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家蚕葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶家族基因BmGMCβ2的克隆及序列与表达分析
被引量：
1
1
作者
杨文娟
刘博
+4 位作者
肖丽蓉
冯丹丹
周良宵
沈以红
张泽
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期634-642,共9页
葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶(glucose-methanol-choline oxidoreductases,GMC)家族是昆虫体内一大类以黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅酶的氧化还原酶类,家蚕基因组中含有43个GMC家族基因。以家蚕5龄幼虫cDNA为模板克隆到一个家蚕GMC家族基...
葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶(glucose-methanol-choline oxidoreductases,GMC)家族是昆虫体内一大类以黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅酶的氧化还原酶类,家蚕基因组中含有43个GMC家族基因。以家蚕5龄幼虫cDNA为模板克隆到一个家蚕GMC家族基因,命名为BmGMCβ2(GenBank登录号:JQ965926)。该基因cDNA全长1 875 bp,编码624个氨基酸,预测蛋白质分子质量为69.3 kD,pI为6.21,定位于家蚕16号染色体的nscaf3058上,编码蛋白质含GMC家族共有的ADP-bindingβ-α-β折叠结构域。系统发育分析表明该基因是家蚕GMC家族β亚家族基因成员。RT-PCR检测家蚕不同发育时期和5龄第3天幼虫不同组织中BmGMCβ2基因mRNA转录水平,以5龄盛食期最高,并且主要在表皮、脂肪体和气管中转录表达;Westernblotting分析BmGMCβ2蛋白主要在5龄第3天幼虫的脂肪体中表达。将BmGMCβ2克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,转化E.coli BL21表达菌株,IPTG诱导表达BmGMCβ2融合蛋白,通过His-亲和层析得到纯化的融合蛋白并制备多克隆抗体,为后续研究该蛋白在家蚕生长发育过程中的功能奠定了基础。
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关键词
家蚕
葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶家族基因gmcβ2
基因
克隆
序列特征
表达谱
原核表达
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职称材料
家蚕驯化过程中受到选择的2个GMC氧化还原酶基因的序列变异分析
2
作者
程道军
唐林
+2 位作者
孟勐
王永虎
夏庆友
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期210-215,共6页
葡萄糖-甲醇-胆碱(glucose-methanol-choline,GMC)氧化还原酶家族在生物体内葡萄糖、胆碱和甾醇等物质的代谢过程中发挥重要作用。比较家蚕和野桑蚕的遗传变异图谱数据发现,GMC氧化还原酶基因家族成员GMC1(BGIBMGA000068)和GMC2(BGIBMGA...
葡萄糖-甲醇-胆碱(glucose-methanol-choline,GMC)氧化还原酶家族在生物体内葡萄糖、胆碱和甾醇等物质的代谢过程中发挥重要作用。比较家蚕和野桑蚕的遗传变异图谱数据发现,GMC氧化还原酶基因家族成员GMC1(BGIBMGA000068)和GMC2(BGIBMGA000158)在家蚕驯化过程中受到显著的选择压力,其完整基因序列发生大量单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)突变,部分SNP突变位于外显子区并导致所编码蛋白质的氨基酸发生替换。基于全基因组芯片数据的表达谱分析显示,GMC1基因主要在家蚕5龄第3天幼虫的中肠和马氏管中表达,GMC2基因主要在丝腺和头部高量表达,暗示GMC1和GMC2在家蚕驯化过程中发生的序列变异可能与其在家蚕体内物质代谢及丝腺发育或丝蛋白合成等生物学过程中的功能有关。从家蚕丝腺组织中克隆获得家蚕GMC2基因的全长cDNA序列并进行原核表达,目的蛋白质以包涵体的形式存在。
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关键词
家蚕
驯化
葡萄糖
-
甲醇
-
胆碱
氧化
还原酶
序列变异
基因
表达
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职称材料
题名
家蚕葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶家族基因BmGMCβ2的克隆及序列与表达分析
被引量：
1
1
作者
杨文娟
刘博
肖丽蓉
冯丹丹
周良宵
沈以红
张泽
机构
西南大学蚕学与系统生物学研究所
重庆大学农学及生命科学研究院
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期634-642,共9页
基金
西南大学博士创新项目(No.Kb2009019)
文摘
葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶(glucose-methanol-choline oxidoreductases,GMC)家族是昆虫体内一大类以黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅酶的氧化还原酶类,家蚕基因组中含有43个GMC家族基因。以家蚕5龄幼虫cDNA为模板克隆到一个家蚕GMC家族基因,命名为BmGMCβ2(GenBank登录号:JQ965926)。该基因cDNA全长1 875 bp,编码624个氨基酸,预测蛋白质分子质量为69.3 kD,pI为6.21,定位于家蚕16号染色体的nscaf3058上,编码蛋白质含GMC家族共有的ADP-bindingβ-α-β折叠结构域。系统发育分析表明该基因是家蚕GMC家族β亚家族基因成员。RT-PCR检测家蚕不同发育时期和5龄第3天幼虫不同组织中BmGMCβ2基因mRNA转录水平,以5龄盛食期最高,并且主要在表皮、脂肪体和气管中转录表达;Westernblotting分析BmGMCβ2蛋白主要在5龄第3天幼虫的脂肪体中表达。将BmGMCβ2克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,转化E.coli BL21表达菌株,IPTG诱导表达BmGMCβ2融合蛋白,通过His-亲和层析得到纯化的融合蛋白并制备多克隆抗体,为后续研究该蛋白在家蚕生长发育过程中的功能奠定了基础。
关键词
家蚕
葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶家族基因gmcβ2
基因
克隆
序列特征
表达谱
原核表达
Keywords
Bombyx mori
Glucose
-
methanol
-
choline oxidoreductases family gene
gmcβ
2
Gene cloning
Sequencefeature
Expression profile
Prokaryotic expression
分类号
S881.2 [农业科学—特种经济动物饲养]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
家蚕驯化过程中受到选择的2个GMC氧化还原酶基因的序列变异分析
2
作者
程道军
唐林
孟勐
王永虎
夏庆友
机构
家蚕基因组生物学国家重点实验室
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期210-215,共6页
基金
国家自然科学基金项目(No.31172267)
重庆市自然科学基金项目(No.cstc2012jjA80023)
+1 种基金
国家重点基础研究发展计划"973"项目(No.2012CB114600)
国家高技术研究发展计划"863"项目(No.2011AA100306)
文摘
葡萄糖-甲醇-胆碱(glucose-methanol-choline,GMC)氧化还原酶家族在生物体内葡萄糖、胆碱和甾醇等物质的代谢过程中发挥重要作用。比较家蚕和野桑蚕的遗传变异图谱数据发现,GMC氧化还原酶基因家族成员GMC1(BGIBMGA000068)和GMC2(BGIBMGA000158)在家蚕驯化过程中受到显著的选择压力,其完整基因序列发生大量单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)突变,部分SNP突变位于外显子区并导致所编码蛋白质的氨基酸发生替换。基于全基因组芯片数据的表达谱分析显示,GMC1基因主要在家蚕5龄第3天幼虫的中肠和马氏管中表达,GMC2基因主要在丝腺和头部高量表达,暗示GMC1和GMC2在家蚕驯化过程中发生的序列变异可能与其在家蚕体内物质代谢及丝腺发育或丝蛋白合成等生物学过程中的功能有关。从家蚕丝腺组织中克隆获得家蚕GMC2基因的全长cDNA序列并进行原核表达,目的蛋白质以包涵体的形式存在。
关键词
家蚕
驯化
葡萄糖
-
甲醇
-
胆碱
氧化
还原酶
序列变异
基因
表达
Keywords
Bombyx mori
Domestication
gmc
oxi
-
doreductase
Sequence variation
Gene expression
分类号
S881.2 [农业科学—特种经济动物饲养]
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
家蚕葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶家族基因BmGMCβ2的克隆及序列与表达分析
杨文娟
刘博
肖丽蓉
冯丹丹
周良宵
沈以红
张泽
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
家蚕驯化过程中受到选择的2个GMC氧化还原酶基因的序列变异分析
程道军
唐林
孟勐
王永虎
夏庆友
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
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