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人肝素酶基因正反义荧光真核表达载体的构建及肝癌细胞转染
被引量：
2
1
作者
陈陵
李志宏
+5 位作者
杨仕明
李晶晶
蔡永国
房殿春
罗元辉
王东旭
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期47-49,共3页
目的构建正义和反义人肝素酶绿色荧光蛋白真核共表达载体,并分别转染人低转移肝癌细胞株MHCC97-L及高转移细胞株MHCC97-H和HCCLM6。方法采用基因重组技术,用EcoRⅠ从pcDNA3-Hpa质粒上切下约1.7 kb的人肝素酶全长cDNA片段,然后连入pIRES2...
目的构建正义和反义人肝素酶绿色荧光蛋白真核共表达载体,并分别转染人低转移肝癌细胞株MHCC97-L及高转移细胞株MHCC97-H和HCCLM6。方法采用基因重组技术,用EcoRⅠ从pcDNA3-Hpa质粒上切下约1.7 kb的人肝素酶全长cDNA片段,然后连入pIRES2-EGFP质粒的EcoRⅠ酶切位点上,经BamHⅠ酶切鉴定出正义和反义表达载体,并进一步测序确认。用脂质体法将肝素酶正义真核表达载体转入人低转移肝癌细胞株MHCC97-L,反义真核表达载体转入人高转移肝癌细胞株MHCC97-H和HCCLM6,24 h后荧光倒置显微镜下检测转染结果。结果经BamHⅠ酶切后,正义质粒形成5.3 kb和1.7 kb两条DNA片段,而反义重组质粒为6.5 kb和0.5 kb两条DNA片段,与理论计算值完全一致;测序结果进一步确认了方向的正确性。转染成功的肝癌细胞在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光。结论成功构建了人肝素酶的正、反义真核表达载体,并成功转染人低、高转移肝癌细胞株,为进一步研究正、反义肝素酶基因转染对肝癌细胞的转移能力的影响奠定了基础。
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关键词
肝素酶
荧光真核表达载体
转染
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职称材料
碱性成纤维细胞生长因子真核荧光表达载体的构建
2
作者
许予明
马兴荣
+4 位作者
宋波
秦洁
唐洲平
赵国强
张苏明
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2004年第4期578-581,共4页
目的 :构建可在真核细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的真核表达载体 ,为进一步开展bFGF基因治疗缺血性脑血管疾病奠定基础。方法 :①采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型 ,取缺血灶...
目的 :构建可在真核细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的真核表达载体 ,为进一步开展bFGF基因治疗缺血性脑血管疾病奠定基础。方法 :①采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型 ,取缺血灶周围脑组织经逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增bFGF基因 ;②将bFGFDNA克隆到pGEM TEasy质粒 ,经菌落PCR和HindⅢ和EcoRI双酶切鉴定 ;③然后将bFGFDNA亚克隆到pEGFP N3质粒 ;通过抗性基因筛选阳性克隆 ,经菌落PCR、酶切和测序鉴定。结果 :菌落PCR、酶切和DNA序列鉴定均证实插入片段与GenBank报道的bFGF基因序列一致。结论 :经RT
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关键词
碱性成纤维细胞生长因子
逆转录聚合酶链反应
荧光真核表达载体
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职称材料
美国《化学文摘》收录2005年《眼科新进展》论文目录(三)
3
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2010年第4期389-389,共1页
38 张自峰，捌健，惠延年，张健，刘燕，刘新平，等．人MRG15基因荧光真核表达载体的构建及其在培养人晶状体上皮细胞的表达[J]．眼科新进展，2005，25（3）：212—215.
关键词
《眼科新进展》
《化学文摘》
人晶状体上皮细胞
荧光真核表达载体
目录
论文
美国
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职称材料
题名
人肝素酶基因正反义荧光真核表达载体的构建及肝癌细胞转染
被引量：
2
1
作者
陈陵
李志宏
杨仕明
李晶晶
蔡永国
房殿春
罗元辉
王东旭
机构
第三军医大学西南医院全军消化内科中心
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期47-49,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30200123)~~
文摘
目的构建正义和反义人肝素酶绿色荧光蛋白真核共表达载体,并分别转染人低转移肝癌细胞株MHCC97-L及高转移细胞株MHCC97-H和HCCLM6。方法采用基因重组技术,用EcoRⅠ从pcDNA3-Hpa质粒上切下约1.7 kb的人肝素酶全长cDNA片段,然后连入pIRES2-EGFP质粒的EcoRⅠ酶切位点上,经BamHⅠ酶切鉴定出正义和反义表达载体,并进一步测序确认。用脂质体法将肝素酶正义真核表达载体转入人低转移肝癌细胞株MHCC97-L,反义真核表达载体转入人高转移肝癌细胞株MHCC97-H和HCCLM6,24 h后荧光倒置显微镜下检测转染结果。结果经BamHⅠ酶切后,正义质粒形成5.3 kb和1.7 kb两条DNA片段,而反义重组质粒为6.5 kb和0.5 kb两条DNA片段,与理论计算值完全一致;测序结果进一步确认了方向的正确性。转染成功的肝癌细胞在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光。结论成功构建了人肝素酶的正、反义真核表达载体,并成功转染人低、高转移肝癌细胞株,为进一步研究正、反义肝素酶基因转染对肝癌细胞的转移能力的影响奠定了基础。
关键词
肝素酶
荧光真核表达载体
转染
Keywords
heparanase
fluorescent eukaryotic expression vector
transfection
分类号
R394.33 [医药卫生—医学遗传学]
R394.2 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
碱性成纤维细胞生长因子真核荧光表达载体的构建
2
作者
许予明
马兴荣
宋波
秦洁
唐洲平
赵国强
张苏明
机构
华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科
郑州大学第一附属医院神经内科
郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2004年第4期578-581,共4页
基金
河南省医学科技创新人才工程项目 0 1170 3 19
文摘
目的 :构建可在真核细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的真核表达载体 ,为进一步开展bFGF基因治疗缺血性脑血管疾病奠定基础。方法 :①采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型 ,取缺血灶周围脑组织经逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增bFGF基因 ;②将bFGFDNA克隆到pGEM TEasy质粒 ,经菌落PCR和HindⅢ和EcoRI双酶切鉴定 ;③然后将bFGFDNA亚克隆到pEGFP N3质粒 ;通过抗性基因筛选阳性克隆 ,经菌落PCR、酶切和测序鉴定。结果 :菌落PCR、酶切和DNA序列鉴定均证实插入片段与GenBank报道的bFGF基因序列一致。结论 :经RT
关键词
碱性成纤维细胞生长因子
逆转录聚合酶链反应
荧光真核表达载体
Keywords
basic fibroblast growth factor
reverse transcription PCR
fluorescent eukaryotic cell expression vector
分类号
R743 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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职称材料
题名
美国《化学文摘》收录2005年《眼科新进展》论文目录(三)
3
出处
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2010年第4期389-389,共1页
文摘
38 张自峰，捌健，惠延年，张健，刘燕，刘新平，等．人MRG15基因荧光真核表达载体的构建及其在培养人晶状体上皮细胞的表达[J]．眼科新进展，2005，25（3）：212—215.
关键词
《眼科新进展》
《化学文摘》
人晶状体上皮细胞
荧光真核表达载体
目录
论文
美国
分类号
R77-55 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人肝素酶基因正反义荧光真核表达载体的构建及肝癌细胞转染
陈陵
李志宏
杨仕明
李晶晶
蔡永国
房殿春
罗元辉
王东旭
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
碱性成纤维细胞生长因子真核荧光表达载体的构建
许予明
马兴荣
宋波
秦洁
唐洲平
赵国强
张苏明
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2004
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
美国《化学文摘》收录2005年《眼科新进展》论文目录(三)
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2010
0
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职称材料
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