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甜味剂莱鲍迪苷D的高效生物催化合成
被引量:
3
1
作者
费理文
王勇
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期1-7,共7页
采用来自水稻的UDP-糖基转移酶EUGT11并结合染色体改造构建了大肠杆菌工程菌,用于全细胞催化莱鲍迪苷A(Rebaudioside A,RA)生产莱鲍迪苷D(Rebaudioside D,RD)。为了增加宿主细胞内源性糖配体葡萄糖尿苷二磷酸(uridine diphosphate gluco...
采用来自水稻的UDP-糖基转移酶EUGT11并结合染色体改造构建了大肠杆菌工程菌,用于全细胞催化莱鲍迪苷A(Rebaudioside A,RA)生产莱鲍迪苷D(Rebaudioside D,RD)。为了增加宿主细胞内源性糖配体葡萄糖尿苷二磷酸(uridine diphosphate glucose,UDPG)的供给以满足糖基化反应需要,以大肠杆菌BL21(DE3)为出发菌对UDPG代谢通径进行改造,获得了一系列改造菌株SG1、SG2、SG3和SG4。其中以SG4为宿主过表达可高效催化RA合成RD的糖基转移酶EUGT11进行全细胞催化,RD产量高。随后以此工程菌为对象,对可能影响RD催化合成的条件进行了研究,结果表明50 m L培养菌液离心所收集新鲜菌体可在100 mmol/L pH 8.0磷酸钠缓冲液、80 mmol/L柠檬酸钠、体积分数0.1%Triton X100、500 g/L蔗糖、5 mmol/L Zn Cl2、42℃转化1 d的条件下催化1 mmol/L RA底物生成1112.21 mg/L RD,转化率可达98.5%。
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关键词
甜叶菊
莱
鲍迪
苷
A(
rebaudioside
A
RA)
莱
鲍迪
苷
d
(
rebaudioside
d
R
d
)
重组大肠杆菌
全细胞催化
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职称材料
构建高效糖配体再生重组菌生物催化合成莱鲍迪苷D
被引量:
4
2
作者
费理文
王勇
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第22期116-122,共7页
利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose,UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA...
利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose,UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA克隆获得AtSUS3基因,将其装配至pET28a获得表达质粒pLW105,随后pLW105与携带糖基转移酶EUGT11基因的质粒共转化大肠杆菌BL21(DE3)构建双酶共表达工程菌。在不添加UDPG或者尿核苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)的条件下,以上述双酶共表达工程菌全细胞催化莱鲍迪苷A(RA)获得的底物摩尔转化率大于80%,RD产量达到930 mg/L。随后构建双酶基因串连质粒pLW108及双酶共表达大肠杆菌BL21(DE3)工程菌。用串连质粒构建的工程菌催化效果与双质粒共转化相同。采用共表达双酶工程菌的发酵破碎粗酶进行催化,结果显示以粗酶催化可简化催化体系,并可将细胞催化体系所需高质量浓度蔗糖用量降至质量浓度5 g/100 mL,同时在不添加外源UDPG的条件下实现RD的高效生物催化,RA底物摩尔转化率达到93%,RD产量约为1 051 mg/L。
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关键词
甜菊糖
苷
莱
鲍迪
苷
d
尿
苷
二磷酸葡萄糖
蔗糖合酶
U
d
P-糖基转移酶
生物催化
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职称材料
新型甜味剂莱鲍迪苷D和莱鲍迪苷M的生物转化进展
被引量:
2
3
作者
郭保党
饶义剑
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第7期289-296,共8页
来源于植物甜叶菊的天然甜味剂莱鲍迪苷D(rebaudioside D,Reb D)和莱鲍迪苷M(rebaudioside M,Reb M)具有高甜度、无热量和近似于蔗糖的口感,被认为是高热量糖的理想替代品,其在食品领域具有广阔的应用前景。文章综述了Reb D和Reb M的结...
来源于植物甜叶菊的天然甜味剂莱鲍迪苷D(rebaudioside D,Reb D)和莱鲍迪苷M(rebaudioside M,Reb M)具有高甜度、无热量和近似于蔗糖的口感,被认为是高热量糖的理想替代品,其在食品领域具有广阔的应用前景。文章综述了Reb D和Reb M的结构、口感、水溶性、安全性以及合成相关的糖基转移酶的研究进展,并重点介绍了Reb D和Reb M合成相关的糖基转移酶的蛋白质结构、催化机制以及蛋白质理性改造的研究进展,以期为Reb D和Reb M的开发和应用提供参考。
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关键词
莱
鲍迪
苷
d
莱
鲍迪
苷
M
糖基转移酶
蛋白质改造
生物转化
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职称材料
酶催化体系中莱胞迪苷D的连续富集与分离
4
作者
张明义
赵帅
+4 位作者
钟远广
窦培冲
潘涛
张莲莲
董国明
《食品与发酵工业》
2025年第17期20-25,共6页
以量大易得的莱鲍迪苷A(rebaudioside A)为底物通过酶法制备莱鲍迪苷D(rebaudioside D)是目前获得莱鲍迪苷D的主要途径,但是从复杂的酶催化体系中富集并分离莱鲍迪苷D较为困难。为实现酶催化体系中莱鲍迪苷D的有效富集与分离,该研究选取...
以量大易得的莱鲍迪苷A(rebaudioside A)为底物通过酶法制备莱鲍迪苷D(rebaudioside D)是目前获得莱鲍迪苷D的主要途径,但是从复杂的酶催化体系中富集并分离莱鲍迪苷D较为困难。为实现酶催化体系中莱鲍迪苷D的有效富集与分离,该研究选取了3种对甜菊糖核心骨架贝壳杉烯有吸附能力的苯乙烯-二乙烯苯骨架的大孔树脂。考察了3种树脂富集莱鲍迪苷与分离莱鲍迪苷D的能力,选出了能够有效吸附莱鲍迪苷D并对莱鲍迪苷D具有良好分离能力的LX-T28树脂。最后,该研究以LX-T28树脂为填料采用连续柱色谱法实现了酶催化体系中莱鲍迪苷D的富集与分离,高收率低成本地获得了纯度>95%的莱鲍迪苷D,为后续酶法生产莱鲍迪苷D实现工业化解决了后处理难题。
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关键词
莱
鲍迪
苷
d
酶法制备
富集与分离
连续柱色谱法
大孔树脂
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职称材料
题名
甜味剂莱鲍迪苷D的高效生物催化合成
被引量:
3
1
作者
费理文
王勇
机构
上海市农业科学院食用菌研究所
中科院上海生命科学研究院植物生理生态研究所
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期1-7,共7页
基金
国家自然科学基金(31670099)
中国科学院STS项目(KFJ-SW-STS-164-08)
文摘
采用来自水稻的UDP-糖基转移酶EUGT11并结合染色体改造构建了大肠杆菌工程菌,用于全细胞催化莱鲍迪苷A(Rebaudioside A,RA)生产莱鲍迪苷D(Rebaudioside D,RD)。为了增加宿主细胞内源性糖配体葡萄糖尿苷二磷酸(uridine diphosphate glucose,UDPG)的供给以满足糖基化反应需要,以大肠杆菌BL21(DE3)为出发菌对UDPG代谢通径进行改造,获得了一系列改造菌株SG1、SG2、SG3和SG4。其中以SG4为宿主过表达可高效催化RA合成RD的糖基转移酶EUGT11进行全细胞催化,RD产量高。随后以此工程菌为对象,对可能影响RD催化合成的条件进行了研究,结果表明50 m L培养菌液离心所收集新鲜菌体可在100 mmol/L pH 8.0磷酸钠缓冲液、80 mmol/L柠檬酸钠、体积分数0.1%Triton X100、500 g/L蔗糖、5 mmol/L Zn Cl2、42℃转化1 d的条件下催化1 mmol/L RA底物生成1112.21 mg/L RD,转化率可达98.5%。
关键词
甜叶菊
莱
鲍迪
苷
A(
rebaudioside
A
RA)
莱
鲍迪
苷
d
(
rebaudioside
d
R
d
)
重组大肠杆菌
全细胞催化
Keywords
Stevia rebau
d
iana
rebaudioside
A (RA)
rebaudioside
d
(R
d
)
recombinant E. coli
whole-cell ca-talysis
分类号
TS202.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
构建高效糖配体再生重组菌生物催化合成莱鲍迪苷D
被引量:
4
2
作者
费理文
王勇
机构
上海市农业科学院食用菌研究所
中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第22期116-122,共7页
基金
国家自然科学基金面上项目(31670099)
中国科学院STS项目(KFJ-SW-STS-164-08)。
文摘
利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose,UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA克隆获得AtSUS3基因,将其装配至pET28a获得表达质粒pLW105,随后pLW105与携带糖基转移酶EUGT11基因的质粒共转化大肠杆菌BL21(DE3)构建双酶共表达工程菌。在不添加UDPG或者尿核苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)的条件下,以上述双酶共表达工程菌全细胞催化莱鲍迪苷A(RA)获得的底物摩尔转化率大于80%,RD产量达到930 mg/L。随后构建双酶基因串连质粒pLW108及双酶共表达大肠杆菌BL21(DE3)工程菌。用串连质粒构建的工程菌催化效果与双质粒共转化相同。采用共表达双酶工程菌的发酵破碎粗酶进行催化,结果显示以粗酶催化可简化催化体系,并可将细胞催化体系所需高质量浓度蔗糖用量降至质量浓度5 g/100 mL,同时在不添加外源UDPG的条件下实现RD的高效生物催化,RA底物摩尔转化率达到93%,RD产量约为1 051 mg/L。
关键词
甜菊糖
苷
莱
鲍迪
苷
d
尿
苷
二磷酸葡萄糖
蔗糖合酶
U
d
P-糖基转移酶
生物催化
Keywords
steviol glycosi
d
es
rebaudioside
d
uri
d
ine
d
iphosphate glucose(U
d
PG)
sucrose synthase
uri
d
ine
d
iphosphate glycosyltransferase(U
d
P-glycosyltransferase)
biocatalysis
分类号
Q815A [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
新型甜味剂莱鲍迪苷D和莱鲍迪苷M的生物转化进展
被引量:
2
3
作者
郭保党
饶义剑
机构
江南大学生物工程学院
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第7期289-296,共8页
基金
国家重点研发计划项目(2018YFA0901700)
江苏省自然科学基金项目(BK20202002)。
文摘
来源于植物甜叶菊的天然甜味剂莱鲍迪苷D(rebaudioside D,Reb D)和莱鲍迪苷M(rebaudioside M,Reb M)具有高甜度、无热量和近似于蔗糖的口感,被认为是高热量糖的理想替代品,其在食品领域具有广阔的应用前景。文章综述了Reb D和Reb M的结构、口感、水溶性、安全性以及合成相关的糖基转移酶的研究进展,并重点介绍了Reb D和Reb M合成相关的糖基转移酶的蛋白质结构、催化机制以及蛋白质理性改造的研究进展,以期为Reb D和Reb M的开发和应用提供参考。
关键词
莱
鲍迪
苷
d
莱
鲍迪
苷
M
糖基转移酶
蛋白质改造
生物转化
Keywords
rebaudioside
d
rebaudioside
M
glycosyltransferase
protein engineering
biotransformation
分类号
TS202.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
酶催化体系中莱胞迪苷D的连续富集与分离
4
作者
张明义
赵帅
钟远广
窦培冲
潘涛
张莲莲
董国明
机构
铭诚惠众(江苏)药物研究有限公司
出处
《食品与发酵工业》
2025年第17期20-25,共6页
文摘
以量大易得的莱鲍迪苷A(rebaudioside A)为底物通过酶法制备莱鲍迪苷D(rebaudioside D)是目前获得莱鲍迪苷D的主要途径,但是从复杂的酶催化体系中富集并分离莱鲍迪苷D较为困难。为实现酶催化体系中莱鲍迪苷D的有效富集与分离,该研究选取了3种对甜菊糖核心骨架贝壳杉烯有吸附能力的苯乙烯-二乙烯苯骨架的大孔树脂。考察了3种树脂富集莱鲍迪苷与分离莱鲍迪苷D的能力,选出了能够有效吸附莱鲍迪苷D并对莱鲍迪苷D具有良好分离能力的LX-T28树脂。最后,该研究以LX-T28树脂为填料采用连续柱色谱法实现了酶催化体系中莱鲍迪苷D的富集与分离,高收率低成本地获得了纯度>95%的莱鲍迪苷D,为后续酶法生产莱鲍迪苷D实现工业化解决了后处理难题。
关键词
莱
鲍迪
苷
d
酶法制备
富集与分离
连续柱色谱法
大孔树脂
Keywords
rebaudioside
d
enzymatic pro
d
uction
enrichment an
d
separation
tan
d
em column chromatography
macroporous resin
分类号
TS202.3 [轻工技术与工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
甜味剂莱鲍迪苷D的高效生物催化合成
费理文
王勇
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2018
3
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职称材料
2
构建高效糖配体再生重组菌生物催化合成莱鲍迪苷D
费理文
王勇
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018
4
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职称材料
3
新型甜味剂莱鲍迪苷D和莱鲍迪苷M的生物转化进展
郭保党
饶义剑
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2023
2
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职称材料
4
酶催化体系中莱胞迪苷D的连续富集与分离
张明义
赵帅
钟远广
窦培冲
潘涛
张莲莲
董国明
《食品与发酵工业》
2025
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