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葡萄球菌A型肠毒素检测竞争ELISA方法的建立
被引量：
3
1
作者
徐丹丹
黄金海
+2 位作者
刘莹
孙跃辉
周凤娟
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期380-382,385,共4页
为建立快速、灵敏、特异的检测食品中金黄色葡萄球菌A型肠毒素的方法,应用构建的pGEX-6P-SEA、pET28α-SEA重组质粒表达带有不同融合肽的葡萄球菌A型肠毒素,分别通过谷胱甘肽亲和纯化、镍螯合纯化获得SEA的重组融合表达蛋白HIS-SEA、GST...
为建立快速、灵敏、特异的检测食品中金黄色葡萄球菌A型肠毒素的方法,应用构建的pGEX-6P-SEA、pET28α-SEA重组质粒表达带有不同融合肽的葡萄球菌A型肠毒素,分别通过谷胱甘肽亲和纯化、镍螯合纯化获得SEA的重组融合表达蛋白HIS-SEA、GST-SEA,以HIS-SEA为包被抗原,以GST-SEA、天然SEA肠毒素为竞争抗原,确立了SEA型肠毒素ELISA检测的工作条件:包被浓度为2.5μg/mL,阳性血清稀释度为1∶50,辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡免疫球蛋白工作浓度为1∶2000。建立了以重组肠毒素GST-SEA作为竞争抗原检测葡萄球菌肠毒素SEA的间接竞争ELISA(ciELISA)方法,竞争肠毒素GST-SEA蛋白浓度x与P/N值y的关系式:x(GST-SEA)=1.99-y/0.34,R2(GST-SEA)=0.9964,线性检测范围均为1～62.5ng/mL,最低检测量为1ng/mL,此方法丰富了食品中A型肠毒素的检测手段。
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关键词
葡萄球菌a型肠毒素
(SEA)
重组蛋白
间接竞争酶联免疫吸附反应(ciELISA)
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职称材料
葡萄球菌A型肠毒素的高效表达和分离纯化
被引量：
1
2
作者
姜永强
郑玉玲
+3 位作者
宁保安
马茹
王景林
高志贤
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2002年第6期5-6,18,共3页
根据已知葡萄球菌A型肠毒素 (SEA)的基因序列 ,用PCR从产毒标准株S .aureusFRI 10 0中扩增得到约70 0的SEA基因片段 ,并将该片段克隆至表达载体 pBV2 2 0中 ,实现了高效表达。表达产物以可溶性形式存在 ,表达的毒素用CM SephroseFF离子...
根据已知葡萄球菌A型肠毒素 (SEA)的基因序列 ,用PCR从产毒标准株S .aureusFRI 10 0中扩增得到约70 0的SEA基因片段 ,并将该片段克隆至表达载体 pBV2 2 0中 ,实现了高效表达。表达产物以可溶性形式存在 ,表达的毒素用CM SephroseFF离子交换层析进行纯化 ,获得了高纯度的重组SEA ,SDS PAGE显示单一条带。ELISA试验证明所获重组SEA具有与天然SEA相似的免疫学性质。
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关键词
葡萄球菌a型肠毒素
表达
纯化
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职称材料
产A型肠毒素金黄色葡萄球菌的筛选及其重组表达
被引量：
2
3
作者
吴双
张仁利
+2 位作者
耿艺介
高世同
胡章立
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期451-454,共4页
目的分离产A型肠毒素金黄色葡萄球菌标准株,克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),研究其生物学特征。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,亚克隆到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达和纯化重组蛋...
目的分离产A型肠毒素金黄色葡萄球菌标准株,克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),研究其生物学特征。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,亚克隆到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达和纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫小鼠获得抗血清,进行重组蛋白免疫原性分析。结果成功克隆SEA全长基因,经DNA序列分析证实与GenBank收录序列具有100%的同源性。表达蛋白相对分子质量为31000,以包涵体形式存在。纯化、复性后获得有活性的rSEA蛋白,rSEA蛋白能够识别天然的SEA。结论SEA基因成功克隆到表达质粒内并表达,rSEA具备抗原性,为制备单抗、诊断试剂及金黄色葡萄球菌致病机制研究奠定了基础。
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关键词
金黄色
葡萄球菌a型肠毒素
重组表达
蛋白纯化
复性
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职称材料
题名
葡萄球菌A型肠毒素检测竞争ELISA方法的建立
被引量：
3
1
作者
徐丹丹
黄金海
刘莹
孙跃辉
周凤娟
机构
天津大学农业与生物工程学院
出处
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期380-382,385,共4页
基金
天津市应用基础及前沿技术研究计划项目(08JCZDJC22600)
文摘
为建立快速、灵敏、特异的检测食品中金黄色葡萄球菌A型肠毒素的方法,应用构建的pGEX-6P-SEA、pET28α-SEA重组质粒表达带有不同融合肽的葡萄球菌A型肠毒素,分别通过谷胱甘肽亲和纯化、镍螯合纯化获得SEA的重组融合表达蛋白HIS-SEA、GST-SEA,以HIS-SEA为包被抗原,以GST-SEA、天然SEA肠毒素为竞争抗原,确立了SEA型肠毒素ELISA检测的工作条件:包被浓度为2.5μg/mL,阳性血清稀释度为1∶50,辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡免疫球蛋白工作浓度为1∶2000。建立了以重组肠毒素GST-SEA作为竞争抗原检测葡萄球菌肠毒素SEA的间接竞争ELISA(ciELISA)方法,竞争肠毒素GST-SEA蛋白浓度x与P/N值y的关系式:x(GST-SEA)=1.99-y/0.34,R2(GST-SEA)=0.9964,线性检测范围均为1～62.5ng/mL,最低检测量为1ng/mL,此方法丰富了食品中A型肠毒素的检测手段。
关键词
葡萄球菌a型肠毒素
(SEA)
重组蛋白
间接竞争酶联免疫吸附反应(ciELISA)
Keywords
Staphylococcal enterotoxins A
fusion protein
indirect competitive ELISA
分类号
Q814.9 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
葡萄球菌A型肠毒素的高效表达和分离纯化
被引量：
1
2
作者
姜永强
郑玉玲
宁保安
马茹
王景林
高志贤
机构
军事医学科学院微生物流行病研究所
军事医学科学院卫生学和环境医学研究所
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2002年第6期5-6,18,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目 ( 30 1710 91)
文摘
根据已知葡萄球菌A型肠毒素 (SEA)的基因序列 ,用PCR从产毒标准株S .aureusFRI 10 0中扩增得到约70 0的SEA基因片段 ,并将该片段克隆至表达载体 pBV2 2 0中 ,实现了高效表达。表达产物以可溶性形式存在 ,表达的毒素用CM SephroseFF离子交换层析进行纯化 ,获得了高纯度的重组SEA ,SDS PAGE显示单一条带。ELISA试验证明所获重组SEA具有与天然SEA相似的免疫学性质。
关键词
葡萄球菌a型肠毒素
表达
纯化
Keywords
Staphylococcal enterotoxin a, expression,purification.
分类号
R378.1+1 [医药卫生—病原生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
产A型肠毒素金黄色葡萄球菌的筛选及其重组表达
被引量：
2
3
作者
吴双
张仁利
耿艺介
高世同
胡章立
机构
深圳市疾病预防控制中心
深圳大学生命科学学院
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期451-454,共4页
基金
深圳市农业综合开发基金(No.2004-33)
文摘
目的分离产A型肠毒素金黄色葡萄球菌标准株,克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),研究其生物学特征。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,亚克隆到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达和纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫小鼠获得抗血清,进行重组蛋白免疫原性分析。结果成功克隆SEA全长基因,经DNA序列分析证实与GenBank收录序列具有100%的同源性。表达蛋白相对分子质量为31000,以包涵体形式存在。纯化、复性后获得有活性的rSEA蛋白,rSEA蛋白能够识别天然的SEA。结论SEA基因成功克隆到表达质粒内并表达,rSEA具备抗原性,为制备单抗、诊断试剂及金黄色葡萄球菌致病机制研究奠定了基础。
关键词
金黄色
葡萄球菌a型肠毒素
重组表达
蛋白纯化
复性
Keywords
staphylococcal enterotoxin A
recombinant expression
protein purification
renaturation
分类号
R378.1 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
葡萄球菌A型肠毒素检测竞争ELISA方法的建立
徐丹丹
黄金海
刘莹
孙跃辉
周凤娟
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
葡萄球菌A型肠毒素的高效表达和分离纯化
姜永强
郑玉玲
宁保安
马茹
王景林
高志贤
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2002
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
产A型肠毒素金黄色葡萄球菌的筛选及其重组表达
吴双
张仁利
耿艺介
高世同
胡章立
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
2
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职称材料
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