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利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术及环介导等温扩增技术在结核性脑膜炎的诊断价值 被引量：13
1
作者 冉燕 赵建军 +1 位作者 张建勇 宗兆婧 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第24期3416-3419,共4页
目的评价脑脊液利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)及脑脊液环介导等温扩增技术(LAMP)在结核性脑膜炎中的诊断价值。方法收集临床诊断为结核性脑膜炎住院患者110例,随机收集60例为结核性脑膜炎A组,50例为结核... 目的评价脑脊液利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)及脑脊液环介导等温扩增技术(LAMP)在结核性脑膜炎中的诊断价值。方法收集临床诊断为结核性脑膜炎住院患者110例,随机收集60例为结核性脑膜炎A组,50例为结核性脑膜炎B组,另收集其他中枢神经系统感染患者脑脊液20例为对照组(CG组)。其中结核性脑膜炎A组患者入院后抽取脑脊液送脑脊液常规、生化、结核菌涂片、结核菌培养、GeneXpert MTB/RIF,结核性脑膜炎B组患者送脑脊液作常规、生化、结核菌涂片、结核菌培养和LAMP,CG组患者送脑脊液作常规、生化、结核菌涂片、结核菌培养、GeneXpert MTB/RIF和LAMP。结果结核性脑膜炎A组脑脊液GeneXpert MTB/RIF阳性32例,其中利福平耐药基因检测阳性3例,结核性脑膜炎A组脑脊液结核菌涂片、培养、GeneXpert MTB/RIF阳性率分别为8.3%(5/60)、16.7%(10/60)和53.0%(32/60)。结核性脑膜炎B组50例脑脊液结核菌涂片、结核菌培养、LAMP,阳性率分别为8.0%(4/50),18.0%(9/50)和58.0%(29/50),CG组脑脊液GeneXpert MTB/RIF和脑脊液LAMP均为阴性。结论脑脊液GeneXpert MTB/RIF及脑脊液LAMP均为早期诊断结核性脑膜炎的较好方法。 展开更多
关键词 结核 脑膜炎 脑脊液 利福平 耐药 利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术 环介导等温扩增技术
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等温核酸扩增技术:病原体现场快速检测的前沿进展
2
作者 万佳欣 徐杏 +6 位作者 谢传奇 周昕 王星博 朱寅初 李彩燕 吴越 周卫东 《中国生物医学工程学报》 北大核心 2025年第3期356-370,共15页
在全球公共卫生安全面临日益严峻挑战的背景下,开发兼具快速响应、高灵敏度、准确诊断以及易于操作的病原体检测技术成为当务之急。等温核酸扩增(IANA)技术以其独特的恒温反应优势、显著的成本效益比以及高效简便的检测能力,成为该领域... 在全球公共卫生安全面临日益严峻挑战的背景下,开发兼具快速响应、高灵敏度、准确诊断以及易于操作的病原体检测技术成为当务之急。等温核酸扩增(IANA)技术以其独特的恒温反应优势、显著的成本效益比以及高效简便的检测能力,成为该领域的研究热点。梳理了IANA技术及其在病原体现场快速检测(POCT)中的创新应用;解析了酶介导和无酶介导两类技术体系的核心机制;阐述了IANA技术的原理;探讨了其在病毒和细菌等病原体检测中的应用;分析了基于IANA技术的POCT装置及其在病原体检测中的应用。最后,总结了基于IANA的病原体检测技术面临的关键挑战和未来发展,并展望了高效集成化、快速自动化和智能平台化检测技术的变化趋势,旨在为新一代病原体检测技术的研发提供系统性理论支撑与实践指导。 展开更多
关键词 等温核酸扩增技术 病原体检测 现场快速检测
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基于重组酶介导等温核酸扩增技术快速检测食品中骆驼源性成分的方法建立及评价
3
作者 周臣清 张娟 +3 位作者 綦艳 赵玲 黄宝莹 杨纯佳 《中国乳品工业》 北大核心 2025年第2期75-80,共6页
文章开发一种基于重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombinase Aided Amplification,RAA)的方法,实现对食品中骆驼源性成分快速检测。针对骆驼细胞色素B(Cytochrome b,Cyt b)基因设计特异性引物,对建立的RAA体系优化其反应扩增条件,评估其... 文章开发一种基于重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombinase Aided Amplification,RAA)的方法,实现对食品中骆驼源性成分快速检测。针对骆驼细胞色素B(Cytochrome b,Cyt b)基因设计特异性引物,对建立的RAA体系优化其反应扩增条件,评估其特异性和灵敏度,并用建立的RAA法与GB/T 38164标准方法分别对24份市售骆驼制品进行检测并比对结果。结果表明,本研究建立的RAA法特异性强,乳及乳制品检出限为1.0%,肉及肉制品检出限为0.1%,且2种方法对24份骆驼乳肉及其制品检测结果一致。因此,本研究开发的RAA方法具有快速、特异性强、灵敏度高、操作简单等优点,市场应用前景广阔。 展开更多
关键词 重组酶介导等温核酸扩增技术 骆驼源性成分 细胞色素B基因 快速检测
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等温核酸扩增技术在禾本科作物病毒检测中的应用
4
作者 孙萌 董荟慧 于莹 《农村科学实验》 2025年第17期78-80,共3页
等温核酸扩增技术因快速、简便和高灵敏度的特点,在禾本科作物病毒检测中展现出明显优势。该文总结了环介导等温扩增技术、重组酶聚合酶扩增技术、滚环扩增技术等主要等温扩增技术的原理与特点,重点分析了其在小麦、玉米、水稻病毒检测... 等温核酸扩增技术因快速、简便和高灵敏度的特点,在禾本科作物病毒检测中展现出明显优势。该文总结了环介导等温扩增技术、重组酶聚合酶扩增技术、滚环扩增技术等主要等温扩增技术的原理与特点,重点分析了其在小麦、玉米、水稻病毒检测中的具体应用与成效,评估了其检测效果与性能,并指出当前技术仍面临引物设计复杂度高、抑制物质干扰及标准化程度不足等挑战。最后,该文对该技术未来发展方向进行了展望,以期为禾本科作物病毒快速检测技术的选择与应用提供参考。 展开更多
关键词 等温核酸扩增技术 禾本科作物 病毒检测
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猪肺炎支原体实时荧光重组酶介导的等温扩增快速检测方法的建立和应用 被引量：1
5
作者 康浩然 黄雨薇 +7 位作者 宋程 高鹏 张永宁 周磊 盖新娜 韩军 郭鑫 杨汉春 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第9期1-9,共9页
猪肺炎支原体(Mhp)是引起猪支原体肺炎(MPS)的病原,给全球养猪业带来了巨大的经济损失。早期快速诊断和实时监测对该病的防控至关重要,目前常用的核酸检测方法难以满足临床上即时检测(POCT)的实际需求。本试验针对Mhp细胞膜表面脂蛋白基... 猪肺炎支原体(Mhp)是引起猪支原体肺炎(MPS)的病原,给全球养猪业带来了巨大的经济损失。早期快速诊断和实时监测对该病的防控至关重要,目前常用的核酸检测方法难以满足临床上即时检测(POCT)的实际需求。本试验针对Mhp细胞膜表面脂蛋白基因p46,通过序列比对和系统性的引物筛选设计了exo探针及其对应的重组酶介导的等温扩增(RAA)技术引物对,建立了Mhp实时荧光(real-time)RAA快速检测方法;随后,对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检测,并使用该方法和实时荧光定量PCR(qPCR)对比检测临床样本。结果显示,该方法与猪链球菌、肺炎克雷伯氏菌、猪格拉瑟氏菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌均无交叉反应,特异性好;Mhp real-time RAA及其可视化方法的检测敏感性分别为18和29 copies/μL(95%置信区间),敏感性强;组内和组间重复性试验变异系数均小于8.0%,重复性好;对108份猪临床样本的检测结果显示,该方法及其可视化方法与Mhp qPCR方法的符合率分别为98.15%和99.07%。本试验所建立Mhp real-time RAA方法可以通过便捷式蓝光仪器实现结果的可视化,更适用于资源匮乏的诊断实验室和基层现场,为MPS的防控提供了技术手段。 展开更多
关键词 重组酶介导的等温扩增技术 猪肺炎支原体 实时荧光定量PCR 快速检测
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核酸等温扩增方法在食品安全检测中的应用综述 被引量：2
6
作者 郭雨湄 贾振军 刘瑞 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第11期435-448,共14页
随着全球食品安全问题日益严重,开发快速且灵敏的检测技术显得尤为重要。核酸等温扩增技术因其高效、快速和操作简便的特点,在食品安全检测领域中的重要性日益凸显。该文系统阐释了环介导等温扩增技术、滚环扩增技术、重组酶聚合酶扩增... 随着全球食品安全问题日益严重,开发快速且灵敏的检测技术显得尤为重要。核酸等温扩增技术因其高效、快速和操作简便的特点,在食品安全检测领域中的重要性日益凸显。该文系统阐释了环介导等温扩增技术、滚环扩增技术、重组酶聚合酶扩增技术、酶促重组等温扩增技术、等温链置换技术、核酸多臂引物和环优化技术等核酸等温扩增技术在食品安全检测领域的应用现状,涵盖主要类型、基本原理、具体应用、与其他技术结合的优势以及未来发展趋势。通过分析近年来的研究成果,旨在为食品安全检测领域提供新的思路和参考,进一步促进相关技术的发展与应用。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 滚环扩增技术 重组酶聚合酶扩增技术 酶促重组等温扩增技术 等温链置换技术 核酸多臂引物和环优化技术 食品安全检测
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等温链置换扩增反应/CRISPR-Cas12a系统结合反向荧光增强试纸条检测唾液中microRNA-31的研究
7
作者 王佳讯 徐一 +1 位作者 赵爽 宫晓群 《分析测试学报》 北大核心 2025年第11期2346-2353,共8页
构建了基于核酸等温链置换扩增反应(ISDA)及CRISPR-Cas12a系统协同放大检测microRNA-31(miRNA-31)的方法,以反向荧光增强试纸条(rLFTS)为信号展示平台,实现可视化检测。通过优化ISDA反应的引物序列设计及反应缓冲液,实现了miRNA-31特异... 构建了基于核酸等温链置换扩增反应(ISDA)及CRISPR-Cas12a系统协同放大检测microRNA-31(miRNA-31)的方法,以反向荧光增强试纸条(rLFTS)为信号展示平台,实现可视化检测。通过优化ISDA反应的引物序列设计及反应缓冲液,实现了miRNA-31特异性识别和第一次信号放大,输出双链DNA产物并激活CRISPR-Cas12a切割游离单链DNA(ssDNA)报告分子的反式切割活性,同时阻碍金纳米探针通过结合ssD⁃NA与检测线上的Cy5荧光探针形成夹心结构,进而恢复Cy5荧光,以此作为定量信号,实现了对miRNA-31的高灵敏和高特异性检测。该方法对唾液样本中miRNA-31的检出限低至57.9 amol/L,加标回收率为91.6%~111%,检测结果与定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)定量结果具有良好的一致性,且检测时间仅需90 min。实验结果表明该方法具有操作简单、灵敏度高、检测时间短等优点,能够满足对唾液样本中miR⁃NA-31的超灵敏检测需求。 展开更多
关键词 等温链置换扩增 CRISPR-Cas12a 反向荧光增强试纸条 miRNA-31 核酸检测
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核酸提取方法、操作人员和扩增仪器对RT-qPCR检测结果的影响
8
作者 马玥 高维明 +5 位作者 王江璐 史楠 王思文 邢文萍 武嘉男 王秀荣 《中国动物检疫》 2025年第9期84-89,共6页
为探讨方法、人员和仪器对实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测结果的影响,以灭活的H5亚型禽流感病毒Re-12株鸡胚尿囊液作为核酸提取和扩增样品,在固定其他变量的条件下,分别用3种核酸提取试剂盒,由3位操作人员使用7种品牌的扩增仪器进行RT... 为探讨方法、人员和仪器对实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测结果的影响,以灭活的H5亚型禽流感病毒Re-12株鸡胚尿囊液作为核酸提取和扩增样品,在固定其他变量的条件下,分别用3种核酸提取试剂盒,由3位操作人员使用7种品牌的扩增仪器进行RT-qPCR检测,并对检测结果进行对比分析。结果显示:3种核酸提取试剂盒获取RNA进行RT-qPCR检测的平均Ct值极差为3.69,3位操作人员测试的Ct值变异系数为2.82%~4.84%,7种品牌仪器测试的Ct值变异系数为4.36%~10.28%。结果说明:不同核酸提取试剂盒、不同操作人员和不同检测仪器都会引起检测结果差异,对检测结果产生影响。因此,在进行核酸检测时,必须严格遵守试验规程,确保试验条件的稳定性和一致性,以获得准确可靠的检测结果。 展开更多
关键词 实时荧光定量RT-PCR 核酸扩增 影响因素 变异系数
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猪伪狂犬病毒荧光重组酶介导核酸扩增快速检测方法的建立与应用
9
作者 谢明杰 康龙滨 +4 位作者 陈秋勇 吴学敏 王隆柏 周伦江 刘玉涛 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期753-758,共6页
【目的】基于荧光重组酶介导核酸扩增(Recombinase-aided amplification,RAA)技术,建立一种猪伪狂犬病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)快速检测方法。【方法】根据PRV gE基因序列,设计特异性引物及探针,优化扩增体系,建立PRV荧光重... 【目的】基于荧光重组酶介导核酸扩增(Recombinase-aided amplification,RAA)技术,建立一种猪伪狂犬病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)快速检测方法。【方法】根据PRV gE基因序列,设计特异性引物及探针,优化扩增体系,建立PRV荧光重组酶介导核酸扩增检测方法,检验其特异性、敏感性和重复性,应用该方法对临床样品进行检测。【结果】该方法在43℃恒温反应23 min即可完成PRV核酸扩增,最低检出限为111 copies·μL^(-1);与猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemicdiarrheavirus,PEDV)、猪轮状病毒(Porcinerotavirus,PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)、猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)均无交叉反应。重复性试验显示,组内和组间变异系数均小于5%;40份临床样品检测结果显示PRV阳性率为15%(6/40),检测结果与常规聚合酶链式反应(PCR)一致。【结论】成功建立了简便快速、高效准确的PRV实时荧光RAA检测方法,为PRV的快速检测和流行病学调查提供了新的检测手段。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 荧光重组酶介导核酸扩增 检测方法
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核酸等温扩增技术在病毒检测中的应用 被引量：4
10
作者 肖航 王小燕 +3 位作者 邓兆佳 廖文静 谢文菁 彭汉勇 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1-17,共17页
病毒是引发人类疾病的主要病原体之一.传统的聚合酶链式反应(PCR)技术虽然被广泛应用于病毒分子诊断,但其对温度的要求较为严格,限制了其在现场诊断中的应用.为了满足现场快速诊断的需求,核酸等温扩增技术得到快速发展,其无需热循环,可... 病毒是引发人类疾病的主要病原体之一.传统的聚合酶链式反应(PCR)技术虽然被广泛应用于病毒分子诊断,但其对温度的要求较为严格,限制了其在现场诊断中的应用.为了满足现场快速诊断的需求,核酸等温扩增技术得到快速发展,其无需热循环,可以在恒定温度下实现核酸扩增,可适应不同的应用场景.本文综合评述了等温扩增技术在病毒检测领域的最新进展,从病毒样本采集、核酸提取、等温扩增检测等几个方面分别进行阐述,探讨了酶辅助等温扩增技术、无酶等温扩增技术以及与多体系串联的级联扩增技术的原理、关键参数及其病毒检测应用,并对比了市场上相关试剂盒的特点.此外,讨论了当前核酸等温扩增技术在病原体检测应用中面临的一些难题,如提取效率、稳定性和成本等,提出了未来的发展方向,为进一步改善现场诊断效率提供了新的思路. 展开更多
关键词 等温扩增技术 CRISPR检测 核酸扩增 环境病毒 病毒提取
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基于RPA辅助增强荧光偏振的沙门氏菌检测
11
作者 薛鹏鹏 陈伟 +2 位作者 徐建国 涂佳 屈玮 《食品与机械》 北大核心 2025年第6期44-50,共7页
[目的]提出一种新型荧光偏振(FP)检测策略,通过整合重组酶聚合酶扩增(RPA)技术,实现对沙门氏菌(Salmonella)的高灵敏度检测。[方法]该检测机制依赖于靶标DNA与特异性引物的同源序列识别:当沙门氏菌靶标存在时,引物与靶DNA结合并触发链... [目的]提出一种新型荧光偏振(FP)检测策略,通过整合重组酶聚合酶扩增(RPA)技术,实现对沙门氏菌(Salmonella)的高灵敏度检测。[方法]该检测机制依赖于靶标DNA与特异性引物的同源序列识别:当沙门氏菌靶标存在时,引物与靶DNA结合并触发链置换反应,进而启动DNA扩增过程。为提高检测灵敏度,系统采用两项关键设计:在引物5'端修饰6-羧基荧光素(6-FAM)作为荧光报告基团;引入核酸外切酶Ⅰ(ExoⅠ)选择性水解未结合的引物。[结果]在RPA扩增过程中,由于扩增产物的相对分子质量显著增加,6-FAM标记的DNA复合物的旋转自由度受到限制,导致荧光偏振信号显著增强。经条件优化后,该方法对沙门氏菌的检测限可达11 CFU/mL,且表现出优异的特异性。[结论]该方法可高效检测沙门氏菌,其模块化设计原理还可拓展应用于其他食源性病原体的快速诊断。 展开更多
关键词 沙门氏菌 重组酶聚合酶扩增(RPA) 引物修饰 荧光偏振 定量检测
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基于非对称杂交诱导的恒温指数扩增策略用于microRNA高灵敏检测
12
作者 刘引霞 彭晶 +5 位作者 刘思敏 邹旗霞 张璐茵 邱子玥 谢宝平 陈俊 《分析测试学报》 北大核心 2025年第11期2391-2396,共6页
传统指数扩增中,目标核酸与对称扩增模板的两端能量相同,然而,当目标核酸与模板5’端杂交时扩增将难以触发,限制了方法对痕量目标核酸的分析。该文发展了一个非对称杂交诱导的恒温指数扩增(AEXPRA)策略用于microRNA的高灵敏、快速分析。... 传统指数扩增中,目标核酸与对称扩增模板的两端能量相同,然而,当目标核酸与模板5’端杂交时扩增将难以触发,限制了方法对痕量目标核酸的分析。该文发展了一个非对称杂交诱导的恒温指数扩增(AEXPRA)策略用于microRNA的高灵敏、快速分析。以miR-196b为靶标,基于设计的非对称扩增模板,由于目标物与扩增模板3’端完全互补但与模板5’端部分互补,miR-196b能够完全杂交到扩增模板的3’端。方法具有灵敏度高、特异性强以及速度快的优势。该策略整个反应时间在30 min以内,可检测低至0.42 amol/L的miR-196b。为了验证方法的实用性,将其用于血清提取物中miR-196b的分析,方法可有效区分非小细胞癌患者和正常人血清中miR-196b的表达,结果与实时定量PCR(RT-qPCR)一致。该法具有高准确度和可靠性,有望在miRNA的临床诊断和病理研究中发挥重要作用。 展开更多
关键词 恒温指数扩增 微小核糖核酸 荧光检测 疾病诊断
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恒温扩增荧光检测技术在基层结核病实验室的应用价值 被引量：12
13
作者 马晓光 郑丹薇 +3 位作者 朱岩昆 石洁 王少华 李辉 《中国防痨杂志》 CAS 2018年第10期1071-1074,共4页
目的探讨在基层结核病实验室采用恒温扩增荧光检测技术检测可疑肺结核患者痰标本诊断结核病的价值。方法搜集河南省4个项目点县级结核病实验室2014-2015年期间可疑肺结核患者的痰标本4242例，分别进行痰涂片、痰培养和恒温扩增荧光检测... 目的探讨在基层结核病实验室采用恒温扩增荧光检测技术检测可疑肺结核患者痰标本诊断结核病的价值。方法搜集河南省4个项目点县级结核病实验室2014-2015年期间可疑肺结核患者的痰标本4242例，分别进行痰涂片、痰培养和恒温扩增荧光检测技术检测，比较恒温扩增荧光检测技术和传统痰涂片、痰培养方法的敏感度、特异度等。计数资料采用χ2检验，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果纳入的4242例患者中，痰涂片检出阳性者351例，阳性检出率为8．21％（351／4276）；痰培养检出阳性者576例，阳性检出率为13．47％（576／4276）；恒温扩增荧光检测技术检出阳性者733例，阳性检出率为17．14％（733／4276）。3种检测技术的阳性检出率比较，差异有统计学意义（χ2=153．412，P〈0．001）。以痰培养试验结果为标准，恒温扩增荧光检测技术的敏感度和特异度分别为86．81％（500／576）、93．64％（3433／3666）；阳性预测值为68．21％（500／733），阴性预测值为97．83％（3433／3509），与痰培养有较高的一致性（Kappa值为0．722）。痰涂片检测的敏感度为57．29％（330／576），特异度为99．43％（3645／3666），阳性预测值为94．02％（330／351），阴性预测值为93．68％（3645／3891）；Kappa值为0．679。痰涂片与恒温扩增荧光检测技术检测痰标本的敏感度比较，差异有统计学意义（χ2=153．336，P〈0．001）。结论恒温扩增荧光检测技术检测的敏感度和特异度均明显高于传统的痰涂片，且其具有检测快速、操作简便等优势，便于在我国基层结核病实验室中推广应用。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 实验室技术和方法 核酸扩增技术 荧光免疫测定 数据说明 统计 对比研究
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荧光定量PCR和环介导等温扩增方法检测隐球菌CAP10基因的比较研究 被引量：6
14
作者 韩慧 胡子有 吴炳义 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期817-820,共4页
目的建立荧光定量PCR和环介导等温扩增技术(LAMP)检测隐球菌荚膜相关蛋白基因(CAP10)的方法,并比较和评价两种方法的优缺点。方法针对新型隐球菌CAP10基因序列,使用在线软件设计引物,并构建质粒标准品,优化反应条件后用荧光定量PCR和LAM... 目的建立荧光定量PCR和环介导等温扩增技术(LAMP)检测隐球菌荚膜相关蛋白基因(CAP10)的方法,并比较和评价两种方法的优缺点。方法针对新型隐球菌CAP10基因序列,使用在线软件设计引物,并构建质粒标准品,优化反应条件后用荧光定量PCR和LAMP两种方法检测定量的质粒,分析其敏感性和特异性,并检测临床标本。结果荧光定量PCR检测CAP10质粒的敏感性为6.8×101拷贝,LAMP方法的敏感性为6.8×103拷贝,PCR检测阳性率比LAMP方法高。两种方法特异性好,对脑膜炎奈瑟菌、白色念珠菌、热带念珠菌、黄曲霉、黑曲霉和大肠埃希菌的检测结果均为阴性。结论成功建立了检测CAP10基因的荧光定量PCR方法敏感性和特异性高,但是需要特殊仪器;LAMP方法敏感性较低,但其操作简单,无需特殊仪器和设备,加入核酸染料即能观察结果。两者均适用于新型隐球菌感染的检测。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 环介导等温扩增技术 新型隐球菌 CAP10
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STR复合扩增及荧光检测技术在个体识别中的应用 被引量：4
15
作者 林源 赵珍敏 +2 位作者 阙庭志 严品华 李莉 《法医学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期75-76,共2页
目的 :使用 310型遗传分析仪对D3S1358等 10个位点进行基因型检测并应用于法医物证学个体识别案件。方法 :用PCR复合扩增结合四色荧光检测技术对样本DNA进行基因分型。结果 :常见物证检材可成功地得到检验。结论 :这些位点适用于法医物... 目的 :使用 310型遗传分析仪对D3S1358等 10个位点进行基因型检测并应用于法医物证学个体识别案件。方法 :用PCR复合扩增结合四色荧光检测技术对样本DNA进行基因分型。结果 :常见物证检材可成功地得到检验。结论 :这些位点适用于法医物证学个体识别。 展开更多
关键词 复合扩增 四色荧光检测技术 STR 法医物证学
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荧光定量核酸扩增法对婴幼儿CMV感染的诊断价值 被引量：3
16
作者 宋娜 王佳 +2 位作者 吴旗 艾洪武 游上游 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期588-590,共3页
目的探讨荧光定量核酸扩增(FQ-PCR)方法对婴幼儿巨细胞病毒(CMV)感染的诊断价值。方法用FQ-PCR检测疑似CMV感染的206例婴幼儿尿液的CMV-DNA,同时用ELISA法检测血中CMV-IgG和CMV-IgM。并对其中的121例CMV感染的病例进行回顾性分析。结果 ... 目的探讨荧光定量核酸扩增(FQ-PCR)方法对婴幼儿巨细胞病毒(CMV)感染的诊断价值。方法用FQ-PCR检测疑似CMV感染的206例婴幼儿尿液的CMV-DNA,同时用ELISA法检测血中CMV-IgG和CMV-IgM。并对其中的121例CMV感染的病例进行回顾性分析。结果 FQ-PCR检测出117例CMV-DNA阳性,阳性率为56.79%(117/206);ELISA检测CMV-IgM和IgG的阳性率分别为49.02%(101/206)和92.23%(190/206)。121例CMV感染病例中以肝脏受累发生率最高(38.84%),其次是呼吸系统(31.40%)、泌尿系统(15.70%)、血液系统(9.09%)及消化系统(4.95%)。结论 FQ-PCR检测对CMV感染的诊断有重要作用,且CMV感染对婴幼儿的影响广泛,以肝脏和呼吸系统受累为主。 展开更多
关键词 巨细胞病毒感染 荧光定量核酸扩增 婴幼儿
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基于实时荧光环介导等温扩增技术同时检测副溶血弧菌与金黄色葡萄球菌 被引量：9
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作者 刘丹 谢加玲 +3 位作者 张孟雨 陈松 李孜 钟青萍 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第22期255-262,共8页
分别针对副溶血弧菌及金黄色葡萄球菌的特异性基因bla_(CARB-17)、nuc设计引物,通过优化反应条件,建立一种能够同时检测副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌的实时荧光环介导等温扩增(real-time loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP... 分别针对副溶血弧菌及金黄色葡萄球菌的特异性基因bla_(CARB-17)、nuc设计引物,通过优化反应条件,建立一种能够同时检测副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌的实时荧光环介导等温扩增(real-time loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)的检测方法,对其特异性、灵敏度和适用性进行了研究。结果表明该方法特异性好、灵敏度高,对副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌的检出限分别为3.62×10^(2)、1.45×10^(4) copies/mL,灵敏度是普通PCR方法的10倍。实现了一次LAMP反应中同时检测2种食源性致病菌,既缩短检测时间,也提高了检测效率,为多重LAMP检测食源性致病菌的研究提供参考。 展开更多
关键词 食源性致病菌 副溶血弧菌 金黄色葡萄球菌 实时荧光环介导等温扩增技术 快速检测
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核酸等温扩增技术检测动物源食品研究进展 被引量：4
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作者 肖付刚 张尧轩 +2 位作者 谷蒙林 王德国 张国治 《粮食与油脂》 北大核心 2023年第12期22-28,共7页
综述了依赖核酸序列的扩增(NASBA)、链替代扩增(SDA)、滚环扩增(RCA)、环介导等温扩增(LAMP)、赖解旋酶恒温基因扩增(HDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、梯型熔解温度等温扩增(LMTIA)几种主要核酸等温扩增检测技术的发展及其基本原理、特点... 综述了依赖核酸序列的扩增(NASBA)、链替代扩增(SDA)、滚环扩增(RCA)、环介导等温扩增(LAMP)、赖解旋酶恒温基因扩增(HDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、梯型熔解温度等温扩增(LMTIA)几种主要核酸等温扩增检测技术的发展及其基本原理、特点和在动物源食品检测中的应用,并对几种主要核酸等温扩增检测技术的特点及应用进行比较。 展开更多
关键词 核酸等温扩增技术 检测 动物源食品 梯型熔解温度等温扩增技术
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核酸扩增技术在人腺病毒诊断检测的研究进展 被引量：5
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作者 李文贵 俞乃胜 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第1期78-81,共4页
关键词 人腺病毒 诊断 检测 核酸扩增技术
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实时荧光环介导等温扩增技术检测牛乳中的蜡样芽孢杆菌 被引量：25
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作者 贾雅菁 付博宇 +4 位作者 王羽 马晓燕 张先舟 苑宁 张伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第6期184-189,共6页
建立牛乳中蜡样芽孢杆菌便捷可靠的检测方法,根据已公布的蜡样芽孢杆菌hbl A基因序列设计内外引物,并向反应体系中加入荧光染料SYBRGreenⅠ,利用实时荧光监测仪,建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated i... 建立牛乳中蜡样芽孢杆菌便捷可靠的检测方法,根据已公布的蜡样芽孢杆菌hbl A基因序列设计内外引物,并向反应体系中加入荧光染料SYBRGreenⅠ,利用实时荧光监测仪,建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,Real Amp)检测蜡样芽孢杆菌的方法,扩增产物经电泳和酶切鉴定。通过21株致病菌验证RealAmp特异性,并比较了Real Amp与普通环介导等温扩增技术的敏感性,对人工污染的检出限进行了测定。结果表明对21 株致病菌进行特异性实验,4株蜡样芽胞杆菌呈阳性结果,17株非蜡样芽胞杆菌均呈阴性结果。RealAmp检测纯菌的灵敏度为8.2 CFU/m L,比普通环介导等温扩增技术的灵敏度高10倍,人工污染牛乳RealAmp的检出限为8.2 CFU/m L。并且在20 min左右即可判定结果。该方法快速、准确、灵敏度高、操作便捷、可实时监控检测蜡样芽孢杆菌,有望成为快速检测蜡样芽孢杆菌的有效方法。 展开更多
关键词 实时荧光环介导等温扩增检测技术 蜡样芽胞杆菌 检测 牛乳
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