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菌丝霉素的串联表达及其菌内抑菌活性分析
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作者 管韬 余冰 +5 位作者 陈代文 韩国全 黄志清 毛湘冰 郑萍 毛倩 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期620-626,共7页
构建菌丝霉素(Plectasin,PT)的串联表达菌株,研究各串联体融合表达产物的菌内抑菌活性。根据大肠杆菌表达系统对密码子的偏爱性,人工合成优化后PT基因,构建表达质粒pGEX-PT/pe;并利用同尾酶法分别构建PT基因二聚体表达质粒pGEX-PT/pes2... 构建菌丝霉素(Plectasin,PT)的串联表达菌株,研究各串联体融合表达产物的菌内抑菌活性。根据大肠杆菌表达系统对密码子的偏爱性,人工合成优化后PT基因,构建表达质粒pGEX-PT/pe;并利用同尾酶法分别构建PT基因二聚体表达质粒pGEX-PT/pes2与PT基因三聚体表达质粒pGEX-PT/pes3;然后分别将各表达质粒转化入BL21(DE3)进行IPTG的诱导表达,对各表达蛋白进行SDS-PAGE、Western Blot分析,并测定各融合表达产物的菌內抑菌活性。测序结果表明,串联体扩增到产物大小分别为135、261和387bp的目的基因片段;SDS-PAGE分析各串联表达菌表达的融合蛋白相对分子质量分别约为30、35和40ku,其产量分别占细菌总蛋白的64.5%、26.4%和25.3%。Western Blot分析表明各表达蛋白均具有良好的免疫反应性;菌内抑菌结果显示,各融合表达产物均表现对DH5α的弱抑制作用,但随PT基因串联数的增加,融合表达产物的抑菌效果显著提高,且抑菌时间延长。各串联表达菌株的成功构建与其表达产物的宿主菌抑制作用,为菌丝霉素高效抑菌产品的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 丝霉素 串联表达 菌内抑菌活性
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