该研究旨在建立快速、敏感和特异的检测类猪圆环病毒因子P1的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法,用于P1的早期诊断。以感染P1的猪血清DNA提取物为模板,采用PCR扩增P1 101 bp的基因片段,将其克隆至pMD18-T载体,重组质粒测序并进行同源性分析;...该研究旨在建立快速、敏感和特异的检测类猪圆环病毒因子P1的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法,用于P1的早期诊断。以感染P1的猪血清DNA提取物为模板,采用PCR扩增P1 101 bp的基因片段,将其克隆至pMD18-T载体,重组质粒测序并进行同源性分析;以阳性质粒为模板,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,并进行敏感性和特异性检测。经测序证实扩增片段属于P1,所建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测P1的反应在101-108拷贝/μL之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10拷贝/μL,而对猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测为阴性,表明该方法敏感、特异。成功建立了SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测P1载量的方法,为P1致病机制和机体免疫保护机制的研究提供了技术平台。展开更多
本研究通过系统对比试验,优化建立了检测山羊卵巢组织中褪黑素受体基因表达量差异的荧光定量PCR技术体系,在这种体系下检测褪黑素受体1A基因在山羊卵巢组织中的差异表达量,可以得到最优的标准曲线,使起始模板浓度与循环数有良好的线性关...本研究通过系统对比试验,优化建立了检测山羊卵巢组织中褪黑素受体基因表达量差异的荧光定量PCR技术体系,在这种体系下检测褪黑素受体1A基因在山羊卵巢组织中的差异表达量,可以得到最优的标准曲线,使起始模板浓度与循环数有良好的线性关系,且扩增效率百分数Eff接近1;荧光动力学曲线符合标准的"S"形荧光增长曲线,曲线拐点清楚,基线平而无明显上扬趋势;熔解曲线成单峰,充分说明扩增的特异性高,产物单一,与SYBR Green I荧光染料结合的为目标DNA片段,荧光曲线能够准确反映目的产物的扩增结果。展开更多
文摘该研究旨在建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus,NDRV）的荧光定量PCR诊断方法。本实验以感染新型鸭呼肠孤病毒的鸭组织RNA提取物为模板,根据Gen Bank数据库中呼肠孤病毒S1基因全序列,设计合成了一对特异性引物,PCR扩增基因片段,将其克隆至p ET-30a载体,重组质粒测序并进行同源性分析;以阳性质粒为模板,建立SYBR Green II荧光定量PCR检测方法,并进行敏感性和特异性检测。经测序证实扩增片段与预期目的片段相符,所建立的SYBR Green II荧光定量PCR检测S1的反应在101～108 copies/u L之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10 copies/μL,而H5型禽流感病毒、H9型禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、C型鸭肝炎病毒、新城疫病毒、鹅细小病毒、鸭瘟病毒等病毒的检测为阴性,表明该方法敏感、特异。本研究成功建立了SYBR Green II荧光定量PCR检测新型鸭呼肠孤病毒的方法,为新型鸭呼肠孤病毒致病机制和机体免疫保护机制的研究提供了技术平台。
文摘该研究旨在建立快速、敏感和特异的检测类猪圆环病毒因子P1的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法,用于P1的早期诊断。以感染P1的猪血清DNA提取物为模板,采用PCR扩增P1 101 bp的基因片段,将其克隆至pMD18-T载体,重组质粒测序并进行同源性分析;以阳性质粒为模板,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,并进行敏感性和特异性检测。经测序证实扩增片段属于P1,所建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测P1的反应在101-108拷贝/μL之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10拷贝/μL,而对猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测为阴性,表明该方法敏感、特异。成功建立了SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测P1载量的方法,为P1致病机制和机体免疫保护机制的研究提供了技术平台。
文摘本研究通过系统对比试验,优化建立了检测山羊卵巢组织中褪黑素受体基因表达量差异的荧光定量PCR技术体系,在这种体系下检测褪黑素受体1A基因在山羊卵巢组织中的差异表达量,可以得到最优的标准曲线,使起始模板浓度与循环数有良好的线性关系,且扩增效率百分数Eff接近1;荧光动力学曲线符合标准的"S"形荧光增长曲线,曲线拐点清楚,基线平而无明显上扬趋势;熔解曲线成单峰,充分说明扩增的特异性高,产物单一,与SYBR Green I荧光染料结合的为目标DNA片段,荧光曲线能够准确反映目的产物的扩增结果。
