期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到64篇文章
< 1 2 … 4 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
猪肺炎支原体实时荧光重组酶介导的等温扩增快速检测方法的建立和应用
1
作者 康浩然 黄雨薇 +7 位作者 宋程 高鹏 张永宁 周磊 盖新娜 韩军 郭鑫 杨汉春 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第9期1-9,共9页
猪肺炎支原体(Mhp)是引起猪支原体肺炎(MPS)的病原,给全球养猪业带来了巨大的经济损失。早期快速诊断和实时监测对该病的防控至关重要,目前常用的核酸检测方法难以满足临床上即时检测(POCT)的实际需求。本试验针对Mhp细胞膜表面脂蛋白基... 猪肺炎支原体(Mhp)是引起猪支原体肺炎(MPS)的病原,给全球养猪业带来了巨大的经济损失。早期快速诊断和实时监测对该病的防控至关重要,目前常用的核酸检测方法难以满足临床上即时检测(POCT)的实际需求。本试验针对Mhp细胞膜表面脂蛋白基因p46,通过序列比对和系统性的引物筛选设计了exo探针及其对应的重组酶介导的等温扩增(RAA)技术引物对,建立了Mhp实时荧光(real-time)RAA快速检测方法;随后,对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检测,并使用该方法和实时荧光定量PCR(qPCR)对比检测临床样本。结果显示,该方法与猪链球菌、肺炎克雷伯氏菌、猪格拉瑟氏菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌均无交叉反应,特异性好;Mhp real-time RAA及其可视化方法的检测敏感性分别为18和29 copies/μL(95%置信区间),敏感性强;组内和组间重复性试验变异系数均小于8.0%,重复性好;对108份猪临床样本的检测结果显示,该方法及其可视化方法与Mhp qPCR方法的符合率分别为98.15%和99.07%。本试验所建立Mhp real-time RAA方法可以通过便捷式蓝光仪器实现结果的可视化,更适用于资源匮乏的诊断实验室和基层现场,为MPS的防控提供了技术手段。 展开更多
关键词 重组酶介导的等温扩增技术 猪肺炎支原体 实时荧光定量pcr 快速检测
在线阅读 下载PDF
食源性致病菌多重实时荧光PCR检测扩增内标的构建及评价 被引量：8
2
作者 索标 滕要辉 +3 位作者 艾志录 王娜 谢新华 潘治利 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期148-151,共4页
多重实时荧光PCR在食源性致病菌检测中具有重要的作用,扩增内标(IAC)可用来指示其检测过程中可能出现的假阴性检测结果。采用来源于人类腺病毒基因的一段序列设计IAC,并对其检测特异性、扩增效率以及与目的致病菌基因组DNA的抗干扰扩增... 多重实时荧光PCR在食源性致病菌检测中具有重要的作用,扩增内标(IAC)可用来指示其检测过程中可能出现的假阴性检测结果。采用来源于人类腺病毒基因的一段序列设计IAC,并对其检测特异性、扩增效率以及与目的致病菌基因组DNA的抗干扰扩增能力进行了评估。结果表明,本IAC引物在供试菌株中均没有非特异性扩增结果,扩增效率达99.44%,而且对供试沙门氏菌(Salmonella spp.)、大肠杆菌O157:H7(Escherichiacoli O157:H7)以及单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)的多重实时荧光PCR扩增没有任何干扰,在食源性致病菌多重检测技术的建立中具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 扩增内标 多重实时荧光pcr 食源性致病菌
在线阅读 下载PDF
荧光定量PCR和环介导等温扩增方法检测隐球菌CAP10基因的比较研究 被引量：6
3
作者 韩慧 胡子有 吴炳义 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期817-820,共4页
目的建立荧光定量PCR和环介导等温扩增技术(LAMP)检测隐球菌荚膜相关蛋白基因(CAP10)的方法,并比较和评价两种方法的优缺点。方法针对新型隐球菌CAP10基因序列,使用在线软件设计引物,并构建质粒标准品,优化反应条件后用荧光定量PCR和LAM... 目的建立荧光定量PCR和环介导等温扩增技术(LAMP)检测隐球菌荚膜相关蛋白基因(CAP10)的方法,并比较和评价两种方法的优缺点。方法针对新型隐球菌CAP10基因序列,使用在线软件设计引物,并构建质粒标准品,优化反应条件后用荧光定量PCR和LAMP两种方法检测定量的质粒,分析其敏感性和特异性,并检测临床标本。结果荧光定量PCR检测CAP10质粒的敏感性为6.8×101拷贝,LAMP方法的敏感性为6.8×103拷贝,PCR检测阳性率比LAMP方法高。两种方法特异性好,对脑膜炎奈瑟菌、白色念珠菌、热带念珠菌、黄曲霉、黑曲霉和大肠埃希菌的检测结果均为阴性。结论成功建立了检测CAP10基因的荧光定量PCR方法敏感性和特异性高,但是需要特殊仪器;LAMP方法敏感性较低,但其操作简单,无需特殊仪器和设备,加入核酸染料即能观察结果。两者均适用于新型隐球菌感染的检测。 展开更多
关键词 荧光定量pcr 环介导等温扩增技术 新型隐球菌 CAP10
在线阅读 下载PDF
等位基因特异性引物和TaqMan-MGB探针双抑制野生等位基因扩增的实时荧光定量PCR检测JAK2V617F突变率 被引量：2
4
作者 梁国威 邵冬华 +1 位作者 何美琳 曹清芸 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1486-1491,共6页
本研究建立在外周血基因组DNA中定量检测JAK2V617F突变率的荧光定量PCR检测方法并探讨其临床应用价值。在实时荧光定量PCR分析系统中,应用等位基因突变引物和等位基因野生TaqMan-MGB探针共同抑制JAK2V617F野生等位基因扩增,从而特异性... 本研究建立在外周血基因组DNA中定量检测JAK2V617F突变率的荧光定量PCR检测方法并探讨其临床应用价值。在实时荧光定量PCR分析系统中,应用等位基因突变引物和等位基因野生TaqMan-MGB探针共同抑制JAK2V617F野生等位基因扩增,从而特异性地扩增JAK2V617F突变等位基因。通过测定不同JAK2V617F突变率标准品及其循环阈值(Ct值),建立JAK2V617F突变率定量测定方法,并对89例表观健康人外周血基因组DNA中JAK2V617F突变率进行检测。结果表明,建立的方法定量检测JAK2V617F突变率的下限为0.1%,检测JAK2V617F突变率的批内、批间平均变异率分别为4.1%和6.1%。对89例表观健康人外周血基因组DNA中JAK2V617F突变率检测显示,其中2例为JAK2V617F阳性,突变率分别为0.64%和0.98%。结论:建立的JAK2V617F突变率定量检测方法具有检测灵敏度高和重复性好的特性,适合骨髓增殖性疾病的诊断及疾病进程和疗效监测。本方法检测原理可用于各种单碱基突变率的检测,具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 JAK2V617F突变 骨髓增殖性疾病 实时荧光定量pcr 等位基因特异性引物 TAQMAN-MGB探针 双抑 制扩增 野生等位基因
在线阅读 下载PDF
6种非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测试剂盒的比对
5
作者 张倩 李梦莹 +2 位作者 尹清清 王廉 苏志鹏 《中国动物检疫》 2025年第9期96-103,117,共9页
为评估不同荧光定量PCR试剂盒对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的检测性能,以ASFV P72基因假病毒核酸质控品为标准物质,系统比较了6种试剂盒(A—F)的线性相关系数(R2)、扩增效率(E)、检出限(LOD)、分析特异性及反应条件... 为评估不同荧光定量PCR试剂盒对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的检测性能,以ASFV P72基因假病毒核酸质控品为标准物质,系统比较了6种试剂盒(A—F)的线性相关系数(R2)、扩增效率(E)、检出限(LOD)、分析特异性及反应条件等指标。结果显示:6种试剂盒的R2均大于0.980,LOD为3.8~60.8 copies/μL,与猪场常见病毒核酸均无交叉反应;E分别为88.74%、90.23%、75.41%、82.72%、88.16%、91.76%,仅B与F试剂盒为90%~110%;在LOD重复性试验(n=20)中,A、B、D、E试剂盒检出率均大于95%,而C、F试剂盒分别仅为50%和65%。此外,各试剂盒在检测时长(56~84 min)和模板添加量(5或10μL)方面存在差异。结果表明,6种试剂盒均具有良好的线性关系、分析特异性,但在E、LOD及LOD重复性方面存在一定差异。建议兽医实验室在使用试剂盒前对其性能进行科学评估。本研究为养殖场和兽医实验室选择ASFV荧光定量PCR检测试剂盒提供了参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 荧光定量pcr 性能比对 检出限 扩增效率
在线阅读 下载PDF
荧光PCR扩增相关技术 被引量：8
6
作者 张亚旭 刘紫烟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期890-899,共10页
利用荧光PCR(FPCR)技术扩增DNA是现代生物学研究的重要内容。本文以FPCR的发明为起始,以其主要的发展历程为主线,介绍和阐述了实时定量式PCR(QPCR,包括染料法、水解探针法及其衍生种类、划分为分子信标和阴阳探针等类型的杂交探针法、... 利用荧光PCR(FPCR)技术扩增DNA是现代生物学研究的重要内容。本文以FPCR的发明为起始,以其主要的发展历程为主线,介绍和阐述了实时定量式PCR(QPCR,包括染料法、水解探针法及其衍生种类、划分为分子信标和阴阳探针等类型的杂交探针法、染料熔解曲线法和探针熔解曲线法)与数字式PCR(DPCR,主要是芯片式DPCR,cdPCR和微液滴DPCR,ddPCR)这2代阶段性方法的原理、要点、设计技巧及实际运用等,总结其主要应用领域与局限性,对比不同类型各自的特点,并对未来的发展进行展望。 展开更多
关键词 荧光pcr(fpcr)扩增 实时定量式pcr(Qpcr) 熔解曲线 数字式pcr(Dpcr)
在线阅读 下载PDF
生鲜猪肉中含扩增内标的沙门氏菌Real-time PCR检测方法的建立 被引量：7
7
作者 姚大伟 叶可萍 +2 位作者 江芸 徐幸莲 周光宏 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期880-885,共6页
建立含扩增内标的生鲜猪肉中沙门氏菌Real-time PCR检测方法,以提高检测的准确性。根据沙门氏菌ttrBCA基因设计引物和探针,利用犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因构建和目标基因相同引物的扩增内标,并对退火温度和引物、探针的浓度进行优化,建... 建立含扩增内标的生鲜猪肉中沙门氏菌Real-time PCR检测方法,以提高检测的准确性。根据沙门氏菌ttrBCA基因设计引物和探针,利用犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因构建和目标基因相同引物的扩增内标,并对退火温度和引物、探针的浓度进行优化,建立含扩增内标的Real-time PCR检测方法,用该方法对人工污染生鲜猪肉样品进行检测。结果显示,该方法对19株非沙门氏菌检测结果均为阴性,对36株沙门氏菌检测结果均为阳性,特异性较好,热学裂解制备DNA模板法检测灵敏度达100 CFU/ml,试剂盒提取DNA制备模板法检测灵敏度达1μl2.66拷贝。在25μl反应体系中加入扩增内标103拷贝不影响目标基因的扩增,该方法能在12 h内对人工污染沙门氏菌的肉样做出检测。该方法不仅可快速检测生鲜猪肉中的沙门氏菌,同时避免了假阳性现象的产生。 展开更多
关键词 猪肉 沙门氏菌 实时荧光定量pcr 扩增内标
在线阅读 下载PDF
STR基因座荧光标记复合扩增检测及其法医学应用 被引量：2
8
作者 李英碧 吴谨 +4 位作者 侯一平 张霁 廖淼 张林 陈国弟 《法医学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期96-99,共4页
目的建立荧光标记复合扩增检测4个STR基因座的方法,应用于法医学亲权鉴定与个人识别。方法用6-FAM标记D3S1754引物,HEX标记D4S2366和D12S375引物,TMR标记D1S549引物,PCR复合扩增,310基因分析仪电泳自动收集电泳结果数据,GeneScanAnalysi... 目的建立荧光标记复合扩增检测4个STR基因座的方法,应用于法医学亲权鉴定与个人识别。方法用6-FAM标记D3S1754引物,HEX标记D4S2366和D12S375引物,TMR标记D1S549引物,PCR复合扩增,310基因分析仪电泳自动收集电泳结果数据,GeneScanAnalysisSoftware3.7NT计算扩增产物片段相对大小,Genotyper誖3.7NT软件进行样本基因型分型。将该方法应用于法医学亲权鉴定与个人识别。结果建立了荧光标记复合扩增检测4个STR基因座基因型的方法,具有良好的稳定性和较好的灵敏度,分型结果准确。结论研究建立的方法操作简便,分型结果稳定可靠,可用于遗传多态性研究和法医学亲权鉴定与个人识别。 展开更多
关键词 STR基因座 荧光标记 法医学应用 检测 310基因分析仪 GENESCAN Analysis pcr复合扩增 个人识别 亲权鉴定 分型结果 基因型分型 多态性研究 自动收集 扩增产物 方法应用 引物 HEX TMR 灵敏度 稳定性 电泳
在线阅读 下载PDF
实时荧光定量PCR技术的操作实践 被引量：42
9
作者 杨怡姝 孙晓娜 +3 位作者 王小利 沈思嗣 李泽琳 曾毅 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2011年第7期15-19,共5页
采用Mx3000P型实时荧光定量PCR仪,以SYBRGreen I法相对定量技术为例,设计1例检测针对HIV-1 vpr基因的特异性siRNA基因沉默效果的实验。介绍了实时荧光定量PCR技术上机前样本的制备过程、检测程序及相关参数的设置方法等操作流程;结合... 采用Mx3000P型实时荧光定量PCR仪,以SYBRGreen I法相对定量技术为例,设计1例检测针对HIV-1 vpr基因的特异性siRNA基因沉默效果的实验。介绍了实时荧光定量PCR技术上机前样本的制备过程、检测程序及相关参数的设置方法等操作流程;结合熔解曲线、扩增曲线进行结果分析;强调了实验整体设计、引物设计与PCR反应体系的优化和内参的恰当选择在实时荧光定量PCR技术中的重要性。 展开更多
关键词 荧光定量pcr SYBRGreenI 扩增曲线 熔解曲线
在线阅读 下载PDF
水稻低丰度表达基因OsAMT1;3实时荧光定量PCR方法的建立及其应用 被引量：17
10
作者 孙淑斌 李宝珍 +1 位作者 胡江 徐国华 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期8-12,共5页
采用实时荧光定量PCR技术，通过使用特异引物，对水稻中的低丰度表达基因OsAMT1；3进行了转录水平上的定量分析，成功建立了可检测低丰度表达基因的SYBR Green实时荧光定量PCR技术平台。该方法具有很好的准确性和实用性。获得的荧光定量... 采用实时荧光定量PCR技术，通过使用特异引物，对水稻中的低丰度表达基因OsAMT1；3进行了转录水平上的定量分析，成功建立了可检测低丰度表达基因的SYBR Green实时荧光定量PCR技术平台。该方法具有很好的准确性和实用性。获得的荧光定量PCR扩增曲线，基线平整，指数区明显，斜率大且固定；线性范围广，17～36个循环都能测出；稳定性、重复性好，变异系数仅为0．47％；标准曲线表明，循环阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系，可对基因表达进行相对定量；缺氮条件下OsAMT1；3与纯NH4^＋处理相比表达量增加4倍以上。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr 扩增曲线 标准曲线 铵转运蛋白基因 基因表达 研究方法
在线阅读 下载PDF
环介导等温扩增技术快速检测猪细小病毒的试验 被引量：6
11
作者 黄书林 付萍 +5 位作者 李佳禾 张跃伟 蒋菲 张侃 陈会玲 吴文学 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第10期3-6,共4页
利用环介导等温核酸扩增技术(LAMP),建立了一种灵敏、特异、快速的猪细小病毒(PPV)检测方法。该方法针对猪细小病毒非结构蛋白(NS-1)基因保守区域设计6条特异引物,在63℃的等温条件下45min即可完成反应。最低检测限量为10拷贝的PPV目的... 利用环介导等温核酸扩增技术(LAMP),建立了一种灵敏、特异、快速的猪细小病毒(PPV)检测方法。该方法针对猪细小病毒非结构蛋白(NS-1)基因保守区域设计6条特异引物,在63℃的等温条件下45min即可完成反应。最低检测限量为10拷贝的PPV目的基因,比常规聚合酶链式反应(PCR)方法敏感100倍,并具有良好的特异性。以钙黄绿素和Mn2+作为荧光指示剂,可快速、直观判定反应结果。通过对149份临床样品进行检测比较,LAMP与PCR检出阳性样本数分别为33份和27份,表明LAMP方法阳性检出率高于PCR。 展开更多
关键词 环介导等温扩增(LAMP) 猪细小病毒(PPV) pcr 荧光指示剂
在线阅读 下载PDF
SYBR荧光实时定量PCR检测非小细胞肺癌组织与外周血中RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平 被引量：8
12
作者 陈建 李敏伟 +2 位作者 张国兵 李菌 王临润 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期628-633,共6页
目的:建立荧光实时定量PCR技术,检测非小细胞肺癌组织与外周血RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平。方法:分别构建RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin质粒标准品,以SYBR荧光实时定量PCR分析,制备标准曲线,对非小细胞肺癌组织与外周血中R... 目的:建立荧光实时定量PCR技术,检测非小细胞肺癌组织与外周血RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平。方法:分别构建RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin质粒标准品,以SYBR荧光实时定量PCR分析,制备标准曲线,对非小细胞肺癌组织与外周血中RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin的mRNA进行检测。结果:标准曲线呈良好的线性关系。标准品的熔解曲线均呈单峰,特异性良好,说明基本无非特异性扩增。结论:所建SYBR荧光实时定量PCR方法操作简便,费用低,特异性好,准确度、灵敏度高,为后续研究构建了理想的平台。 展开更多
关键词 SYBR 荧光实时定量 pcr检测 非小细胞 肺癌组织 外周血 RRM1 ERCC1 BRCA1基因 表达水平 Detection quantitative real-time peripheral blood lung cancer cell gene expression 特异性扩增 管家基因 标准曲线
在线阅读 下载PDF
应用荧光PCR技术检测单细胞β地中海贫血基因 被引量：3
13
作者 邓捷 庄广伦 +6 位作者 彭文林 周灿权 梁晓燕 詹前胜 孙宏钰 陈勇 曾艳红 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期131-134,共4页
【目的】应用荧光PCR技术检测单细胞β地中海贫血(β地贫)基因,并与巢式PCR相比较,探讨荧光PCR应用于β地贫植入前诊断中的可行性。【方法】获取β地贫41-42突变杂合子单个淋巴细胞,用巢式PCR及荧光PCR技术检测β珠蛋白基因。【结果】16... 【目的】应用荧光PCR技术检测单细胞β地中海贫血(β地贫)基因,并与巢式PCR相比较,探讨荧光PCR应用于β地贫植入前诊断中的可行性。【方法】获取β地贫41-42突变杂合子单个淋巴细胞,用巢式PCR及荧光PCR技术检测β珠蛋白基因。【结果】160个淋巴细胞进行荧光PCR扩增,β地贫基因的平均扩增效率为92.5%,等位基因脱扣(ADO)率为8.8%;240个淋巴细胞进行巢式PCR扩增,β地贫基因的扩增效率为91.7%,ADO率为15.8%。两种方法的扩增效率没有统计学差异,但荧光PCR的ADO发生率显著低于巢式PCR的ADO发生率(P<0.05)。【结论】本研究建立的单细胞荧光PCR技术具有较高的扩增效率,可显著降低ADO发生率,可望用于β地贫的临床植入前诊断。 展开更多
关键词 荧光pcr技术 单细胞 Β地中海贫血 基因扩增 等位基因脱扣 胚胎植入 遗传学诊断
在线阅读 下载PDF
基于实时荧光定量反转录PCR技术的动物miRNA表达分析策略 被引量：3
14
作者 宋嘉哲 孙福伯 +1 位作者 庄开歌 薛恺 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期109-113,共5页
在人体内有约60%的蛋白质编码基因受到到miRNA调控。近年来,miRNA参与调控的与动物生长相关的细胞周期、发育、分化和新陈代谢等多种生物学过程也越来越受到关注。目前针对miRNA表达检测的常用方法有很多,其中基于反转录PCR(RT-PCR)的... 在人体内有约60%的蛋白质编码基因受到到miRNA调控。近年来,miRNA参与调控的与动物生长相关的细胞周期、发育、分化和新陈代谢等多种生物学过程也越来越受到关注。目前针对miRNA表达检测的常用方法有很多,其中基于反转录PCR(RT-PCR)的放大检测技术是应用范围最广,实施手段最灵活的一种研究策略。主要包括miRNA的全定量PCR法(miR-Q)、基于茎环引物的实时荧光定量PCR法、Poly(A)加尾性通用反转录法、miRNA表达谱的高通量RT-PCR分析和miRNA扩增谱系(mRAP)法。作者对这几种基于实时荧光定量RT-PCR技术的动物miRNA表达分析策略分别进行了介绍,对其原理、方法和应用范畴进行了概括性总结。 展开更多
关键词 动物miRNA 实时荧光定量pcr miRNA的全定量pcr 茎-环引物 miRNA扩增谱系
在线阅读 下载PDF
环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测草鱼呼肠孤病毒方法的建立 被引量：6
15
作者 刘露 李伟哲 肖勤 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期99-104,共6页
将环介导等温扩增技术(LAMP)与横向流动试纸条(LFD)联合建立一种快速检测草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的LAMP-LFD检测方法,并与实时荧光定量PCR(qPCR)技术进行对比。以GCRV S8片段为检测靶标,设计6条特异性引物(FIP/BIP,F3/B3,LF/LB),其中上游... 将环介导等温扩增技术(LAMP)与横向流动试纸条(LFD)联合建立一种快速检测草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的LAMP-LFD检测方法,并与实时荧光定量PCR(qPCR)技术进行对比。以GCRV S8片段为检测靶标,设计6条特异性引物(FIP/BIP,F3/B3,LF/LB),其中上游引物FIP以生物素(Biotin,BIO)标记,进行LAMP反应条件优化,同时设计1条羟基荧光素(Fluorescein amidite,FAM)标记的探针,用于LAMP反应产物的LFD检测。结果表明:LAMP最佳反应温度为63℃,反应时间40min。从LAMP扩增到LFD结果判读共需50min,比qPCR检测缩短近1h。LAMP-LFD与qPCR均可特异性检出GCRV,针对同一重组质粒的检测,LAMP-LFD的检测限为970fg,qPCR的检测限为97fg,虽然LAMP-LFD的检测灵敏度低于qPCR 10倍,但该方法操作简单,仪器设备依赖性低,可快速、特异地检测出GCRV,有望成为GCRV现场快速检测的常规技术手段。 展开更多
关键词 横向流动试纸条 环介导等温扩增技术 草鱼呼肠孤病毒 实时荧光定量pcr
在线阅读 下载PDF
裸大麦PKABA1基因实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：2
16
作者 吴昆仑 邓晓青 姚晓华 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第12期16-18,共3页
根据GenBank上小麦(M94726)、大麦(AB058924)和黑麦(DQ295068)的蛋白激酶外显子3的编码基因的同源序列比对,设计基因PKABA1的引物,建立了用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测裸大麦PKABA1基因在不同低温处理时间下mRNA表达量的方法。以... 根据GenBank上小麦(M94726)、大麦(AB058924)和黑麦(DQ295068)的蛋白激酶外显子3的编码基因的同源序列比对,设计基因PKABA1的引物,建立了用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测裸大麦PKABA1基因在不同低温处理时间下mRNA表达量的方法。以样本循环数为纵坐标、以稀释倍数的对数为横坐标建立标准曲线,其相关系数(r2)达到了0.996,扩增效率99%,熔解曲线分析结果显示产物为特异的单峰,退火温度为(80.5±0.5)℃。结果表明,裸大麦PKABA1基因在不同低温处理时间下的表达量稳定,其实时荧光定量PCR法扩增效率高、特异性强、线性范围广、检测周期短,为PKABA1基因作为内参基因进行裸大麦功能基因表达的定量分析奠定了基础。 展开更多
关键词 裸大麦 实时荧光定量 pcr扩增 标准曲线 PKABA1基因
在线阅读 下载PDF
环介导等温扩增技术在现场工作中的应用进展 被引量：1
17
作者 钟田雨 胡蓉 江丽霞 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第13期2225-2227,共3页
核酸扩增技术是病原微生物检测和遗传性疾病诊断的重要武器，其中常规PCR和实时荧光定量PCR已在临床检验中得到广泛的应用，但这些技术操作复杂，对实验室人员、仪器和环境的要求较高。无法在基层和现场工作中灵活使用。环介导等温扩增... 核酸扩增技术是病原微生物检测和遗传性疾病诊断的重要武器，其中常规PCR和实时荧光定量PCR已在临床检验中得到广泛的应用，但这些技术操作复杂，对实验室人员、仪器和环境的要求较高。无法在基层和现场工作中灵活使用。环介导等温扩增（100p—mediatedisothermalamplification．LAMP）是日本学者Notomi等于2000年发明的核酸扩增技术。与PCR技术相比，具有操作简单快速、对仪器和样本质量要求低等特点．尤其适用于现场工作使用。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 现场工作 实时荧光定量pcr 核酸扩增技术 技术操作 微生物检测 实验室人员 pcr技术
在线阅读 下载PDF
荧光定量PCR技术优化及在草莓上的应用 被引量：1
18
作者 张卿 邢宇 +1 位作者 曹庆芹 秦岭 《北京农学院学报》 2016年第4期21-25,共5页
【目的】为优化荧光定量PCR技术体系并在草莓研究中应用。【方法】以二倍体草莓(Fragaria vesca‘Ruegen’)为试材,草莓当中两个β-肌动蛋白基因家族成员Actin1和Actin2为内参基因,对比分析10μL和20μL反应体系条件下荧光定量PCR扩增... 【目的】为优化荧光定量PCR技术体系并在草莓研究中应用。【方法】以二倍体草莓(Fragaria vesca‘Ruegen’)为试材,草莓当中两个β-肌动蛋白基因家族成员Actin1和Actin2为内参基因,对比分析10μL和20μL反应体系条件下荧光定量PCR扩增反应。【结果】内参基因引物组合Actin1的扩增效率等指标优于Actin2;10μL反应体系中的扩增效率等指标优于20μL反应体系;内参基因Actin1在10μL反应体系下是草莓最优的荧光定量PCR技术体系。【结论】优化了草莓荧光定量PCR体系并应用该技术体系检测了草莓CrRLK1Ls家族成员的时空表达情况。 展开更多
关键词 荧光定量pcr 内参基因 草莓 扩增效率 CrRLK1Ls
在线阅读 下载PDF
“突触引物”实时荧光PCR检测端粒酶活性
19
作者 李庆阁 董春升 +1 位作者 汪世溶 梁基选 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期610-613,共4页
为建立一种简便的端粒酶测定方法 ,首先采用高灵敏的核酸染料SYBRGold染色代替放射自显影 ,建立了简便可靠的扩增产物显示方法 .进而合成了端粒酶扩增产物的模拟产物 ,考察了突触引物检测的可行性和灵敏度 .在此基础上 ,建立了检测端粒... 为建立一种简便的端粒酶测定方法 ,首先采用高灵敏的核酸染料SYBRGold染色代替放射自显影 ,建立了简便可靠的扩增产物显示方法 .进而合成了端粒酶扩增产物的模拟产物 ,考察了突触引物检测的可行性和灵敏度 .在此基础上 ,建立了检测端粒酶活性实时荧光PCR .由于突触引物可以有效的降低非特异扩增 ,有效解决了端粒酶活性检测中的非特异产物干扰 。 展开更多
关键词 实时荧光pcr检测 酶活性 端粒酶 突触引物 活性检测 核酸染料 非特异扩增
在线阅读 下载PDF
对流实时荧光定量PCR系统设计 被引量：4
20
作者 翁振宇 闵小平 +2 位作者 王海 卓之豪 葛胜祥 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期130-136,共7页
设计了一种结合实时荧光定量技术和自然对流技术的PCR系统.主要介绍该系统的双通道荧光激发与检测结构及其工作原理,系统中使用光纤作为光路的传输媒介,采用电荷耦合元件(CCD)工业相机采集荧光信号变化,并自行设计电路和软件驱动整套系... 设计了一种结合实时荧光定量技术和自然对流技术的PCR系统.主要介绍该系统的双通道荧光激发与检测结构及其工作原理,系统中使用光纤作为光路的传输媒介,采用电荷耦合元件(CCD)工业相机采集荧光信号变化,并自行设计电路和软件驱动整套系统正常运行.最后通过对梯度稀释的巨细胞病毒(CMV)的基因模板进行扩增,展示了该系统可用于快速扩增和实时定量检测的潜力. 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr 自然对流pcr 双通道 快速扩增
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 4 下一页 到第 页
关于我们 | 版权声明 | 联系我们 | 帮助中心| 意见反馈
主办单位：上海市教育委员会
技术支持：重庆维普资讯有限公司
渝公网安备 50019002500403号
使用帮助 返回顶部