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大鼠细胞外信号调节激酶1基因3'非编码区双荧光素酶报告载体的构建及rno-miR-15b-5p对其活性的影响: 1; 作者罗汉将徐云峰 +2 位作者李晓晓杨予涛徐志卿《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2017年第2期166-172,共7页; 目的以大鼠细胞外信号调节激酶1(ERK1)基因3'非编码区(UTR)为研究对象,构建含有ERK1基因3'UTR区的野生型以及突变型重组双荧光素酶报告载体,通过分析双荧光素酶报告载体的活性,明确rno-miR-15b-5p对报告载体的调节作用。方法采... 展开更多; 关键词 rno-miR-15b-5p 细胞外信号调节激酶1 重叠延伸聚合酶链式反应 pmiR-ERK1 3'UTR pmiR-ERK1-mut 3'UTR 荧光素酶活性检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

5-Azadc和TSA对鸡Nanog基因启动活性及ESC多能性维持的影响被引量：2: 2; 作者张亚妮王颖洁 +7 位作者左其生李东张蕾汤贝贝连超毕瑜林张文慧李碧春《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2176-2184,共9页; 旨在克隆如皋黄鸡Nanog基因启动子,并构建含有双荧光素酶报告基因的表达载体进行启动子活性分析,找出该基因启动子的核心调控区;探索甲基化抑制剂5-Azadc(5-Aza-2′-deoxycytidine)或曲古抑菌素(Trichostatin A,TSA)对Nanog基因启动活... 展开更多; 关键词 NANOG基因启动子 5-Azadc TSA 双荧光素酶活性检测系统; 在线阅读下载PDF 职称材料

小鼠TIE2基因启动子的克隆及转录活性分析被引量：2: 3; 作者陆俊佳袁志刚 +6 位作者许淑茹廖明赖青鸟畅荣妮袁广之侯伟舒伟《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期90-94,共5页; 克隆小鼠TIE2基因的启动子并分析其转录活性。设计并合成引物,以小鼠肝脏组织DNA为模板,巢式PCR扩增小鼠TIE2基因启动子区。将扩增获得的系列截短片段克隆入荧光素酶(Luc)报告基因表达载体pGL3-Basic中,构建系列启动子区转录活性报告质... 展开更多; 关键词 TIE2 启动子双荧光素酶活性检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

人PNRC基因启动子的初步鉴定被引量：3: 4; 作者张艳陈彬 +4 位作者陈敏李渝萍陈健娄桂予周度金《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期278-284,共7页; PNRC(proline-rich nuclear receptor coactivator)是最近发现的一种新的核受体辅活化子,它是以牛类固醇生成因子-1(SF1)作诱饵,利用酵母双杂系统从人乳腺cDNA表达文库中筛选得到的.为了研究人PNRC基因的表达调控机制,在对人PNRC基因的... 展开更多; 关键词富含脯氨酸核受体辅活化子(PNRC) 荧光素酶活性检测启动子鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

鸡Piwil1基因启动子区转录调控元件的初步分析被引量：1: 5; 作者夏明秀常国斌 +8 位作者陈蓉翟飞戴爱琴马腾王洪志徐璐陈静刘璐陈国宏《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1349-1354,共6页; 旨在确定Piwil1基因核心启动子活性调控区,预测转录因子结合位点,并探讨转录因子对家禽Piwil1基因核心启动子活性的影响。通过将Piwil1基因启动子系列缺失片段插入到pGL3-basic载体,构建重组体质粒,将重组体分别转染COS-7和GC-1细胞系,... 展开更多; 关键词 Piwil1基因核心启动子定点突变双荧光素酶活性检测系统 NF-Y; 在线阅读下载PDF 职称材料

靶向鸡Stra8基因的miRNA预测及鉴定: 6; 作者王颖洁左其生 +8 位作者张良良张文慧金晶王飞纪艳芹靳锴何娜娜李碧春张亚妮《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期729-736,共8页; 为克隆如皋黄鸡Stra8基因的3’UTR,寻找靶向Stra8基因的microRNA(miRNA),以鸡精原干细胞的c DNA为模板,根据NCBI数据库Stra8的CDS序列设计引物,通过3’RACE技术克隆Stra8基因的3’UTR,并构建相应的荧光素酶表达载体和突变载体;利用生物... 展开更多; 关键词鸡 MIRNA Stra8 gga-miR-31 双荧光素酶活性检测系统; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大鼠细胞外信号调节激酶1基因3'非编码区双荧光素酶报告载体的构建及rno-miR-15b-5p对其活性的影响: 1; 作者罗汉将徐云峰李晓晓杨予涛徐志卿; 机构首都医科大学基础医学院黄岛出入境检验检疫局; 出处《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2017年第2期166-172,共7页; 基金北京市自然科学基金面上项目(No.7162016) 国家自然科学基金面上项目(No.31271154 No.31171032); 文摘目的以大鼠细胞外信号调节激酶1(ERK1)基因3'非编码区(UTR)为研究对象,构建含有ERK1基因3'UTR区的野生型以及突变型重组双荧光素酶报告载体,通过分析双荧光素酶报告载体的活性,明确rno-miR-15b-5p对报告载体的调节作用。方法采用miRNeasy Mini Kit提取大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的总RNA,以PC12细胞的c DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)将ERK1基因3'UTR克隆到pmiR-RB-Report^(TM) vector中。利用重叠延伸PCR,将ERK1基因3'UTR中的rno-miR-15b-5p潜在的靶序列TGCTGCT分别突变成CGAACGT和GTACACG,并将突变的ERK1基因3'UTR克隆到pmiR-RB-Report^(TM) vector中。结果成功构建了包含ERK1基因3'UTR区的野生型报告载体pmiR-ERK1 3'UTR和突变型报告载体pmiR-ERK1-mut 3'UTR。利用荧光素酶活性检测系统,发现rno-miR-15b-5p mimic可以降低野生型报告载体的活性(P<0.001),但不影响突变型报告载体的活性。结论成功构建ERK1基因3'UTR区野生型和突变型双荧光素酶报告载体,初步证明ERK1基因3'UTR区是rno-miR-15b-5p的结合靶点。; 关键词 rno-miR-15b-5p 细胞外信号调节激酶1 重叠延伸聚合酶链式反应 pmiR-ERK1 3'UTR pmiR-ERK1-mut 3'UTR 荧光素酶活性检测; Keywords rno-miR-15b-5p extracellular signal-regulated kinase 1 overlap polymerase chain reaction pmiR-ERK1 3＇ UTR pmiR-ERK1-mut 3＇ UTR luciferase reporter assay; 分类号 R749.4 [医药卫生—神经病学与精神病学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名5-Azadc和TSA对鸡Nanog基因启动活性及ESC多能性维持的影响被引量：2: 2; 作者张亚妮王颖洁左其生李东张蕾汤贝贝连超毕瑜林张文慧李碧春; 机构扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2176-2184,共9页; 基金国家自然科学基金(31301959 31272429 +3 种基金 31472087) 中国博士后基金((2012M511326)) 江苏高校优势学科建设工程资助项目; 文摘旨在克隆如皋黄鸡Nanog基因启动子,并构建含有双荧光素酶报告基因的表达载体进行启动子活性分析,找出该基因启动子的核心调控区;探索甲基化抑制剂5-Azadc(5-Aza-2′-deoxycytidine)或曲古抑菌素(Trichostatin A,TSA)对Nanog基因启动活性及其ESC体外培养条件下多能性维持的影响,为初步阐明Nanog基因的表达调控机制提供理论依据。PCR扩增Nanog基因不同长度片段的启动子序列,定向克隆至pGL3-basic载体和pEGFP-N1构建重组载体;将重组载体转染DF-1细胞后,48h收集蛋白,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,确定基本转录调控区;将重组载体转染DF-1细胞后添加5-Azadc或TSA对Nanog基因进行诱导表达,并通过双荧光素酶报告基因检测系统,分析其对Nanog基因启动子活性的影响。选取生长至第3代的ESC,培养基中添加最适浓度的5-Azadc和TSA,每隔两天观察细胞,分析其对ESC体外多能性维持的影响,并对诱导至第10天的细胞进行间接免疫荧光检测。结果表明,成功构建3个片段的双荧光素酶报告基因表达载体;双荧光素酶活性检测结果显示,pGL3/1967活性最强;分别添加或者联合添加5-Azadc和TSA均可使Nanog基因的转录活性增强;5-Azadc和TSA诱导对ESC体外培养条件下多能性维持的影响结果显示,诱导6d后,对照组细胞大量分化,细胞克隆无法维持,而5-Azadc和TSA诱导组克隆明显,5-Azadc+TSA联合诱导组细胞克隆数量显著多于对照组;诱导至第10天,对照组细胞完全分化,没有细胞克隆,而诱导组存在大量细胞克隆,联合诱导组克隆数量显著多于其他两组;SSEA-1间接免疫荧光结果显示,对照组没有明显的ESC克隆,而5-Azadc组和联合诱导组细胞克隆明显,综上表明,5-Azadc和TSA可有效地通过提高Nanog基因的表达而维持鸡ESC在体外培养过程中的多能性。; 关键词 NANOG基因启动子 5-Azadc TSA 双荧光素酶活性检测系统; Keywords Nanog promoter 5-Azadc TSA dual luciferase activity system; 分类号 S831.2 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小鼠TIE2基因启动子的克隆及转录活性分析被引量：2: 3; 作者陆俊佳袁志刚许淑茹廖明赖青鸟畅荣妮袁广之侯伟舒伟; 机构广西医科大学细胞生物学与遗传学教研室; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期90-94,共5页; 基金广西自然科学基金项目(2010GXNSFA013155) 广西医科大学青年自然科学基金项目(304228); 文摘克隆小鼠TIE2基因的启动子并分析其转录活性。设计并合成引物,以小鼠肝脏组织DNA为模板,巢式PCR扩增小鼠TIE2基因启动子区。将扩增获得的系列截短片段克隆入荧光素酶(Luc)报告基因表达载体pGL3-Basic中,构建系列启动子区转录活性报告质粒pGL3-TIE2-Luc。报告质粒与内参质粒共转染SVEC4-10、NIH3T3、HUVEC及NIT-1细胞系,48 h后收获细胞检测双荧光素酶的表达情况。构建的pGL3-TIE2-Luc系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA测序分析都显示正确;转染4种细胞系后进行双荧光素酶活性检测的结果表明,TIE2基因启动子区域(-2056-+1)具有较强的转录活性。成功构建小鼠TIE2基因启动子报告质粒,证实TIE2基因上游区域(-2056-+1)具有较强的启动子活性。; 关键词 TIE2 启动子双荧光素酶活性检测; Keywords TIE2 Promoter Dual luciferase assays; 分类号 R346 [医药卫生—基础医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人PNRC基因启动子的初步鉴定被引量：3: 4; 作者张艳陈彬陈敏李渝萍陈健娄桂予周度金; 机构第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期278-284,共7页; 基金国家自然科学基金资助项目(No:30671056 30300126 30370317)~~; 文摘 PNRC(proline-rich nuclear receptor coactivator)是最近发现的一种新的核受体辅活化子,它是以牛类固醇生成因子-1(SF1)作诱饵,利用酵母双杂系统从人乳腺cDNA表达文库中筛选得到的.为了研究人PNRC基因的表达调控机制,在对人PNRC基因的生物信息分析的基础上,采用5′RACE法确定了PNRC基因的转录起始位点,克隆了人PNRC基因的5′侧翼区,并对该区进行功能分析.分别构建了11种含不同长度启动子序列的荧光素酶报告基因表达质粒,将它们瞬时转染HepG2细胞,检测其荧光素酶活性.结果发现,PNRC的5′侧翼区的-323^+27、-323^+57、-123^+57、-123^+27区域的启动子活性显著升高,其中-323^+27区域的启动子活性最高.研究表明,人PNRC基因启动子的最小区域位于PNRC的5′侧翼区的-123^+27区域.; 关键词富含脯氨酸核受体辅活化子(PNRC) 荧光素酶活性检测启动子鉴定; Keywords proline-rich nuclear receptor coactivator （PNRC） luciferase assays promoter characterization; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鸡Piwil1基因启动子区转录调控元件的初步分析被引量：1: 5; 作者夏明秀常国斌陈蓉翟飞戴爱琴马腾王洪志徐璐陈静刘璐陈国宏; 机构扬州大学动物科学与技术学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1349-1354,共6页; 基金国家自然科学基金(31172199) 国家科技支撑计划(2011BAD28B03) 国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2011AA100305); 文摘旨在确定Piwil1基因核心启动子活性调控区,预测转录因子结合位点,并探讨转录因子对家禽Piwil1基因核心启动子活性的影响。通过将Piwil1基因启动子系列缺失片段插入到pGL3-basic载体,构建重组体质粒,将重组体分别转染COS-7和GC-1细胞系,使用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,确定Piwil1基因核心启动子活性调控区,并对调控区进行转录因子结合位点预测;对预测的转录因子NF-Y结合位点进行定点突变,构建重组体质粒,并通过双荧光素酶报告基因检测系统分析其对启动子活性的影响。狼山鸡Piwil1基因的-1 377^-268bp区域在COS-7和GC-1细胞中都有不同程度的启动活性,-221^+1bp启动子活性几乎完全丧失,在-268^-221bp区域有转录因子NF-Y结合位点,定点突变后启动子活性显著下降,认为转录因子NF-Y对启动子活性可能起着重要的调控作用。转录因子NF-Y为Piwil1基因核心启动子区的重要调控元件,为进一步研究Piwil1基因的转录调控机制奠定了理论基础。; 关键词 Piwil1基因核心启动子定点突变双荧光素酶活性检测系统 NF-Y; Keywords Piwil1gene core promoter point mutation Dual-Glo Luciferase Assay System NF-Y; 分类号 S831.2 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名靶向鸡Stra8基因的miRNA预测及鉴定: 6; 作者王颖洁左其生张良良张文慧金晶王飞纪艳芹靳锴何娜娜李碧春张亚妮; 机构扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室; 出处《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期729-736,共8页; 基金国家自然科学基金(31301959) 江苏省自然科学基金(BK20161331) +1 种基金江苏高校优势学科建设工程资助项目; 文摘为克隆如皋黄鸡Stra8基因的3’UTR,寻找靶向Stra8基因的microRNA(miRNA),以鸡精原干细胞的c DNA为模板,根据NCBI数据库Stra8的CDS序列设计引物,通过3’RACE技术克隆Stra8基因的3’UTR,并构建相应的荧光素酶表达载体和突变载体;利用生物学预测软件对靶向Stra8 3’UTR的miRNA进行预测,选择评分最高的miRNA进行慢病毒载体构建;以pRL-TK为内参,分别将miRNA与Stra8 3’UTR荧光素酶表达载体和突变载体共转染DF-1细胞,利用双荧光素酶基因报告系统对miRNA进行活性检测。结果表明,采用3’RACE技术成功克隆Stra8基因的3’UTR;Targetscan生物在线软件预测到靶向Stra8基因的4个特异性较高的miRNA,并成功构建其相应的慢病毒载体;双荧光素酶活性检测结果显示,gga-miR-1a、gga-miR-31、ggamiR-218均可通过3’UTR序列抑制Stra8基因的表达,其中gga-miR-31抑制效果最佳。该结果可为后续深入探讨gga-miR-31介导调控的Stra8基因在雄性生殖细胞分化中的调控网络提供依据。; 关键词鸡 MIRNA Stra8 gga-miR-31 双荧光素酶活性检测系统; Keywords Gallus gallus miRNA StraS gga-miR-31 dual luciferase activity detection; 分类号 S831.2 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	大鼠细胞外信号调节激酶1基因3'非编码区双荧光素酶报告载体的构建及rno-miR-15b-5p对其活性的影响	罗汉将徐云峰李晓晓杨予涛徐志卿	《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心	2017	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	5-Azadc和TSA对鸡Nanog基因启动活性及ESC多能性维持的影响	张亚妮王颖洁左其生李东张蕾汤贝贝连超毕瑜林张文慧李碧春	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2015	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	小鼠TIE2基因启动子的克隆及转录活性分析	陆俊佳袁志刚许淑茹廖明赖青鸟畅荣妮袁广之侯伟舒伟	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2012	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	人PNRC基因启动子的初步鉴定	张艳陈彬陈敏李渝萍陈健娄桂予周度金	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2007	3	在线阅读下载PDF 职称材料
5	鸡Piwil1基因启动子区转录调控元件的初步分析	夏明秀常国斌陈蓉翟飞戴爱琴马腾王洪志徐璐陈静刘璐陈国宏	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2013	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	靶向鸡Stra8基因的miRNA预测及鉴定	王颖洁左其生张良良张文慧金晶王飞纪艳芹靳锴何娜娜李碧春张亚妮	《浙江农业学报》 CSCD 北大核心	2017	0	在线阅读下载PDF 职称材料