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抗B型葡萄球菌肠毒素(SEB)单克隆抗体的研制及其初步鉴定(简报) 被引量：1
1
作者 李恩善 肖毅 +1 位作者 董邦权 赵宁 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第3期55-56,共2页
葡萄球菌肠毒素是一组分子量为24,000—34，000的单肽链蛋白质。已知有SEA、SEB、SECs(包括SEC1，SEC2及SEC8)，SED及SEE等血清型。都能引起食物中毒。并证实SEA和SEB还具有强烈的有丝分裂原效应。对机体可产生广泛地免疫调节作用。因... 葡萄球菌肠毒素是一组分子量为24,000—34，000的单肽链蛋白质。已知有SEA、SEB、SECs(包括SEC1，SEC2及SEC8)，SED及SEE等血清型。都能引起食物中毒。并证实SEA和SEB还具有强烈的有丝分裂原效应。对机体可产生广泛地免疫调节作用。因此，建立抗SEB单抗的杂交癌细胞系具有重要的实际意义。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素 单克隆抗体 初步鉴定 简报 研制 b型 免疫调节作用 有丝分裂原 seb SEC1 食物中毒 癌细胞系 SEA 分子量 蛋白质 血清型 SEE SED
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重组葡萄球菌B型肠毒素超抗原的制备及抗肿瘤活性分析 被引量：7
2
作者 姜永强 宁保安 +3 位作者 郑玉玲 马茹 李韩平 高志贤 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期323-326,共4页
目的　采用基因工程技术制备葡萄球菌B型肠毒素 (SEB) ,并对其体内外抗肿瘤活性进行分析。方法　对SEB在大肠杆菌中进行高效表达和分离纯化 ,并对其超抗原活性和免疫学活性与天然SEB进行比较研究。观察重组SEB对人肝癌细胞的体外抑制作... 目的　采用基因工程技术制备葡萄球菌B型肠毒素 (SEB) ,并对其体内外抗肿瘤活性进行分析。方法　对SEB在大肠杆菌中进行高效表达和分离纯化 ,并对其超抗原活性和免疫学活性与天然SEB进行比较研究。观察重组SEB对人肝癌细胞的体外抑制作用 ,以及对小鼠肝癌和肉瘤的体内抑瘤效果。结果　SEB获得高效表达 ,并一步将其纯化至均质。与天然毒素相比较 ,重组SEB的免疫学活性与超抗原活性基本相似。首次证明 ,即使SEB的浓度为 10ng/L ,仍然对人肝癌细胞有显著地抑制作用 ,其对小鼠体内的肝癌和肉瘤有一定的抑制作用。结论　重组SEB在体内外均有一定肿瘤抑制作用 。 展开更多
关键词 葡萄球菌b型肠毒素 超抗原 表达 纯化 肝细胞癌
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金黄色葡萄球菌B型肠毒素的培养产毒与柱层析纯化 被引量：7
3
作者 王小红 谢笔钧 +2 位作者 史贤明 孙科 李伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期88-91,共4页
本文采用玻璃纸覆盖琼脂平板法,在37℃培养金黄色葡萄球菌48h后,收集菌体,10000×g离心15min,上清液经聚乙二醇20000浓缩。浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32层析和葡聚糖凝胶SephadexG-75过滤纯化,获得电泳纯的金黄色葡萄球... 本文采用玻璃纸覆盖琼脂平板法,在37℃培养金黄色葡萄球菌48h后,收集菌体,10000×g离心15min,上清液经聚乙二醇20000浓缩。浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32层析和葡聚糖凝胶SephadexG-75过滤纯化,获得电泳纯的金黄色葡萄球菌B型肠毒素。实验证明,利用该简化的二步柱层析分离得到的金黄色葡萄球菌B型肠毒素完全能满足血清学检实验和鉴定的要求,方法简便易行,一般实验室均可使用。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 b型肠毒素 培养产毒 离子交换层析 凝胶过滤
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从噬菌体表面展示肽库中筛选葡萄球菌B型肠毒素抑制剂 被引量：2
4
作者 李韩平 郑玉玲 +2 位作者 邓小红 马茹 姜永强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期352-356,共5页
通过生物淘选,从噬菌体表面展示12肽肽库中筛选能与葡萄球菌B型肠毒素(staphylococcalenterotoxinB ,SEB)结合且能抑制其肠毒活性的特异性短肽.采用Phage ELISA和MTT鉴定所得目的肽的亲和性;根据优势噬菌体阳性克隆序列合成相应多肽.利... 通过生物淘选,从噬菌体表面展示12肽肽库中筛选能与葡萄球菌B型肠毒素(staphylococcalenterotoxinB ,SEB)结合且能抑制其肠毒活性的特异性短肽.采用Phage ELISA和MTT鉴定所得目的肽的亲和性;根据优势噬菌体阳性克隆序列合成相应多肽.利用竞争ELISA研究合成肽与SEB单克隆抗体竞争结合SEB的情况;通过动物实验考察其抑制SEB的超抗原特性和肠毒活性情况.筛选所得短肽在一定浓度范围内可以抑制SEB对鼠脾淋巴细胞的激活;合成肽与SEB质量比为16 0∶1时,合成肽可较好地抑制SEB对乳猫的肠毒活性,并对SEB引起的小鼠致死具有明显保护作用.结果表明,初步得到了能与SEB特异结合并能抑制SEB超抗原特性和肠毒活性的短肽,为进一步研制SEB高效抑制剂奠定了基础. 展开更多
关键词 葡萄球菌b型肠毒素(seb) 随机肽库 筛选 seb抑制剂
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抗B型葡萄球菌肠毒素高亲和力单链抗体的制备 被引量：1
5
作者 孙元杰 李永明 +5 位作者 张葵 魏玉英 宋朝君 周幸春 金伯泉 杨琨 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期403-406,共4页
目的构建针对B型葡萄球菌肠毒素(SEB)的特异性单链抗体(scFv),并进行纯化和鉴定。方法设计抗SEB高亲和力单克隆抗体(mAb)FMU-SEB-No.2重链和轻链可变区基因片段VH和VL的引物,利用RT-PCR技术,从本室制备的抗SEBmAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细... 目的构建针对B型葡萄球菌肠毒素(SEB)的特异性单链抗体(scFv),并进行纯化和鉴定。方法设计抗SEB高亲和力单克隆抗体(mAb)FMU-SEB-No.2重链和轻链可变区基因片段VH和VL的引物,利用RT-PCR技术,从本室制备的抗SEBmAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL基因片段;然后通过在轻链引物上设计linker序列,重叠引物延伸法(SOE)将VH和VL基因拼接成scFv基因片段,并将其克隆入原核表达载体PGEX4T-1中;转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,融合蛋白经谷胱甘肽亲和层吸柱纯化。采用SDS-PAGE,Western blot,ELISA等方法对其表达水平和特异性进行分析。结果成功从1株抗SEB mAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL可变区基因,并通过linker序列将其拼接成scFv片段,大小约750 bp,编码250个氨基酸。PCR、酶切鉴定和测序结果表明表达载体构建成功。转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后,以可溶形式表达相对分子质量(Mr)约54 000的融合蛋白。经谷胱甘肽亲和层析法纯化融合蛋白,可获得纯度达90%以上的scFv,ELISA和Western blot法检测结果表明,可溶性scFv与抗原SEB有较强的结合活性。结论成功构建并表达出抗SEB的特异性单链抗体。 展开更多
关键词 b型葡萄球菌肠毒素 重链和轻链可变区基因 单链抗体 原核表达 ELISA WESTERN bLOT
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金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测 被引量：7
6
作者 段鸿斌 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第7期2617-2619,共3页
[目的]为细菌毒素的检测提供理论依据。[方法]以BALB/c小白鼠为免疫对象,以自制的高纯度金黄色葡萄球菌B型肠毒素（SEB）为免疫抗原,研究其抗体的产生过程和效价,并建立SEB的间接竞争ELISA检测方法。[结果]自制SEB纯度较高,能较好地刺... [目的]为细菌毒素的检测提供理论依据。[方法]以BALB/c小白鼠为免疫对象,以自制的高纯度金黄色葡萄球菌B型肠毒素（SEB）为免疫抗原,研究其抗体的产生过程和效价,并建立SEB的间接竞争ELISA检测方法。[结果]自制SEB纯度较高,能较好地刺激动物产生抗体。以自制SEB为免疫抗原注射BALB/c小白鼠,其最高效价为1∶100 000。SEB浓度在1-1 000 ng/ml范围内,竞争抑制率与SEB浓度的对数值呈显著线性关系。当SEB的浓度为5-500 ng/ml时,随样品中SEB浓度的增加,污染样品的回收率变异系数减小,检测准确度提高。[结论]对不同污染程度的牛奶样品,利用间接竞争ELISA法检测其SEB残留的灵敏度远远高于生化法。 展开更多
关键词 牛奶 金黄色葡萄球菌b型肠毒素 抗原 抗体 ELISA
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检测B型葡萄球菌肠毒素的Love波免疫传感器研究
7
作者 刘虹 高志贤 +2 位作者 王源升 刘清山 朱惠忠 《传感器与微系统》 CSCD 北大核心 2006年第3期28-31,共4页
报道了一种可用于检测B型葡萄球菌肠毒素(SEB)的Love模式声表面波压电免疫传感器。传感器本身由压电石英基片、叉指换能器和S iO2声波导层构成。通过APTES和戊二醛层交联蛋白A,实现抗体分子的定向固定,在Love波传感器的表面构建出抗体... 报道了一种可用于检测B型葡萄球菌肠毒素(SEB)的Love模式声表面波压电免疫传感器。传感器本身由压电石英基片、叉指换能器和S iO2声波导层构成。通过APTES和戊二醛层交联蛋白A,实现抗体分子的定向固定,在Love波传感器的表面构建出抗体分子探针的传感界面。建立了基于网络分析仪的传感器测试系统,对抗体分子固定化过程以及10-6g/mL SEB的响应过程进行了实时监测,相位的偏移随时间表现出明显而规律性的改变,与戊二醛共价交联法进行了对比,并用原子力显微镜(AFM)对蛋白A法固定抗体以及捕获了SEB后的表面进行了成像表征。 展开更多
关键词 Love声表面波免疫传感器 b型葡萄球菌肠毒素 蛋白A
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葡萄球菌肠毒素B基因原核表达系统的构建及其表达产物促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的研究 被引量：1
8
作者 毛亚飞 徐水凌 +1 位作者 罗冬娇 严杰 《浙江大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期553-558,共6页
构建葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxins B，SEB）基因原核表达系统，了解重组表达产物rSEB促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用．采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株DNA中扩增全长SEB基因片段，T—A克隆后测序，构建SE... 构建葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxins B，SEB）基因原核表达系统，了解重组表达产物rSEB促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用．采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株DNA中扩增全长SEB基因片段，T—A克隆后测序，构建SEB基因原核表达系统pET32α-SEB—E．coliBL2IDE3．采用SDS-PAGE检测rSEB表达产量，Ni—NTA亲和层析法提纯rSEB．采用TCID50法测定rSEB对Vero细胞的细胞毒性作用并计算TCID50值．采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEB体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞（PBMC）的促增殖作用以及对HepG2细胞（人肝腺癌细胞）、HeLa细胞（人宫颈癌上皮细胞）的生长抑制作用．与公布的相关序列比较，所克隆的SEB基因核苷酸序列相似性为100％．rSEB表达量约为细菌总蛋白的40％．rSEB对Vero细胞的TCIC50为3．02μg．5．0～20．0μg／ml的rSEB对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用（P〈0．05）．5．0～20．0μg／ml rSEB作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长（P〈0．05）．本研究成功地构建了rSEB高效原核表达系统．rSEB仍然具有生物学活性．所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法，为以后减毒rSEB突变体的筛选奠定了基础． 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素b seb基因/克隆 原核表达系统/构建 重组蛋白/表达 细胞毒性 淋巴细胞/增殖 肿瘤细胞/抑制
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双抗体夹心ELISA检测SEB方法的建立及在不同基质中检测的应用 被引量：3
9
作者 李琦 陈立杰 +2 位作者 董邦权 杨琨 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期761-762,共2页
目的:建立检测SEB的双单克隆抗体(mAb)夹心ELISA,并检测在多种基质中SEB的敏感性。方法:制备、纯化抗SEBmAbB4和D6。D6mAb标记辣根过氧化物酶(HRP)作为检测抗体,B4mAb作为包被抗体。结果:成功建立了敏感、特异检测SEB的ELISA方法,检测... 目的:建立检测SEB的双单克隆抗体(mAb)夹心ELISA,并检测在多种基质中SEB的敏感性。方法:制备、纯化抗SEBmAbB4和D6。D6mAb标记辣根过氧化物酶(HRP)作为检测抗体,B4mAb作为包被抗体。结果:成功建立了敏感、特异检测SEB的ELISA方法,检测抗体稀释液和小牛血清中SEB,检测灵感度0.2μg/L,定量线性范围0.78～12.5μg/L,r2=0.992,批间变异系数(CV)<10%,回收率80%～110%。检测50g/L脱脂牛奶、尿液和自来水中的SEB,灵敏度0.39μg/L,定量线性范围0.78～25μg/L,r2=0.997。与SEA和SECl无交叉反应。结论:本方法测量准确,灵敏度高,特异性好,在食品工业和临床标本检测中有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 ELISA 金黄色葡萄球菌肠毒素b(seb) MAb 检测
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