金顶侧耳磷酸葡萄糖变位酶(PGM)基因克隆与生物信息学分析

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作者 芮祥云 石吴倩 +4 位作者 唐浩 周松 李运涛 吕超田 李欢 《安徽农学通报》 2025年第15期108-113,共6页

为探究金顶侧耳磷酸葡萄糖变位酶(PGM)基因特点和结构,研究基于金顶侧耳基因组数据,通过RT-PCR技术对PGM基因进行克隆,并对其编码的蛋白质进行生物信息学分析,包括理化性质,亲疏水性、二、三级结构等。结果表明,金顶侧耳PGM基因序列全长... 为探究金顶侧耳磷酸葡萄糖变位酶(PGM)基因特点和结构,研究基于金顶侧耳基因组数据,通过RT-PCR技术对PGM基因进行克隆,并对其编码的蛋白质进行生物信息学分析,包括理化性质,亲疏水性、二、三级结构等。结果表明,金顶侧耳PGM基因序列全长为1797 bp,编码598个氨基酸,分子量为66.35 kDa;该蛋白等电点为5.98,亲水性总平均值为-0.278,不稳定指数为29.54,是一种酸性、亲水性、稳定蛋白;其无信号肽,无剪切位点,跨膜螺旋数为0,属于非分泌、非跨膜蛋白;其在氨基酸序列区域间存在保守结构域,属于PTZ00150基因家族,共有81个磷酸化位点,定位于细胞质中。其二级结构主要包含α-螺旋(43.14%),无规则卷曲(35.79%),延伸链(14.72%)和β-折叠(6.35%);三级结构主要是由α-螺旋和无规则卷曲组成,结构较为稳定。同源性及系统进化树结果显示,PcPGM与平菇、秀珍菇、真姬菇和玉蕈离褶伞的相似性分别为78.04%、79.70%、71.33%和67.50%,且与平菇和秀珍菇的亲缘关系最近,均属侧耳科。与PcPGM蛋白可能存在互作关系的蛋白质有6个,包括己糖激酶1(HXK1),葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPIC),α-葡聚糖磷酸化酶1(αGP1),αGP2,UTP-葡萄糖-1-磷酸尿苷酰转移酶1(UGP1)和UGP2,均为糖代谢相关酶类。本研究为深入探究金顶侧耳PGM基因的生物学功能及药用价值开发提供参考。 展开更多

关键词 金顶侧耳 磷酸葡萄糖变位酶 克隆 生物信息学

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茯苓多糖合成途径磷酸葡萄糖变位酶和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因鉴定 被引量：3

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作者 夏丽珍 李立志 +1 位作者 张晓俊 张燎原 《化学与生物工程》 CAS 北大核心 2024年第6期44-52,共9页

采用已报道的灵芝磷酸葡萄糖变位酶(PGM)和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(UGPP)基因序列对茯苓基因组进行搜索比对,获得茯苓WcPGM和WcUGPP候选基因序列;以茯苓的cDNA为模板,成功克隆获得WcPGM和WcUGPP基因;随后利用pPIC9K构建2个基因的表达载体... 采用已报道的灵芝磷酸葡萄糖变位酶(PGM)和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(UGPP)基因序列对茯苓基因组进行搜索比对,获得茯苓WcPGM和WcUGPP候选基因序列;以茯苓的cDNA为模板,成功克隆获得WcPGM和WcUGPP基因;随后利用pPIC9K构建2个基因的表达载体,并转化至毕赤酵母进行异源表达。序列分析表明WcPGM和WcUGPP基因全长分别为2021 bp和2144 bp,其中WcPGM基因含有5个外显子和4个内含子,编码564个氨基酸;WcUGPP基因含有11个外显子和10个内含子,编码502个氨基酸。氨基酸序列比对表明,WcPGM和WcUGPP与来源于绣球菌的ScPGM和ScUGPP的同源性分别为87%和91%。酶活测定表明,重组酶WcPGM可转化葡萄糖-1-磷酸(G1P)为葡萄糖-6-磷酸(G6P),酶活达1540 U·mL^(-1);重组酶WcUGPP可催化G1P和尿苷三磷酸(UTP)合成UDP-葡萄糖(UDP-Glc),酶活达660 U·mL^(-1),表明从茯苓中筛选到的2个酶WcPGM和WcUGPP具有PGM和UGPP活性。分子模拟表明,WcPGM在催化可逆反应过程中S114为磷酸供体和受体,R24和K379作为催化酸和碱实现底物的磷酸化和去磷酸化,而E366和S368可实现底物的2种朝向,保障了中间产物葡萄糖-1,6-二磷酸的翻转,确保了WcPGM的可逆反应;而WcUGPP活性中心的核苷酸结合Loop和糖结合Loop保障了底物的正确朝向,K390作为催化碱实现了底物UTP/G1P与UDP-Glc的可逆反应。该研究为茯苓多糖合成途径的解析和代谢工程提升茯苓多糖产量奠定了基础。 展开更多

关键词 茯苓 磷酸葡萄糖变位酶 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶 毕赤酵母 异源表达 催化机制 分子模拟

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小桐子磷酸葡萄糖变位酶cPGM与pPGM基因的克隆及原核表达分析 被引量：2

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作者 王海波 李芙蓉 +2 位作者 杨金翠 高永 郭俊云 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2021年第4期23-30,共8页

为了探究磷酸葡萄糖变位酶(PGM)在植物蔗糖与淀粉代谢中的重要作用,基于同源序列比对的方法,在小桐子基因组中鉴定到1个细胞质型PGM基因(命名为JccPGM)与1个叶绿体型PGM基因(命名为JcpPGM),利用qRT-PCR方法检测JccPGM与JcpPGM基因在小... 为了探究磷酸葡萄糖变位酶(PGM)在植物蔗糖与淀粉代谢中的重要作用,基于同源序列比对的方法,在小桐子基因组中鉴定到1个细胞质型PGM基因(命名为JccPGM)与1个叶绿体型PGM基因(命名为JcpPGM),利用qRT-PCR方法检测JccPGM与JcpPGM基因在小桐子不同器官与低温条件下的表达特性,同时,构建了pGEX-4T-1-JccPGM与pGEX-4T-1-JcpPGM原核表达载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了表达分析。结果表明:两者分别编码582,637 aa的蛋白质。聚类分析表明,小桐子pPGM在其N端包含叶绿体定位信号肽,而cPGM较pPGM多4段肽链序列-^(108)VGVDGS^(113)-、-^(183)SGPE^(186)-、-^(283)GKSNSE^(288)-、-^(470)SLGEVN^(475)-。qRT-PCR表达分析显示,小桐子cPGM与pPGM基因都在叶片中高表达,而在根与种子中表达量较低。通过BL21(DE3)诱导表达,分别得到90.7,97.0 ku的蛋白条带,与理论融合蛋白的分子量一致。综上所述,本研究为开展小桐子cPGM与pPGM基因表达蛋白的功能分析以及其在蔗糖与淀粉积累、逆境应答中的机制研究奠定了基础。 展开更多

关键词 小桐子 磷酸葡萄糖变位酶 基因克隆 原核表达

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微生物磷酸葡萄糖变位酶的研究进展 被引量：2

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作者 刘连 《安徽农业科学》 CAS 2013年第7期2821-2822,2825,共3页

从磷酸葡萄糖变位酶对碳代谢和细菌细胞形态的影响、细菌致病性、在细菌高效产氢中的作用、细菌脂多糖生物合成中的作用和维持酵母细胞内Ca2+平衡的作用等方面,介绍了微生物磷酸葡萄糖变位酶的研究进展。

关键词 磷酸葡萄糖变位酶 葡萄糖-1-磷酸 葡萄糖-6-磷酸

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酶法测定1-磷酸葡萄糖的含量

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作者 陆婷婷 吕浩 +1 位作者 魏秀丽 应汉杰 《南京工业大学学报（自然科学版）》 CAS 2005年第6期78-80,共3页

建立反应液中1-磷酸葡萄糖(G-1-P)的测定方法.分别在样品中加入PGluM(EC5.4.2.2)、G6P-DH(ECl.1.1.49)和氧化型辅酶Ⅱ(β-NADP),通过测定还原型辅酶Ⅱ(β-NADPH)吸光值的变化(△A)来确定样品中G-1-P的含量.G-1-P在0～400 mg/L范围内与△... 建立反应液中1-磷酸葡萄糖(G-1-P)的测定方法.分别在样品中加入PGluM(EC5.4.2.2)、G6P-DH(ECl.1.1.49)和氧化型辅酶Ⅱ(β-NADP),通过测定还原型辅酶Ⅱ(β-NADPH)吸光值的变化(△A)来确定样品中G-1-P的含量.G-1-P在0～400 mg/L范围内与△A呈线性关系,r2=0.999 8,其平均回收率为100.88%(RSD=0.52%).该法快速、灵敏、准确. 展开更多

关键词 1-磷酸葡萄糖 葡萄糖磷酸变位酶 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 酶法测定

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柚品种的等位酶变异

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作者 张太平 《世界热带农业信息》 2002年第1期21-21,共1页

研究柚的48个品种的等位酶变异。利用等位酶分析技术对柚的脂酶(EST)、6—磷酸葡萄糖异构酶(PDI)、6—磷酸葡萄糖变位酶(PGM)、莽草酸脱氢酶(SKD)、超氧化物歧化酶(SOD)

关键词 等位酶分析 柚品种 超氧化物歧化酶 有效等位基因数目 等位酶变异 遗传多样性 磷酸葡萄糖变位酶 磷酸葡萄糖异构酶 基因座 莽草酸脱氢酶

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中药天麻成分对灰树花胞外多糖合成及相关关键酶的影响 被引量：11

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作者 贺宗毅 吴天祥 徐晓宝 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第11期199-202,共4页

采用液体深层发酵方式研究中药天麻对灰树花胞外多糖合成的影响,并用苯酚-硫酸法测定总糖含量。结果表明:天麻添加量为7g/L时能显著促进灰树花胞外多糖产量的增加。此时灰树花产胞外多糖产量平均为3.91g/L,与对照组的3.72g/L相比提高了5... 采用液体深层发酵方式研究中药天麻对灰树花胞外多糖合成的影响,并用苯酚-硫酸法测定总糖含量。结果表明:天麻添加量为7g/L时能显著促进灰树花胞外多糖产量的增加。此时灰树花产胞外多糖产量平均为3.91g/L,与对照组的3.72g/L相比提高了5.1%。同时,对灰树花多糖合成代谢途径中的两个重要酶的酶活力进行测定。说明添加天麻成分发酵后,磷酸葡萄糖异构酶酶活力有所降低,磷酸葡萄糖变位酶酶活力则无明显变化。 展开更多

关键词 灰树花 天麻 胞外多糖 磷酸葡萄糖异构酶 磷酸葡萄糖变位酶

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灵芝细胞中异源表达透明颤菌血红蛋白基因提高胞外多糖的产量 被引量：5

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作者 刘柯 李焕军 +3 位作者 张德怀 岳同辉 李娜 徐军伟 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期35-41,共7页

在灵芝(Ganoderma lingzhi)中异源表达透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)基因,采用一氧化碳差异波谱分析的方法检测转基因菌株的生物活性,并对野生型菌株和工程菌株进行发酵,通过荧光定量PCR对灵芝多糖生物合成途径上的葡... 在灵芝(Ganoderma lingzhi)中异源表达透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)基因,采用一氧化碳差异波谱分析的方法检测转基因菌株的生物活性,并对野生型菌株和工程菌株进行发酵,通过荧光定量PCR对灵芝多糖生物合成途径上的葡萄糖磷酸变位酶(α-phosphoglucomutase,PGM)、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(uridinediphosphate glucose pyrophosphorylase,UGP)和β-1,3-葡聚糖合酶(β-1,3-glucan synthase,GLS)3个基因的转录水平进行分析。研究表明:透明颤菌血红蛋白基因(Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb)在灵芝中能够成功表达,并且具有生物活性;工程菌株中胞外多糖的最高产量达0.83g/L,比野生型菌株提高了88.6%;与野生型菌株相比,工程菌株中多糖生物合成途径上PGM、UGP和GLS基因的相对表达量分别是1.52、1.55和3.85。异源表达透明颤菌血红蛋白基因是提高灵芝胞外多糖产量的一种有效方法。 展开更多

关键词 灵芝 葡萄糖磷酸变位酶 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶

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奶牛乳样和粪样中幽门螺杆菌PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：2

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作者 张于 王寒 +5 位作者 文月玲 江涛 沈留红 余树民 曹随忠 姚学萍 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第1期28-34,共7页

【目的】建立一种特异、灵敏的牛源幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)检测方法,为家畜感染幽门螺杆菌的流行病学调查鉴定提供支持。【方法】分别选取Hp的16SrRNA、UreA、glmM为靶基因设计特异性引物,以H.pylori动物模型适应菌株SS1株... 【目的】建立一种特异、灵敏的牛源幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)检测方法,为家畜感染幽门螺杆菌的流行病学调查鉴定提供支持。【方法】分别选取Hp的16SrRNA、UreA、glmM为靶基因设计特异性引物,以H.pylori动物模型适应菌株SS1株为标准菌株建立PCR检测方法,并进行PCR条件优化,运用所建立的最优PCR方法检测临床奶牛乳样和粪样中Hp的分布情况。【结果】PCR特异性试验结果显示,仅Hp SS1株能扩增出特异性条带,而对照菌株金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠杆菌及蜡样芽孢杆菌均无扩增条带。PCR灵敏度试验结果显示,16SrRNA、UreA、glmM基因在乳样中的最低检出浓度分别为101,103和103CFU/mL,在粪样中的最低检出浓度分别为101,104和104 CFU/mL。应用该PCR方法对采集自规模化养殖场及散养的共计41头奶牛的乳样和粪样进行检测,成功检出Hp DNA,靶基因16SrRNA、UreA和glmM序列与NCBI上所发表的J166和ATCC43504菌株序列的同源性均达98%以上。【结论】成功建立了特异、灵敏的牛源Hp的PCR检测方法,可以应用于临床奶牛乳样和粪样中Hp的检测。 展开更多

关键词 奶牛 幽门螺杆菌 PCR检测 16S RRNA基因 尿素酶A基因 磷酸葡萄糖胺变位酶基因

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应用PCR-SSCP技术检测PGM_1基因型 被引量：2

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作者 宋海燕 杨庆恩 余纯应 《法医学杂志》 CAS CSCD 2002年第3期152-154,共3页

目的应用PCR-SSCP技术分型PGM1基因型。方法提取156份武汉地区汉族无关个体的血样DNA,分别扩增PGM1基因外显子4和外显子8的多态性靶DNA,用SSCP分析PCR产物,判断基因型。结果两种PCR产物均检出了两个等位基因、三种基因型,DP值分别为0.5... 目的应用PCR-SSCP技术分型PGM1基因型。方法提取156份武汉地区汉族无关个体的血样DNA,分别扩增PGM1基因外显子4和外显子8的多态性靶DNA,用SSCP分析PCR产物,判断基因型。结果两种PCR产物均检出了两个等位基因、三种基因型,DP值分别为0.5620、0.4405。综合外显子4和8的PCR-SSCP结果,分出8种PGM1基因型,DP值为0.7318。应用本法对保存10年的陈旧血痕和精斑PGM1分型成功。结论用PCR-SSCP分型PGM1基因型在法医物证检验中具有实用价值。 展开更多

关键词 磷酸葡萄糖变位酶1 基因型 PCR-SSCP 法医物证检验学

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α-PGM过表达对灵芝多糖发酵的影响 被引量：5

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作者 李瑞勤 王琼 +4 位作者 沈梦烨 丁重阳 顾正华 张梁 石贵阳 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期18-24,共7页

为了探究灵芝多糖合成途径中磷酸葡萄糖变位酶(α-PGM)的过表达对灵芝多糖发酵产生的影响,利用农杆菌介导法将同源性基因pgm转化灵芝原生质体,筛选灵芝转化子,测定灵芝胞外多糖产量及胞内多糖含量,并研究多糖合成过程中相关酶基因转录... 为了探究灵芝多糖合成途径中磷酸葡萄糖变位酶(α-PGM)的过表达对灵芝多糖发酵产生的影响,利用农杆菌介导法将同源性基因pgm转化灵芝原生质体,筛选灵芝转化子,测定灵芝胞外多糖产量及胞内多糖含量,并研究多糖合成过程中相关酶基因转录水平的相对表达量和酶的活性。结果发现在PGM过表达的重组型灵芝菌株中胞内多糖含量和胞外多糖量最高分别为21.02 mg/100 mg菌体和0.71 g/L,分别比野生型菌株高9.1%和39.2%;灵芝多糖生物合成途径中pgm、pgi基因转录水平表达量较野生型灵芝菌株处于上调状态,且多糖合成代谢中相关酶活性有显著提高。 展开更多

关键词 灵芝多糖 磷酸葡萄糖变位酶(PGM) QRT-PCR 酶活

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台湾鳗鳅的养殖技术

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作者 郭连伟 《河北农业》 2020年第8期26-29,共4页

台湾鳗鳅原产自台湾岛,具有个体大,长势快,适应强等特点。它既传承了普通泥鳅的特点,又具有自身的特质。和普通的泥鳅比起来,台湾鳗鳅个体大、肉多刺少,肉质鲜美,味道独特,含有蛋白酶,表型-6-磷酸葡萄糖酸脱氧酶,磷酸葡萄糖变位酶,乳酸... 台湾鳗鳅原产自台湾岛,具有个体大,长势快,适应强等特点。它既传承了普通泥鳅的特点,又具有自身的特质。和普通的泥鳅比起来,台湾鳗鳅个体大、肉多刺少,肉质鲜美,味道独特,含有蛋白酶,表型-6-磷酸葡萄糖酸脱氧酶,磷酸葡萄糖变位酶,乳酸脱氢酶. 展开更多

关键词 乳酸脱氢酶 泥鳅 磷酸葡萄糖变位酶 台湾岛 蛋白酶 长势 6-磷酸葡萄糖 肉质

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