根据GenBank上鸡白介素15(IL-15),白介素16(IL-16),白介素18(IL-18)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以β-actin基因为内参,采用SYBR Green I染料法建立实时荧光定量PCR检测方法。将基因克隆至pMD19-T载体上,以各阳性质粒...根据GenBank上鸡白介素15(IL-15),白介素16(IL-16),白介素18(IL-18)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以β-actin基因为内参,采用SYBR Green I染料法建立实时荧光定量PCR检测方法。将基因克隆至pMD19-T载体上,以各阳性质粒作为标准品,构建标准曲线,并进行了熔解曲线分析。结果表明,鸡IL-15、IL-16、IL-18和β-actin基因的Ct值与标准品稀释度在2×102~2×108copies/μL范围分别呈良好的线性关系,r2均大于0.999。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰。建立的鸡IL-15、IL-16和IL-18基因实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短,为在mRNA水平对鸡白介素的定量分析奠定了基础。展开更多
根据弯曲菌16S r RNA基因的靶序列设计特异性引物和探针,对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了快速检测鸡肉中弯曲菌的荧光定量PCR方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行评价。该方法除了对弯曲菌有扩增曲线外,对其他常见食源性病原菌...根据弯曲菌16S r RNA基因的靶序列设计特异性引物和探针,对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了快速检测鸡肉中弯曲菌的荧光定量PCR方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行评价。该方法除了对弯曲菌有扩增曲线外,对其他常见食源性病原菌均未有扩增曲线,具有较好的特异性;弯曲菌的最低检测限为10 CFU/m L;重复性实验获得标准曲线相关系数为R2=0.999,批内可重复性变异系数在0.12%-2.1%之间,批间可重复性变异系数为1.7%。应用该方法对68份鸡肉样品检测弯曲菌阳性率为95.6%(65/68),传统分离方法阳性率为89.5%(60/68),两种方法的阳性符合率为89.7%。本研究建立的荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好、操作简单,大大缩短检测周期,可作为检测鸡肉样品中弯曲菌的手段,为鸡肉样品弯曲菌的流行病学调查研究提供新的工具。展开更多
文摘根据GenBank上鸡白介素15(IL-15),白介素16(IL-16),白介素18(IL-18)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以β-actin基因为内参,采用SYBR Green I染料法建立实时荧光定量PCR检测方法。将基因克隆至pMD19-T载体上,以各阳性质粒作为标准品,构建标准曲线,并进行了熔解曲线分析。结果表明,鸡IL-15、IL-16、IL-18和β-actin基因的Ct值与标准品稀释度在2×102~2×108copies/μL范围分别呈良好的线性关系,r2均大于0.999。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰。建立的鸡IL-15、IL-16和IL-18基因实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短,为在mRNA水平对鸡白介素的定量分析奠定了基础。
文摘根据弯曲菌16S r RNA基因的靶序列设计特异性引物和探针,对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了快速检测鸡肉中弯曲菌的荧光定量PCR方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行评价。该方法除了对弯曲菌有扩增曲线外,对其他常见食源性病原菌均未有扩增曲线,具有较好的特异性;弯曲菌的最低检测限为10 CFU/m L;重复性实验获得标准曲线相关系数为R2=0.999,批内可重复性变异系数在0.12%-2.1%之间,批间可重复性变异系数为1.7%。应用该方法对68份鸡肉样品检测弯曲菌阳性率为95.6%(65/68),传统分离方法阳性率为89.5%(60/68),两种方法的阳性符合率为89.7%。本研究建立的荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好、操作简单,大大缩短检测周期,可作为检测鸡肉样品中弯曲菌的手段,为鸡肉样品弯曲菌的流行病学调查研究提供新的工具。
