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血清4型禽腺病毒POCT荧光微球免疫层析检测方法的建立 被引量：3
1
作者 邵颖 肖福泉 +4 位作者 王丽丽 龚柳菲 宋祥军 涂健 祁克宗 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第5期1298-1305,共8页
为了迅速且便利地判定血清4型禽腺病毒(FAdV-4),设计引物进行扩增,构建重组载体,原核表达的融合蛋白乳化后动物免疫得到多克隆抗体,用Western Blot检测,最后建立即时检验(POCT)荧光微球免疫层析试纸条,并进行初步应用。用POCT荧光微球... 为了迅速且便利地判定血清4型禽腺病毒(FAdV-4),设计引物进行扩增,构建重组载体,原核表达的融合蛋白乳化后动物免疫得到多克隆抗体,用Western Blot检测,最后建立即时检验(POCT)荧光微球免疫层析试纸条,并进行初步应用。用POCT荧光微球免疫层析试纸条检测不同浓度的FAdV-4病毒液及临床阳性样本,结果表明,用POCT荧光微球免疫层析试纸条15 min可以检测出结果,且检测出阳性,与临床诊断结果相符。建立的POCT荧光微球免疫层析检测FAdV-4的方法,特异性良好,操作简单且便于携带,检测效率高,有利于基层兽医临床检测。 展开更多
关键词 FAdV-4 hexon基因 原核表达 多克隆抗体 荧光微球免疫层析
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猪流行性腹泻病毒时间分辨荧光免疫层析检测方法的建立 被引量：8
2
作者 王华俊 赵雪丽 +5 位作者 闫若潜 谢彩华 刘光辉 马震原 王淑娟 房大学 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期40-45,共6页
为建立一种快速、定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)时间分辨荧光免疫层析检测方法(TRFIA),本研究采用杂交瘤技术制备了抗PEDV N蛋白特异性单克隆抗体(MAb)5E6和1B7,将MAb 5E6与荧光微球偶联包被结合垫,将MAb 1B7和兔抗鼠IgG抗体分别包被... 为建立一种快速、定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)时间分辨荧光免疫层析检测方法(TRFIA),本研究采用杂交瘤技术制备了抗PEDV N蛋白特异性单克隆抗体(MAb)5E6和1B7,将MAb 5E6与荧光微球偶联包被结合垫,将MAb 1B7和兔抗鼠IgG抗体分别包被硝酸纤维素膜作为检测线和质控线制备PEDV荧光微球免疫层析试纸条。优化了标记MAb 5E6、包被MAb 1B7的反应条件,并对其性能进行评价。结果显示,10μL 1%浓度的荧光微球标记MAb 5E6的量为18μg,MAb 1B7的包被浓度为1.2 mg/mL,最佳检测时间为点样后15 min;该方法与CSFV、PRRSV、TGEV、PDCoV及PRV Batha-K61株等均无交叉反应,特异性强;对PEDV的检测下限为389699.7 TCID50/0.1 mL,敏感性较高;对PEDV检测的线性范围为24940778.9 TCID50/0.1 mL~389699.7 TCID50/0.1 mL,线性范围较宽;批内和批间变异系数分别为8.76%、10.53%,重复性较好;试纸条在4℃和室温至少保存8个月,37℃则可保存10d,稳定性较好。该TRFIA试纸条与PEDV荧光定量PCR(FQ-PCR)平行检测160份疑似发病猪肛门拭子或小肠内容物样品。结果显示,该试纸条检测出76份阳性样品,84份阴性样品;FQ-PCR法检测出81份阳性样品,79份阴性样品,二者的总符合率为90.63%;经SPSS 22统计软件分析结果显示,K值为0.813,二者检测结果的一致性较高。本研究建立了一种简单、快速、灵敏和特异的基于MAb的TRFIA,为PEDV的现场检测提供了一种新方法。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 荧光微球免疫层析 单克隆抗体 试纸条
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禽白血病病毒p27蛋白多克隆抗体的制备及POCT检测方法的建立
3
作者 邵颖 黄燕 +4 位作者 杨艳 龚柳菲 宋祥军 涂健 祁克宗 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2022年第6期201-209,共9页
旨在制备禽白血病病毒p27蛋白多克隆抗体和建立一种简便准确的禽白血病病毒的检测方法,通过扩增禽白血病病毒p27目的基因,构建pGEX-6p-1-p27、pET-32a-p27蛋白原核表达载体。将蛋白分别免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔,制备鼠源多克隆抗体... 旨在制备禽白血病病毒p27蛋白多克隆抗体和建立一种简便准确的禽白血病病毒的检测方法,通过扩增禽白血病病毒p27目的基因,构建pGEX-6p-1-p27、pET-32a-p27蛋白原核表达载体。将蛋白分别免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔,制备鼠源多克隆抗体和兔源多克隆抗体,制备鼠源多克隆抗体偶联荧光微球,利用三维喷点平台将鼠源多克隆抗体IgG喷涂到样品垫;用划膜仪将纯化后的兔源多克隆抗体IgG和山羊抗兔抗体稀释液划到NC膜上,作为T线和C线,进行试纸条的组装,初步建立了即时检验荧光微球免疫层析检测ALV试纸法,并用POCT试纸条检测临床阳性样本。结果表明:成功构建pGEX-6p-1-p27、pET-32a-p27蛋白原核载体并诱导p27重组蛋白表达。将纯化后的p27融合蛋白与佐剂等容量混合后作为免疫原免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔,成功制备出p27蛋白的鼠源和兔源多克隆抗体,通过血清效价以及Western Blot鉴定显示多抗的免疫原反应良好。荧光微球偶联鼠源多克隆抗体的最适pH值为6.2。POCT试纸条检测结果显示,ALV的阳性样品与荧光微球包被的鼠源多克隆抗体结合良好,T/C数据比其他样本高,且仅有阳性样本和荧光微球包被的鼠源多克隆抗体结合后,在紫外灯的照射下,C线(质控线)和T线(检测线)才均会有荧光条带,与临床诊断结果相符。试验建立的POCT荧光微球免疫层析检测ALV的方法,可为禽白血病病毒的检测提供一种更为简便的方法,为基层兽医临床检测提供便利。 展开更多
关键词 ALV P27 原核表达 多克隆抗体 荧光微球免疫层析
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