC,从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离得到一种虎纹毒素-Ⅰ天然突变体,MALDI-TOF质谱仪分析表明该多肽天然突变体分子量为3 636 Da.Edman测序结合串联质谱和氨基酸组成分析鉴定出该天然突变体的序列为H2N-ACKGV FDACT PGKNE CCPNR VCSDK HKWCK WQ-COOH.其中6个Cys形成3对二硫键.小鼠脑室注射实验表明,该天然突变体能使小鼠致死,但不能阻断小鼠膈神经-膈肌标本的神经肌肉接头传递.本研究结果表明,K32残基对于HWTX-Ⅰ的生物学活性有关键性作用.
关键词
天然突变体
虎纹捕鸟蛛毒素-ⅰ
虎
纹
捕
鸟
蛛
Keywords
natural mutant
HWTX
-
ⅰ
Omithoctomus huwena
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ cDNA克隆及序列
3
作者
李敏
周政
梁宋平
机构
湖南师范大学生命科学学院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第1期51-55,共5页
基金
国家自然科学基金!资助项目 (No.396 70 392 )
文摘
从中国珍稀毒蛛种虎纹捕鸟蛛 (Selenocosmia huwena)毒腺中分离纯化的虎纹捕鸟蛛毒素 - (Huwentoxin ,HWTX- ) ,其一级结构、二级结构和溶液构象均已阐明 ,生理功能实验已证实 HWTX- 是一种作用于突触前膜的神经毒素和高阈值钙通道抑制剂 .为深入开展对 HWTX- 的应用研究 ,根据 HWTX- 多肽氨基酸序列 ,设计其 N-端、C-端和中间段 3组简并引物 (引物 、引物 和引物 ) .从虎纹捕鸟蛛毒腺提取制备 m RNA,逆转录合成 c DNA.以引物 和引物 为引物 ,采用 PCR方法对虎纹捕鸟蛛毒腺总 c DNA进行简并引物扩增 ,得到两条相对特异性的 DNA片段 ,产物直接与 PCR克隆载体 p UC- T连接 .重组子经原引物再次 PCR扩增和同位素标记引物 进行 Southern分子杂交鉴定 .对 4个重组子测序结果表明 ,有 1个重组子所对应的氨基酸顺序与 HWTX- 一致 ,Gen Bank数据检索说明 HWTX- c DNA编码序列确实是一个从未报道的序列 .本研究结果为 HWTX- 在真核细胞表达 ,大量获取蜘蛛毒素组分奠定了基础 .
关键词
蜘
蛛
虎纹捕鸟蛛毒素-ⅰ
CDNA序列
克隆
Keywords
Spider,Huwentoxin\|
ⅰ
,cDNA sequence
分类号
Q966 [生物学]
R996.3 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ突变体A1Y-HWTX-Ⅰ的固相合成和生物学活性测定
王贤纯
梁宋平
罗泽民
public.cs.hn.cn
《中国生物化学与分子生物学报》
CSCD
2000
17
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ天然突变体的分离纯化与鉴定
何小珍
胡卫军
曹税
王贤纯
梁宋平
《湖南师范大学自然科学学报》
CAS
北大核心
2005
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ cDNA克隆及序列
李敏
周政
梁宋平
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001
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职称材料
已选择
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