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鳜鱼传染性脾肾坏死病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:5
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作者 安伟 肖雨 +2 位作者 张崇文 张明辉 何正侃 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期214-217,共4页
为了建立检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)的方法,本研究根据GenBank中ISKNV MCP基因的保守序列设计并合成1对引物和1条TaqMan探针,建立了该病毒的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果表明,以重组质粒标准品构建的标准曲线的相关系数为0.... 为了建立检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)的方法,本研究根据GenBank中ISKNV MCP基因的保守序列设计并合成1对引物和1条TaqMan探针,建立了该病毒的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果表明,以重组质粒标准品构建的标准曲线的相关系数为0.994,具有良好的线性关系,检测下限为20拷贝/μL,是常规PCR的1 000倍;特异性强,只有ISKNV呈阳性,而与流行性造血器官坏死病毒、鲤春病毒血症病毒和草鱼呼肠孤病毒均无交叉反应;重复性好,批内和批间的变异系数均小于0.7%。本研究建立的ISKNV TaqMan荧光定量PCR方法对ISKNV的快速检测及定量检测具有重要意义。 展开更多
关键词 鳜鱼 传染性脾肾坏死病毒 荧光定量pcr反应
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内蒙古自然发酵绵羊奶油中乳酸菌的分离鉴定及优势菌群q-PCR定量分析 被引量:4
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作者 刘红新 德亮亮 +2 位作者 陈红霞 刘文俊 孙天松 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期16-19,27,共5页
采用传统纯培养方法对内蒙古不同地区的12份绵羊奶油样品中的乳酸菌进行分离纯化,运用16S r DNA序列分析方法进行属种鉴定,同时采用实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)技术对包头地区样品中优势菌群数量进行了定量研究。分离鉴定结果表明... 采用传统纯培养方法对内蒙古不同地区的12份绵羊奶油样品中的乳酸菌进行分离纯化,运用16S r DNA序列分析方法进行属种鉴定,同时采用实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)技术对包头地区样品中优势菌群数量进行了定量研究。分离鉴定结果表明三个地区绵羊发酵奶油中分离鉴定的44株乳酸菌,其中Lactococcus lactis subsp.Lactis为优势菌群。q-PCR定量结果表明3种优势菌属的数量关系为Lac.Lactis.subsp.lactis>L.plantarum>Leu.Mesenteroides。 展开更多
关键词 乳酸菌 分离鉴定 实时荧光定量聚合酶链反应(q—pcr) 天然发酵奶油
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实时荧光PCR技术快速检测食品中的蜡样芽孢杆菌 被引量:12
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作者 马琳琳 刘珍 +3 位作者 马腾州 清江 田衍香 丁利 《理化检验(化学分册)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1461-1465,共5页
以蜡样芽孢杆菌gyrB基因作为目标基因并设计特异性引物,用95℃预变性5 min、95℃变性15 s、50℃复性30 s、72℃延伸30 s,反应45个循环为反应程序,以蜡样芽孢杆菌DNA为模板进行荧光定量聚合酶链式反应(PCR),提出了食品中蜡样芽孢杆菌快... 以蜡样芽孢杆菌gyrB基因作为目标基因并设计特异性引物,用95℃预变性5 min、95℃变性15 s、50℃复性30 s、72℃延伸30 s,反应45个循环为反应程序,以蜡样芽孢杆菌DNA为模板进行荧光定量聚合酶链式反应(PCR),提出了食品中蜡样芽孢杆菌快速检测的方法,并对该方法特异性、蜡样芽孢杆菌DNA灵敏度以及活菌检出限进行验证。结果表明,该引物在分段扩增中可以实现对蜡样芽孢杆菌的快速检测,而且重复性好;以3种非蜡样芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌进行特异性试验,非蜡样芽孢杆菌均没有扩增出曲线,仅蜡样芽孢杆菌扩增出特异性曲线;蜡样芽孢杆菌DNA按10倍稀释法进行灵敏度检测,可达0.01 mg·L^(-1),活菌检出限为8.9×10^(2)CFU·mL^(-1)。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 荧光定量聚合酶链式反应(pcr) gyrB基因 食品
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番茄DNA甲基转移基因SlDRM2L的克隆及表达分析 被引量:1
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作者 刘嘉荔 刘红达 +2 位作者 汪宏涛 张玉 唐晓凤 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2022年第3期406-410,共5页
DNA甲基化主要是通过在甲基转移酶的催化下修饰基因组DNA来响应外界环境的胁迫,是表观遗传学的重要手段之一,参与植物中DNA甲基化起始的主要DNA甲基转移酶是DRM2。文章通过美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology ... DNA甲基化主要是通过在甲基转移酶的催化下修饰基因组DNA来响应外界环境的胁迫,是表观遗传学的重要手段之一,参与植物中DNA甲基化起始的主要DNA甲基转移酶是DRM2。文章通过美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库,在番茄中发现了一个与拟南芥胞嘧啶甲基转移酶DRM2同源性较高的序列,即SlDRM2L。通过GenBank(登录号NM-001246974)获得番茄DNA甲基转移酶SlDRM2L基因的cDNA全长序列。实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结果表明SlDRM2L在所有组织中均有表达,叶和花的表达量最高。同时利用烟草瞬时表达系统将构建的绿色荧光瞬时表达载体35S::SlDRM2L-GFP用于亚细胞定位实验,通过激光共聚焦显微镜观察可知SlDRM2L蛋白定位于细胞核中;此外,在高温条件下(39℃,4 h),番茄SlDRM2L的基因转录水平明显提高,表明SlDRM2L介导的DNA甲基化可能受高温诱导。该文为发现SlDRM2L在植物生长发育中的作用提供了相关的科学依据,为深入研究SlDRM2L的功能奠定了理论基础。 展开更多
关键词 番茄 SlDRM2L基因 高温诱导 亚细胞定位 实时荧光定量聚合酶链式反应(pcr)
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