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带新霉素抗性的萤光素酶报告载体的构建
1
作者
马云云
冯龙
+4 位作者
卫艳萍
李月白
何婷玉
董子明
赵国强
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2009年第3期533-536,共4页
目的:构建带新霉素抗性的萤光素酶报告载体。方法:设计扩增新霉素抗性基因neo,克隆入萤光素酶报告载体pGL3,得到pGL3-neo。分别比较pGL3、pGL3-CMV promoter瞬时转染组和经G418筛选的pGL3-neo、pGL3-neo-CMV promoter稳定转染组细胞萤...
目的:构建带新霉素抗性的萤光素酶报告载体。方法:设计扩增新霉素抗性基因neo,克隆入萤光素酶报告载体pGL3,得到pGL3-neo。分别比较pGL3、pGL3-CMV promoter瞬时转染组和经G418筛选的pGL3-neo、pGL3-neo-CMV promoter稳定转染组细胞萤光素酶活性。结果:PCR扩增出neo表达单元;酶切和DNA测序分析鉴定得到带新霉素抗性的萤光素酶报告质粒pGL3-neo。G418筛选可获得稳定转染pGL3-neo细胞株和稳定转染pGL3-neo-CMV promoter的细胞株。荧光检测显示:瞬时转染pGL3组、pGL3-CMVpromoter组及稳定转染pGL3-neo组、pGL3-neo-CMVpromoter组萤光素酶活性值分别为1047±86、1504±107和34819±1479、456109±15791,稳定转染组萤光素酶活性均高于瞬时转染组,P<0.05。结论:成功构建了带新霉素抗性的萤光素酶报告基因载体,使报告基因检测数据的敏感性和可靠性显著提高。
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关键词
萤光素酶报告载体pgl3
新霉素抗性基因neo
克隆
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职称材料
花色苷对LO2细胞核受体报告基因的影响
被引量：
2
2
作者
张英慧
王丙云
+4 位作者
计慧琴
董华强
宋东光
钟希琼
黄剑波
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011年第21期156-160,共5页
研究花色苷矢车菊素-3-O-β-D-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-β-D-glucoside,C3G)及其苷元矢车菊素(cyanidin)对代谢综合征紧密相关的一系列核受体转录活性的影响。将维甲酸X受体(RXR)、孕烷X受体(PXR)、雌激素受体(ER)、法尼醇X受体(FXR)、肝...
研究花色苷矢车菊素-3-O-β-D-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-β-D-glucoside,C3G)及其苷元矢车菊素(cyanidin)对代谢综合征紧密相关的一系列核受体转录活性的影响。将维甲酸X受体(RXR)、孕烷X受体(PXR)、雌激素受体(ER)、法尼醇X受体(FXR)、肝脏X受体α和β(LXRα,LXRβ)、3种过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPARα、PPARγ、PPARδ)等核受体-萤光素酶报告基因和绿色荧光蛋白基因内参转染至人肝细胞LO2建立模型,分别以1、10、100μmol/L的Cyanidin或C3G干预培养细胞24h,筛选可被Cyanidin或C3G激活的核受体类型。结果显示,与溶剂对照组(0.1%DMSO)相比,3种浓度的Cyanidin对RXR都有抑制作用,但是仅在100μmol/L浓度条件下对PXR有较弱的激活作用(1.42±0.19,P<0.05);C3G则对PXR、ER、LXRα、LXRβ、PPARγ、PPARδ等多种核受体有激活作用(P<0.05),其中对PXR、LXRα、LXRβ、PPARγ等核受体的激活倍数超过对照组50%以上。实验结果提示,花色苷改善代谢综合征的作用机制可能与它对一系列细胞核受体的激活作用有关;比较Cyanidin和C3G对核受体的激活能力,发现C3G的作用效果强于其苷元Cyanidin。
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关键词
矢车菊素-
3
-O-β-D-葡萄糖苷
核受体
萤
光素
酶
报告
基因
转录活性
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职称材料
题名
带新霉素抗性的萤光素酶报告载体的构建
1
作者
马云云
冯龙
卫艳萍
李月白
何婷玉
董子明
赵国强
机构
郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室
郑州大学基础医学院生物化学教研室
郑州大学基础医学院病理生理学教研室
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2009年第3期533-536,共4页
基金
河南省医学科技攻关基金资助项目2008002002
文摘
目的:构建带新霉素抗性的萤光素酶报告载体。方法:设计扩增新霉素抗性基因neo,克隆入萤光素酶报告载体pGL3,得到pGL3-neo。分别比较pGL3、pGL3-CMV promoter瞬时转染组和经G418筛选的pGL3-neo、pGL3-neo-CMV promoter稳定转染组细胞萤光素酶活性。结果:PCR扩增出neo表达单元;酶切和DNA测序分析鉴定得到带新霉素抗性的萤光素酶报告质粒pGL3-neo。G418筛选可获得稳定转染pGL3-neo细胞株和稳定转染pGL3-neo-CMV promoter的细胞株。荧光检测显示:瞬时转染pGL3组、pGL3-CMVpromoter组及稳定转染pGL3-neo组、pGL3-neo-CMVpromoter组萤光素酶活性值分别为1047±86、1504±107和34819±1479、456109±15791,稳定转染组萤光素酶活性均高于瞬时转染组,P<0.05。结论:成功构建了带新霉素抗性的萤光素酶报告基因载体,使报告基因检测数据的敏感性和可靠性显著提高。
关键词
萤光素酶报告载体pgl3
新霉素抗性基因neo
克隆
Keywords
luciferase reporter vector
neomycin resistance gene neo
clone
分类号
R965.1 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
花色苷对LO2细胞核受体报告基因的影响
被引量：
2
2
作者
张英慧
王丙云
计慧琴
董华强
宋东光
钟希琼
黄剑波
机构
佛山科学技术学院北院生命科学学院食品系
佛山科学技术学院北院生命科学学院动物医学系
佛山科学技术学院北院生命科学学院园艺系
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011年第21期156-160,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31071537)
文摘
研究花色苷矢车菊素-3-O-β-D-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-β-D-glucoside,C3G)及其苷元矢车菊素(cyanidin)对代谢综合征紧密相关的一系列核受体转录活性的影响。将维甲酸X受体(RXR)、孕烷X受体(PXR)、雌激素受体(ER)、法尼醇X受体(FXR)、肝脏X受体α和β(LXRα,LXRβ)、3种过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPARα、PPARγ、PPARδ)等核受体-萤光素酶报告基因和绿色荧光蛋白基因内参转染至人肝细胞LO2建立模型,分别以1、10、100μmol/L的Cyanidin或C3G干预培养细胞24h,筛选可被Cyanidin或C3G激活的核受体类型。结果显示,与溶剂对照组(0.1%DMSO)相比,3种浓度的Cyanidin对RXR都有抑制作用,但是仅在100μmol/L浓度条件下对PXR有较弱的激活作用(1.42±0.19,P<0.05);C3G则对PXR、ER、LXRα、LXRβ、PPARγ、PPARδ等多种核受体有激活作用(P<0.05),其中对PXR、LXRα、LXRβ、PPARγ等核受体的激活倍数超过对照组50%以上。实验结果提示,花色苷改善代谢综合征的作用机制可能与它对一系列细胞核受体的激活作用有关;比较Cyanidin和C3G对核受体的激活能力,发现C3G的作用效果强于其苷元Cyanidin。
关键词
矢车菊素-
3
-O-β-D-葡萄糖苷
核受体
萤
光素
酶
报告
基因
转录活性
Keywords
cyanidin-
3
-O-β-D-glucoside
nuclear receptor
luciferase reporter gene
transcriptional activity
分类号
TS201.4 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
带新霉素抗性的萤光素酶报告载体的构建
马云云
冯龙
卫艳萍
李月白
何婷玉
董子明
赵国强
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2009
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
花色苷对LO2细胞核受体报告基因的影响
张英慧
王丙云
计慧琴
董华强
宋东光
钟希琼
黄剑波
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011
2
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职称材料
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