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杂色曲霉产葡聚糖内切酶条件优化及酶学性质初步研究
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作者 付跃 陆桂雅 +3 位作者 黄玲胜 易群 梁彩荣 罗奉奉 《中国饲料》 北大核心 2025年第9期45-50,共6页
本研究采用单因素试验和正交试验对杂色曲霉产葡聚糖内切酶发酵条件进行优化,并对其酶学性质进行初步探究,旨在为木质纤维素类生物质在饲料领域中的应用提供数据支撑。优化后的发酵条件为:蔗渣与麸皮比例4:3,硫酸铵添加量2%,发酵温度28... 本研究采用单因素试验和正交试验对杂色曲霉产葡聚糖内切酶发酵条件进行优化,并对其酶学性质进行初步探究,旨在为木质纤维素类生物质在饲料领域中的应用提供数据支撑。优化后的发酵条件为:蔗渣与麸皮比例4:3,硫酸铵添加量2%,发酵温度28℃,发酵时间4 d,在此条件下葡聚糖内切酶酶活为37.92 U/mL,比优化前提高了1.64倍。酶学性质研究结果表明:杂色曲霉产葡聚糖内切酶的最适温度为55℃,在温度35~55℃内是稳定的。最适pH为4,在pH为4~6内是稳定的。Ca^(2+)、Ba^(2+)对葡聚糖内切酶酶活有促进作用,Co^(2+)和Mg^(2+)具有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 杂色曲霉 葡聚糖内切酶 条件优化 学性质
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厚垣镰孢霉固体发酵产葡聚糖内切酶的条件优化
2
作者 张健 《贵州农业科学》 CAS 2024年第9期74-79,共6页
【目的】优化厚垣镰孢霉固体发酵产葡聚糖内切酶的条件,为纤维素酶应用奠定基础。【方法】以厚垣镰孢霉HML278为研究对象,采用固体发酵方法分析其产葡聚糖内切酶的条件即发酵时间、发酵温度、接种量和培养基料液比对葡聚糖内切酶酶活力... 【目的】优化厚垣镰孢霉固体发酵产葡聚糖内切酶的条件,为纤维素酶应用奠定基础。【方法】以厚垣镰孢霉HML278为研究对象,采用固体发酵方法分析其产葡聚糖内切酶的条件即发酵时间、发酵温度、接种量和培养基料液比对葡聚糖内切酶酶活力的影响,通过正交试验筛选厚垣镰孢霉固态产酶的最优发酵条件。【结果】葡萄糖浓度线性回归方程:y=0.0465x+0.0177,R 2=0.999。单因素试验中,料液比为1︰2时酶活最高,为2.86 U/mL;孢子接种量为孢子悬液1.5 mL/100g物料时酶活最高,为3.29 U/mL;发酵温度为40℃时酶活最高,为3.67 U/mL;发酵时间为4 d时酶活最高,为3.67 U/mL。正交试验显示,最优发酵条件为培养基料液比1︰2、发酵温度40℃、发酵时间5 d,葡聚糖内切酶酶活为4.15 U/mL。【结论】优化的厚垣镰孢霉固体发酵条件产葡聚糖内切酶的酶活较高,降解纤维素效果佳。 展开更多
关键词 厚垣镰孢霉 固体发酵 条件优化 葡聚糖内切酶 培养基
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β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及表达 被引量:7
3
作者 郭成栓 崔堂兵 郭勇 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第12期112-115,145,共5页
从一株产碱性纤维素酶的短小芽孢杆菌菌株H9中,克隆到了编码葡聚糖内切酶的基因,对其基因序列及酶的结构域进行了分析预测,同时将该酶的基因构建于大肠杆菌表达载体pET20b中,获得重组表达载体pET20b-EglA,转化至大肠杆菌菌株BL21(DE3)... 从一株产碱性纤维素酶的短小芽孢杆菌菌株H9中,克隆到了编码葡聚糖内切酶的基因,对其基因序列及酶的结构域进行了分析预测,同时将该酶的基因构建于大肠杆菌表达载体pET20b中,获得重组表达载体pET20b-EglA,转化至大肠杆菌菌株BL21(DE3)中进行表达,并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测.实验结果表明:该基因大小为1980bp,共编码659个氨基酸,在大肠杆菌中得到了良好的分泌表达;该酶的相对分子质量约为73000,由两个不连续的结构域组成,其一为N-端催化结构域,由糖基水解酶家族9组成,其二为C-端底物结合结构域,由碳水化合物绑定结构域家族3组成,其在不同温度和pH值下的活力和稳定性与原始菌株的比较接近. 展开更多
关键词 葡聚糖内切酶 大肠杆菌 短小芽孢杆菌 基因 克隆 表达
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绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶V基因的克隆与表达 被引量:4
4
作者 刘北东 杨谦 +3 位作者 周麒 宋金柱 陈佃福 刘恒 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第8期28-32,共5页
采用RT-PCR方法克隆到绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711的葡聚糖内切酶V(EGV)的cDNA基因。测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上,转化酿酒酵母,同时研究了超声波处理对酵母完整细胞转化的影响。转化子用2%的β-D-半乳糖... 采用RT-PCR方法克隆到绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711的葡聚糖内切酶V(EGV)的cDNA基因。测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上,转化酿酒酵母,同时研究了超声波处理对酵母完整细胞转化的影响。转化子用2%的β-D-半乳糖进行诱导,用Northem杂交和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测。结果表明,EGV的cDNA基因开放阅读框长度为741bp,编码247个氨基酸,推测的蛋白质分子量为24.99kDa。超声波处理60s的酿酒酵母的转化率最高,在相同条件下是未处理组的2倍。酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达并分泌到胞外。发酵液中的酶活在培养60小时达到最高0.046U/ml。最适酶解温度为60℃,最适pH值为5.4。 展开更多
关键词 绿色木霉 葡聚糖内切酶V 酿酒酵母 超声波处理 基因表达 克隆 纤维素
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β-1,4-葡聚糖内切酶基因在大肠杆菌中分泌表达 被引量:4
5
作者 李湘玉 刘秦华 +6 位作者 李君风 白晰 T. Desta 王思然 董志浩 白云峰 邵涛 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期309-315,共7页
采用重叠延伸PCR合成技术将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)分泌蛋白基因序列usp45(81 bp)和瑞氏木霉(Trichoderma reesei)β-1,4-葡聚糖内切酶成熟蛋白序列egl3(657 bp)连接成融合基因usp45-egl3,构建了分泌型重组质粒pMG36e-usp45-egl... 采用重叠延伸PCR合成技术将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)分泌蛋白基因序列usp45(81 bp)和瑞氏木霉(Trichoderma reesei)β-1,4-葡聚糖内切酶成熟蛋白序列egl3(657 bp)连接成融合基因usp45-egl3,构建了分泌型重组质粒pMG36e-usp45-egl3及重组大肠杆菌E.coli DH5α/pMG36e-usp45-egl3。分析重组大肠杆菌的表达效果及表达产物降解纤维素的能力。结果表明,重组大肠杆菌DH5α/pMG36e-usp45-egl3经14 h培养能分泌酶活为226 mU/mL的β-1,4-葡聚糖内切酶,并有效地降解了羧甲基纤维素钠。其中分泌的β-1,4-葡聚糖内切酶降解羧甲基纤维素钠生成还原糖的速率为2.35 mg/(h·mL)。 展开更多
关键词 瑞氏木霉 β—1 4-葡聚糖内切酶 大肠杆菌 分泌表达
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绿色木霉葡聚糖内切酶(EGⅠ)基因克隆及在酿酒酵母中的表达 被引量:3
6
作者 陈红漫 张欣 +2 位作者 李艳秋 阚国仕 任大明 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期48-52,共5页
以纤维素酶工业生产菌株绿色木霉Sn-9106的总RNA为模板,采用RT-PCR技术获得大小为1 400 bp的cDNA片段,该序列与GenBank中的E00390葡聚糖内切酶序列相比,氨基酸序列同源性达91%。将EGⅠ基因构建入表达载体pESC中,在GAL10启动子控制下,目... 以纤维素酶工业生产菌株绿色木霉Sn-9106的总RNA为模板,采用RT-PCR技术获得大小为1 400 bp的cDNA片段,该序列与GenBank中的E00390葡聚糖内切酶序列相比,氨基酸序列同源性达91%。将EGⅠ基因构建入表达载体pESC中,在GAL10启动子控制下,目的基因在酿酒酵母Fm135a中成功表达,所得葡聚糖内切酶经初步纯化后,SDS-PAGE检测为49 kD,比活力为2.45 U/mg。 展开更多
关键词 绿色木霉 纤维素 酿酒酵母 葡聚糖内切酶 克隆表达
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绿色木霉葡聚糖内切酶cDNA基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达 被引量:10
7
作者 王利英 刘一 +1 位作者 杨登峰 黄日波 《广西科学》 CAS 2007年第3期315-319,共5页
用L-山梨糖诱导绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711纤维素酶基因的转录,提取其总RNA反转录获得cDNA。PCR扩增葡聚糖内切酶(EG)和葡聚糖内切酶(EG)的cDNA基因,将其克隆到酵母载体中,构建产生纤维素酶的酿酒酵母工程菌。重组菌株能够识... 用L-山梨糖诱导绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711纤维素酶基因的转录,提取其总RNA反转录获得cDNA。PCR扩增葡聚糖内切酶(EG)和葡聚糖内切酶(EG)的cDNA基因,将其克隆到酵母载体中,构建产生纤维素酶的酿酒酵母工程菌。重组菌株能够识别EG和EG自身携带的信号肽而将表达产物分泌到胞外,故可采用刚果红平板染色法筛选具有羧甲基纤维素酶(CMCase)活性的重组转化子。重组菌株表达的EG酶活在诱导70h时达到最高(为0.08U/ml),表达的EG酶活在诱导60h时达到最高(为0.03U/ml)。 展开更多
关键词 绿色木霉 葡聚糖内切酶 酿酒酵母
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绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅰ基因的克隆与表达 被引量:13
8
作者 刘北东 杨谦 +4 位作者 周麒 宋金柱 陈佃福 刘恒 赵敏 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期71-75,共5页
采用RTPCR方法克隆到绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅰ(EGⅠ)的cDNA序列,测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上,转化酿酒酵母,转化子用2%的βD半乳糖进行诱导,用Northern杂交、刚果红染色法和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和... 采用RTPCR方法克隆到绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅰ(EGⅠ)的cDNA序列,测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上,转化酿酒酵母,转化子用2%的βD半乳糖进行诱导,用Northern杂交、刚果红染色法和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测.结果表明,EGⅠ的cDNA基因开放阅读框长度为1377bp,编码459个氨基酸,推测蛋白质分子量为48.1kD.刚果红染色显示,转化子可产生明显的水解圈;CMC酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EGⅠ并分泌到胞外.发酵液中的酶活在培养60h达到最高0.06UmL,最适酶解温度为50℃,最适pH值为5.4. 展开更多
关键词 绿色木霉 葡聚糖内切酶 酿酒酵母 表达
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短小芽孢杆菌C-9葡聚糖内切酶基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达 被引量:3
9
作者 杨金莹 吕建仁 党宏月 《中国石油大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第3期144-147,共4页
从短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)C-9中克隆得到葡聚糖内切酶基因,该基因包含1980 bp核苷酸,编码559个氨基酸,其N端有一个预测的29个氨基酸的信号肽序列;以YIp5质粒为骨架,构建rDNA介导的多拷贝整合载体,实现葡聚糖内切酶在酿酒酵母中... 从短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)C-9中克隆得到葡聚糖内切酶基因,该基因包含1980 bp核苷酸,编码559个氨基酸,其N端有一个预测的29个氨基酸的信号肽序列;以YIp5质粒为骨架,构建rDNA介导的多拷贝整合载体,实现葡聚糖内切酶在酿酒酵母中的高效、稳定表达。与对照菌株相比,含有葡聚糖内切酶基因的重组酿酒酵母可以在以羧甲基纤维素为唯一碳源的培养基上生长。 展开更多
关键词 葡聚糖内切酶 体DNA 酿酒酵母 多拷贝整合
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节杆菌β-1,3葡聚糖内切酶的分离纯化与特性研究 被引量:2
10
作者 庞中存 张永茂 +1 位作者 黄玉龙 大西正健 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2008年第4期133-138,148,共7页
通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和柱层析从节杆菌(Arthrobacter sp.)粗酶制剂分离纯化得到β-1,3葡聚糖内切酶。经SDS凝胶电泳和柱层析测得纯化酶为单体酶,分子量为32.5kDa;纯化酶N末端的10个氨基酸序列为APGDLLWSDE,在pH5~8... 通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和柱层析从节杆菌(Arthrobacter sp.)粗酶制剂分离纯化得到β-1,3葡聚糖内切酶。经SDS凝胶电泳和柱层析测得纯化酶为单体酶,分子量为32.5kDa;纯化酶N末端的10个氨基酸序列为APGDLLWSDE,在pH5~8之间稳定,最适pH6.5,最适温度55℃,但50℃以上失活很快。纯化酶对昆布4,5,6,7糖及昆布多糖底物的米氏常数分别为0.12,0.11,0.067,0.066mM和0.16mg/mL,也可水解热凝胶和地衣多糖,葡糖苷内切酶H(Streptomyces griseus)不能分解它,证明该酶不含糖基。该酶属于糖基水解酶16族系。 展开更多
关键词 β-1 3葡聚糖内切酶 节杆菌 纯化 分子特性
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两阶段pH和搅拌控制策略提高哈茨木霉产β-1,3-葡聚糖内切酶 被引量:1
11
作者 李珊 詹晓北 +3 位作者 郑志永 朱莉 李晶 徐敏 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1146-1154,共9页
为提高哈茨木霉(Trichoderma harzianum GIM 3.442)发酵生产β-1,3-葡聚糖内切酶的酶活Eendo及其内切酶酶活在总酶活中所占的比例Eendo/Etotal,在7 L发酵罐水平考察了不同pH和搅拌转速对菌体和产酶的影响。结果表明,单一pH或搅拌转速... 为提高哈茨木霉(Trichoderma harzianum GIM 3.442)发酵生产β-1,3-葡聚糖内切酶的酶活Eendo及其内切酶酶活在总酶活中所占的比例Eendo/Etotal,在7 L发酵罐水平考察了不同pH和搅拌转速对菌体和产酶的影响。结果表明,单一pH或搅拌转速的优化不能使菌体生长和产物合成同时达到最优效果。通过分析不同pH和转速下发酵曲线和动力学参数,提出了两阶段pH和搅拌转速控制策略:在发酵前期(0-24 h)控制pH 7.0,搅拌转速100 r/min,发酵后期(24-168 h)控制pH 5.0,搅拌转速200 r/min。β-1,3-葡聚糖内切酶(Eendo)、酶合成生产强度(QE,endo)和Eendo/Etotal分别达到了407.8 U/mL、3.09 U/(m L·h)和0.71,比优化前分别提高了320.0%、398.4%和65.1%。 展开更多
关键词 β-1 3葡聚糖内切酶 哈茨木霉 发酵策略 PH 搅拌转速
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短小芽孢杆菌β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及在大肠杆菌中的分泌表达 被引量:2
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作者 郭成栓 欧阳蒲月 +1 位作者 崔堂兵 郭勇 《化学与生物工程》 CAS 2010年第12期53-55,68,共4页
从一株产碱性纤维素酶的短小芽孢杆菌H12中克隆了编码β-1,4-葡聚糖内切酶的基因,对其基因序列及其酶的结构域进行了分析预测,同时将该酶的基因构建于大肠杆菌表达载体pET20b中,获得重组表达载体pET20b-EglA,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3... 从一株产碱性纤维素酶的短小芽孢杆菌H12中克隆了编码β-1,4-葡聚糖内切酶的基因,对其基因序列及其酶的结构域进行了分析预测,同时将该酶的基因构建于大肠杆菌表达载体pET20b中,获得重组表达载体pET20b-EglA,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行表达。结果表明,该基因大小为1980 bp,共编码659个氨基酸;对β-1,4-葡聚糖内切酶结构域分析表明,该酶由两个不连续的结构域组成,其一为N-端催化结构域,由糖基水解酶家族9组成,其二为C-端底物结合结构域,由碳水化合物绑定结构域家族3组成;平板实验结果表明,β-1,4-葡聚糖内切酶基因在重组大肠杆菌中得到了良好的分泌表达;SDS-PAGE电泳图谱表明该酶的分子大小约为73 kDa。 展开更多
关键词 β-1 4-葡聚糖内切酶 大肠杆菌 短小芽孢杆菌 克隆 表达
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绿色木霉葡聚糖内切酶Ⅰ(EGⅠ)基因克隆与表达 被引量:1
13
作者 陈红漫 张璐 +2 位作者 李艳秋 阚国仕 任大明 《中国酿造》 CAS 2012年第7期114-116,共3页
绿色木霉Sn-9106是一株分解纤维素能力较强、能利用秸秆固体发酵生产纤维素酶的工业菌株。通常丝状真菌纤维素酶合成受纤维素、槐二糖等的诱导。本研究利用秸秆粉诱导绿色木霉Sn-9106纤维素酶基因,在诱导3.5d时,纤维素酶组分之一——葡... 绿色木霉Sn-9106是一株分解纤维素能力较强、能利用秸秆固体发酵生产纤维素酶的工业菌株。通常丝状真菌纤维素酶合成受纤维素、槐二糖等的诱导。本研究利用秸秆粉诱导绿色木霉Sn-9106纤维素酶基因,在诱导3.5d时,纤维素酶组分之一——葡聚糖内切酶Ⅰ的mRNA转录达到峰值,收集菌丝提取总RNA,以单链cDNA为模板,PCR扩增获得编码葡聚糖内切酶Ⅰ基因(egl1),去除信号肽序列后构建重组质粒PET-egl1,实现其在大肠杆菌中的表达,所得重组葡聚糖内切酶经组氨酸标签亲和层析纯化得到单一的E-GI蛋白,SDS-PAGE检测为49ku,活力为2.37U/mL。 展开更多
关键词 绿色木霉 纤维素 葡聚糖内切酶 原核表达
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β-1,4-葡聚糖内切酶的定向进化 被引量:1
14
作者 郭成栓 杨桂玲 刘晓珊 《化学与生物工程》 CAS 2021年第2期53-56,共4页
根据阳性转化子在IPTG诱导下可以在LB-CMC平板上产生水解圈的原理,在初筛和摇瓶复筛的基础上,采用易错PCR法对β-1,4-葡聚糖内切酶基因进行定向进化,从阳性转化子中筛选酶活提高的突变菌株。突变酶活性是野生酶的1.32倍,催化效率约为野... 根据阳性转化子在IPTG诱导下可以在LB-CMC平板上产生水解圈的原理,在初筛和摇瓶复筛的基础上,采用易错PCR法对β-1,4-葡聚糖内切酶基因进行定向进化,从阳性转化子中筛选酶活提高的突变菌株。突变酶活性是野生酶的1.32倍,催化效率约为野生酶的1.26倍。基因测序结果表明,突变酶基因DNA序列中有3个碱基发生了突变,导致氨基酸序列中有2个氨基酸发生了改变:野生酶突变位点的密码子AAA(106 bp)突变为GAA,其编码的赖氨酸变为谷氨酸;野生酶突变位点的密码子TTT(1760 bp)突变为TCT,其编码的苯丙氨酸变为赖氨酸;野生酶突变位点的密码子GGT(1962 bp)突变为GGC,但是其编码的氨基酸没有发生改变,为同义突变。 展开更多
关键词 β-1 4-葡聚糖内切酶 定向进化 易错PCR
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一株嗜热梭菌β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及表达
15
作者 蒋海芹 毕云枫 +3 位作者 华欣春 陈丽丽 徐雪霏 沈明浩 《纺织学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第8期82-86,共5页
以嗜热梭菌(Symbiobacterium thermophilum IAM 14863)基因组DNA为模板克隆了编码葡聚糖内切酶的基因,同时将该酶基因构建于表达载体pET32a(+)中,获得重组表达载体pET32a-Glu,转化至E.coli BL21(DE3)PLYS中并进行表达。结果表明:该基因... 以嗜热梭菌(Symbiobacterium thermophilum IAM 14863)基因组DNA为模板克隆了编码葡聚糖内切酶的基因,同时将该酶基因构建于表达载体pET32a(+)中,获得重组表达载体pET32a-Glu,转化至E.coli BL21(DE3)PLYS中并进行表达。结果表明:该基因大小为1 101 bp,共编码366个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明该基因在E.coli BL21(DE3)PLYS中得到了有效表达,相对分子质量约为60 kDa,纯化后重组酶活力为103 U/mL;酶学性质实验结果表明:酶最适pH值为5左右,最适反应温度为55℃,且此酶具有良好的耐热性(75℃左右)和pH值稳定性。 展开更多
关键词 纤维素 β-1 4-葡聚糖内切酶 嗜热梭菌 克隆 原核表达
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控制哈茨木霉菌体形态提高β-1,3-葡聚糖内切酶活的研究 被引量:1
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作者 王剑 郑志永 +1 位作者 朱莉 詹晓北 《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第6期99-103,共5页
哈茨木霉的深层培养菌体形态与β-1,3-葡聚糖内切酶酶活之间有密切关系。通过单因素试验优化了控制哈茨木霉菌球形态的培养条件为:摇瓶装液量100 m L/500 m L,接种量5%(V/V),初始p H 6.5,回旋式摇床转速180r/min,在培养基中添加0.3%(m/V... 哈茨木霉的深层培养菌体形态与β-1,3-葡聚糖内切酶酶活之间有密切关系。通过单因素试验优化了控制哈茨木霉菌球形态的培养条件为:摇瓶装液量100 m L/500 m L,接种量5%(V/V),初始p H 6.5,回旋式摇床转速180r/min,在培养基中添加0.3%(m/V)的吐温-80或0.3%(m/V)的CMC-Na。在该条件下,菌球直径控制在(0.42±0.09)mm左右,β-1,3-葡聚糖内切酶酶活达到(111.9±7.5)U/m L。进一步通过正交优化,β-1,3-葡聚糖内切酶酶活提高到了135.2±8.3 U/m L,同时得出各种因素对菌球直径的影响顺序为:接种量>CMC-Na>吐温-80。 展开更多
关键词 菌体形态 β-1 3-葡聚糖内切酶 哈茨木霉
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海栖热袍菌耐热葡聚糖内切酶EG12B基因的克隆表达及酶学特性分析 被引量:1
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作者 王珊珊 任艳艳 +2 位作者 张涛 路宏朝 王令 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第4期20-26,共7页
为了促进家畜对纤维素饲料的消化吸收,提高饲料利用率,改善畜产品品质,本研究基于海栖热袍菌(Thermotoga maritima)的基因组信息,通过筛选获得一段具有潜在耐热特性的葡聚糖内切酶基因(EG12B)序列。经删除预测信号肽和优化密码子偏好性... 为了促进家畜对纤维素饲料的消化吸收,提高饲料利用率,改善畜产品品质,本研究基于海栖热袍菌(Thermotoga maritima)的基因组信息,通过筛选获得一段具有潜在耐热特性的葡聚糖内切酶基因(EG12B)序列。经删除预测信号肽和优化密码子偏好性,运用基因工程手段将成熟肽EG12B基因克隆至原核表达载体pET-28a中,成功构建了重组表达质粒pET28-EG12B。转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经重组菌发酵培养及IPTG诱导表达,实现了EG12B在大肠杆菌系统中的胞内高效表达,表达量约占全细胞总蛋白的36%。通过细胞超声破碎、镍离子亲和层析以及热处理分离纯化,获得了电泳纯重组酶EG12B。酶学特性分析表明,该重组酶的最适反应温度为90℃,最适反应pH为5.2,在70℃下保温1 h,酶活力基本维持不变。表明葡聚糖内切酶EG12B具有优越的耐热性和良好的热稳定性,为进一步作为饲料添加剂用于纤维素饲料关键技术的开发和畜产品品质的提升奠定了理论基础。 展开更多
关键词 海栖热袍菌 葡聚糖内切酶 克隆表达 学特性 饲料添加剂
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枯草芽孢杆菌葡聚糖内切酶的克隆与表征
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作者 邱立欢 李春秀 许建和 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期265-267,共3页
利用已公布的枯草芽孢杆菌基因组序列中假定的葡聚糖内切酶基因进行引物设计,从菌株Bacillussp.ECU0013中克隆表达得到重组葡聚糖内切酶BsEG。经镍柱纯化后进行酶学性质表征,其最适反应pH约为6.0;最适反应温度为50℃,具有较好的热稳定性... 利用已公布的枯草芽孢杆菌基因组序列中假定的葡聚糖内切酶基因进行引物设计,从菌株Bacillussp.ECU0013中克隆表达得到重组葡聚糖内切酶BsEG。经镍柱纯化后进行酶学性质表征,其最适反应pH约为6.0;最适反应温度为50℃,具有较好的热稳定性,50℃时半衰期达101h。Km值为20.1 g/L,相应的Vmax值为0.075 g/(L·min)。并且初步对酶BsEG的底物特异性及对纤维素的吸附性进行了探究。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 葡聚糖内切酶 学性质 克隆 表征
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哈茨木霉产水解热凝胶的内切β-1,3-葡聚糖酶的分离纯化 被引量:5
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作者 徐敏 李晶 +4 位作者 郑志永 朱莉 詹晓北 李珊 张洪涛 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期157-161,共5页
结合多种分离方法,从哈茨木霉(Trichoderma harzianum Rifai ACCC30371)的发酵产物中分离得到一种对不溶性多糖热凝胶具有较高水解活性的内切β-1,3-葡聚糖酶。结果表明,哈茨木霉发酵液经50%饱和度硫酸铵沉淀预处理后,依次经过HiPrep 26... 结合多种分离方法,从哈茨木霉(Trichoderma harzianum Rifai ACCC30371)的发酵产物中分离得到一种对不溶性多糖热凝胶具有较高水解活性的内切β-1,3-葡聚糖酶。结果表明,哈茨木霉发酵液经50%饱和度硫酸铵沉淀预处理后,依次经过HiPrep 26/10 desalting层析柱脱盐、QFF阴离子交换层析柱去除杂质蛋白,最终经Superdex 75凝胶柱纯化获得纯度较高的内切β-1,3-葡聚糖酶。最终酶活回收率为6.63%,内切酶比酶活由6.86U/mg提高到133.01U/mg,纯化倍数达到19.39倍。MALDI-TOF-TOF鉴定结果表明,该内切酶与产自绿色木霉的endoglucanase存在较高的同源性。 展开更多
关键词 哈茨木霉 β-1 3-葡聚糖内切酶 热凝胶 分离纯化
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绿色木霉内切葡聚糖酶基因Ⅰ的克隆表达 被引量:4
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作者 黄晓梅 杨谦 +3 位作者 范金霞 陈秀玲 王允 张向东 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1921-1926,共6页
为深入研究绿色木霉(Trichoderma viride)内切葡聚糖酶(EGⅠ)的特性与功能,利用Northern blot方法分析不同碳源条件下绿色木霉的egⅠ表达,采用RT-PCR方法从绿色木霉T4中克隆egⅠ基因的cD-NA序列,测序与生物信息学分析,并构建诱导型表达... 为深入研究绿色木霉(Trichoderma viride)内切葡聚糖酶(EGⅠ)的特性与功能,利用Northern blot方法分析不同碳源条件下绿色木霉的egⅠ表达,采用RT-PCR方法从绿色木霉T4中克隆egⅠ基因的cD-NA序列,测序与生物信息学分析,并构建诱导型表达载体pYES2-egⅠ,转化酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)INVSc1和H158中表达.结果表明:绿色木霉在含有纤维素的液体培养基中生长,egⅠ高效表达,在秸秆中表达量最高.纤维二糖中表达量相对较低,在葡萄糖、果糖中没有表达.egⅠ基因编码框长度1 377bp,编码459个氨基酸.含有信号肽,为分泌蛋白,属于糖苷水解酶家族7,具有纤维素酶结合域(CBD)和催化域(CD).INVSc1转化子发酵培养48 h达到转录高峰期,60 h达到酶活高峰期,酶活为0.081 6 U/mL,酶活比H158转化子提高32.5%. 展开更多
关键词 绿色木霉 葡聚糖内切酶 酿酒酵母 表达
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