利用荧光共振能量转移技术研究活细胞TLR4与MD-2作用结构域 被引量：6

1

作者 钟田雨 唐靖 +4 位作者 陈登宇 刘亚伟 王蔚 刘靖华 姜勇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1451-1457,共7页

脂多糖(LPS)的识别和信号转导是宿主发生防御反应的关键,Toll样受体4(TLR4)与髓样分化蛋白-2(MD-2)形成复合物在LPS的识别及其信号转导中发挥了重要作用.研究TLR4与MD-2结合的功能结构域,对于深入了解LPS信号转导机制及其内毒素休克的... 脂多糖(LPS)的识别和信号转导是宿主发生防御反应的关键,Toll样受体4(TLR4)与髓样分化蛋白-2(MD-2)形成复合物在LPS的识别及其信号转导中发挥了重要作用.研究TLR4与MD-2结合的功能结构域,对于深入了解LPS信号转导机制及其内毒素休克的防治具有重要意义.运用基于强度的三通道荧光共振能量转移技术(FRET)及基因突变和转染技术,研究了活细胞TLR4与MD-2作用的结构域.结果表明:N端Glu24～Met41缺失使TLR4与MD-2结合能力明显下降;LPS刺激后TLR4聚合迅速增加,而缺失Glu24～Met41的TLR4不能聚合.上述结果提示,TLR4的Glu24～Met41不仅是结合MD-2的区域,并且还参与了LPS刺激后TLR4的聚合作用. 展开更多

关键词 TLR4 MD-2 脂多糖(LPS) 荧光共振能量转移技术(fret) 信号转导

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量子点在荧光共振能量转移技术中的应用研究 被引量：2

2

作者 张鹤鸣 邓桂明 +2 位作者 李卓 王文娜 郭昱 《华南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2011年第3期1-4,共4页

量子点作为新型的荧光探针应用于共振能量转移技术中,该文评述量子点在荧光共振能量转移技术中应用的研究进展,结合作者课题组的研究提出展望.

关键词 量子点 荧光共振能量转移技术 生物荧光探针

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生物大分子相互作用检测技术新进展——三色荧光级联荧光共振能量转移技术 被引量：6

3

作者 刘春春 杭海英 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期292-296,共5页

荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET),是指能量从一种受激发的荧光基团(fluorophore)以非辐射的方式转移到另一种荧光基团的物理现象.FRET的能量转移效率是两个荧光基团间距离的函数,并对此距离十分敏感,它的... 荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET),是指能量从一种受激发的荧光基团(fluorophore)以非辐射的方式转移到另一种荧光基团的物理现象.FRET的能量转移效率是两个荧光基团间距离的函数,并对此距离十分敏感,它的有效响应距离一般在1～10nm之间,因而可被用于测定原子间及分子间的距离.这一特点使FRET技术在大分子构象变化、大分子之间相互作用、细胞信号通路等研究中发挥重要作用,成为生物医学研究中的重要方法.但细胞内的生物学过程常常涉及多于两个的大分子间相互作用,二色荧光基团的FRET技术不能满足这种生物学研究的需求.最近,两个研究小组在这方面取得突破,建立了分别基于共聚焦显微镜和流式细胞仪的三色荧光级联FRET技术.这一技术的出现将会极大地促进生物学及相关研究领域的发展. 展开更多

关键词 荧光共振能量转移(fret) 共聚显微镜 流式细胞仪

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荧光共振能量转移技术在食品分析中的研究进展 被引量：1

4

作者 关桦楠 李明 +1 位作者 王丹丹 刘晓飞 《包装与食品机械》 CAS 北大核心 2023年第3期45-51,106,共8页

介绍荧光共振能量转移技术的基本原理及其发生条件,总结近年来基于荧光共振能量转移技术在真菌毒素残留、抗生素类药物残留、重金属离子残留和病原微生物残留等检测方面的应用研究进展,并对该技术的未来发展方向和应用前景进行展望。

关键词 荧光共振能量转移技术 食品分析 真菌毒素 抗生素 重金属 病原微生物

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基于碳量子点共振能量转移荧光猝灭法检测苦味酸

5

作者 邓祥 黄小梅 +2 位作者 邓子禾 龚安界 赵华利 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3174-3182,共9页

苦味酸(PA)作为一种高爆物和环境污染物,近年来引起了广泛的关注.本研究提出了一种新型荧光碳量子点(C-dots)探针,可用于快速、高选择性和高灵敏度的PA检测.探针采用中药材川木香为碳源,通过水热法一步合成.在荧光碳量子点溶液中加入PA... 苦味酸(PA)作为一种高爆物和环境污染物,近年来引起了广泛的关注.本研究提出了一种新型荧光碳量子点(C-dots)探针,可用于快速、高选择性和高灵敏度的PA检测.探针采用中药材川木香为碳源,通过水热法一步合成.在荧光碳量子点溶液中加入PA,通过荧光共振能量转移机理,碳量子点的荧光被有效猝灭.结果表明,碳量子点最大激发波长为360 nm,最大荧光发射波长为415 nm,荧光量子产率为28.4%.方法检测PA响应时间2 min,线性范围0.2—800μmol·L^(-1),检测限(LOD)63 nmol·L^(-1),实际水样中加标回收实验,回收率为98.8%—101.7%,相对标准偏差(RSD)为1.2%—2.7%. 展开更多

关键词 中药材川木香 荧光共振能量转移(fret) 碳量子点(C-dots) 苦味酸(PA)

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荧光共振能量转移(FRET)的定量检测及其应用 被引量：7

6

作者 张建伟 陈同生 《华南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2012年第3期12-17,共6页

荧光共振能量转移(Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET)技术被广泛应用于活细胞中生物大分子构象变化和分子间动态相互作用的实时研究.针对光谱串扰和供体受体间的浓度比等困扰FRET效率定量检测的两大难题,已经发展了多种定... 荧光共振能量转移(Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET)技术被广泛应用于活细胞中生物大分子构象变化和分子间动态相互作用的实时研究.针对光谱串扰和供体受体间的浓度比等困扰FRET效率定量检测的两大难题,已经发展了多种定量检测FRET效率的方法.作者结合自己的研究结果介绍了多种FRET效率定量检测技术在细胞信号转导机制研究中的应用. 展开更多

关键词 荧光共振能量转移(fret) fret效率 定量检测 荧光蛋白

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构建以荧光共振能量转移技术为基础的生物学活性前列腺特异抗原检测器

7

作者 齐小娟 王政 +2 位作者 蔡朱男 张斌 余应年 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期229-236,共8页

目的　构建可在体外应用荧光共振能量转移(FRET)技术检测具有酶活性的前列腺特异抗原(PSA)的生物检测器。方法　构建原核细胞表达质粒,从而在大肠杆菌中表达在供体和受体荧光蛋白之间以PSA特异性识别氨基酸序列SSYYSG连接的融合蛋白。... 目的　构建可在体外应用荧光共振能量转移(FRET)技术检测具有酶活性的前列腺特异抗原(PSA)的生物检测器。方法　构建原核细胞表达质粒,从而在大肠杆菌中表达在供体和受体荧光蛋白之间以PSA特异性识别氨基酸序列SSYYSG连接的融合蛋白。将纯化的融合蛋白依次用糜蛋白酶、胰蛋白酶、商品化的纯品PSA及精液切割,检测其荧光共振能量转移现象的变化。结果　糜蛋白酶、商品化的纯品PSA及精液切割均可有效抑制融合蛋白的FRET现象,并表现出对时间和剂量的依赖关系。而胰蛋白酶在90min内未见FRET抑制现象。结论　本研究构建的FRET检测器可成功检测具有酶活性的PSA ,为活性PSA的检测提供一种可选择的途径。 展开更多

关键词 荧光共振能量转移 前列腺特异抗原 荧光蛋白 生物传感技术

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碳点-荧光素荧光共振能量转移体系在阿司匹林测定中的研究与应用 被引量：3

8

作者 金文英 廖秀芬 +3 位作者 陶慧林 赵颖 刘绍州 梁永敏 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1147-1151,共5页

研究了经L-y半胱氨酸修饰后的碳点（CDs）-荧光素（FAM）荧光共振能量转移体系，并利用该体系建立了测定阿司匹林（ASP）的新方法。结果表明：在λex=330 nm下，于pH 7.0的Tris-HCl缓冲液中，CDs与FAM反应5 min后能发生有效的荧光共振... 研究了经L-y半胱氨酸修饰后的碳点（CDs）-荧光素（FAM）荧光共振能量转移体系，并利用该体系建立了测定阿司匹林（ASP）的新方法。结果表明：在λex=330 nm下，于pH 7.0的Tris-HCl缓冲液中，CDs与FAM反应5 min后能发生有效的荧光共振能量转移，能量供体CDs将能量转移到受体FAM，使FAM的荧光显著增强，而ASP的加入可有效猝灭FAM的荧光，且ASP浓度在1.0~150.0 μg/mL范围内与体系的荧光猝灭值ΔIF呈良好的线性关系（r=0.999 6），基于此建立了测定ASP的新方法。在最佳实验条件下，方法的检出限达0.33 μg/mL（3δ/k,n=11），回收率为 97.1%~105.3%，相对标准偏差（RSD）不大于4.6%（n=6）。常见的无机离子以及与ASP同类型的药物对测定影响较小，方法的选择性较好。 展开更多

关键词 碳点 荧光素 荧光共振能量转移(fret) 阿司匹林

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基于量子点的荧光共振能量转移的应用 被引量：3

9

作者 吴峰 蔡继业 《化学与生物工程》 CAS 2007年第1期58-61,共4页

介绍了基于量子点(QDs)的FRET原理,综述了基于QDs的FRET在生物传感器、蛋白质相互作用、生物分子构像变化和癌症治疗的光敏剂研究中的应用。

关键词 量子点 荧光共振能量转移(fret) 供体 受体

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利用荧光能量转移监测PCR的新技术

10

《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第9期42-42,共1页

Nanogen公司将发色基团耦连到杂交的多核苷酸上，通过荧光基团产生供体到供体的能量转移系统。这项技术利用了荧光共振能量转移技术（FRET）去监测核酸（DNA和RNA）的聚合酶链式反应（PCR）的扩增情况，这在分子诊断中是非常有用的。

关键词 荧光能量转移 技术 监测 PCR 荧光共振能量转移 聚合酶链式反应 多核苷酸 发色基团 转移系统

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FRET技术及其在蛋白质-蛋白质分子相互作用研究中的应用 被引量：21

11

作者 王进军 陈小川 邢达 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期980-984,共5页

简要综述了FRET方法在活细胞生理条件下研究蛋白质 蛋白质间相互作用方面的最新进展 .蛋白质 蛋白质间相互作用在整个细胞生命过程中占有重要地位 ,由于细胞内各种组分极其复杂 ,因此一些传统研究蛋白质 蛋白质间相互作用的方法 ,例... 简要综述了FRET方法在活细胞生理条件下研究蛋白质 蛋白质间相互作用方面的最新进展 .蛋白质 蛋白质间相互作用在整个细胞生命过程中占有重要地位 ,由于细胞内各种组分极其复杂 ,因此一些传统研究蛋白质 蛋白质间相互作用的方法 ,例如酵母双杂交、免疫沉淀等可能会丢失某些重要的信息 ,无法正确地反映在当时活细胞生理条件下蛋白质 蛋白质间相互作用的动态变化过程 .荧光共振能量转移 (fluorescenceresonanceenergytransfer ,FRET)是近来发展的一项新技术 ,此项技术的应用 ,为在活细胞生理条件下对蛋白质 蛋白质间相互作用进行实时的动态研究 。 展开更多

关键词 荧光共振能量转移 fret 蛋白质 相互作用 活细胞 荧光成像技术

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实时荧光定量PCR技术的类型、特点与应用 被引量：87

12

作者 袁亚男 刘文忠 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第3期27-30,共4页

实时荧光定量PCR技术是一种利用不同的荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。该技术根据荧光作用方式分为:SYBR荧光染料法、TaqMan技术、分子信标和复合探针等类型,依据其各自优缺点可将各技术方法分别应用... 实时荧光定量PCR技术是一种利用不同的荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。该技术根据荧光作用方式分为:SYBR荧光染料法、TaqMan技术、分子信标和复合探针等类型,依据其各自优缺点可将各技术方法分别应用于畜牧兽医领域不同方面的科研工作中,以期得到最优的定量检测效率。 展开更多

关键词 实时荧光定量PCR技术 荧光共振能量转移 荧光探针 淬灭探针

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绿色荧光蛋白为传能对的供体光漂白法测定FRET效率的探讨 被引量：2

13

作者 周晓娟 郭慧芳 +1 位作者 刘德龙 孙大业 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期127-130,共4页

探讨以两种新荧光蛋白MiCy,mKo为传能对并应用供体光漂白法测量荧光共振能量转移(FRET)效率。首先通过基因工程方法表达纯化了这两种蛋白,并测量了荧光光谱及光漂白性质,表明MiCy极易光漂白而mKo抗光漂白。进一步以Ni-NTA-agarose为FRE... 探讨以两种新荧光蛋白MiCy,mKo为传能对并应用供体光漂白法测量荧光共振能量转移(FRET)效率。首先通过基因工程方法表达纯化了这两种蛋白,并测量了荧光光谱及光漂白性质,表明MiCy极易光漂白而mKo抗光漂白。进一步以Ni-NTA-agarose为FRET模型,在Confocal上对MiCy进行光漂白时间常数的测量,并计算了FRET效率。结果表明MiCy-mKo传能对适合用供体光漂白法测量FRET效率,此传能对将在蛋白质相互作用研究中有广泛应用。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 荧光共振能量转移 fret效率 光漂白

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消癌平诱导人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞内caspase-3活化的荧光光谱分析 被引量：12

14

作者 陈同生 王小平 +3 位作者 王治平 王龙祥 王会营 邢达 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1327-1331,共5页

采用CCK-8技术检测发现传统中药消癌平(XAP)对人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的增殖活性具有显著的抑制作用。利用共聚焦扫描荧光显微成像、荧光共振能量转移(FRET)及其受体光漂白技术证实了基于FRET技术构建的SCAT3质粒在ASTC-a-1细胞中的稳... 采用CCK-8技术检测发现传统中药消癌平(XAP)对人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的增殖活性具有显著的抑制作用。利用共聚焦扫描荧光显微成像、荧光共振能量转移(FRET)及其受体光漂白技术证实了基于FRET技术构建的SCAT3质粒在ASTC-a-1细胞中的稳定表达。将消癌平加入细胞培养液中培育细胞,并在不同的时间检测活细胞内SCAT3的荧光发射光谱,从而监测细胞中caspase-3的活化状态。实验结果表明:(1)消癌平可以有效抑制人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的增殖活性并诱导细胞的死亡,消癌平对细胞的抑制作用具有剂量依赖性。(2)消癌平处理细胞72 h后,细胞内大量的SCAT3被切割,表明细胞内caspase-3的活化水平明显升高。(3)将含消癌平的细胞培养液与细胞共同培养24 h,然后采用没有消癌平的细胞培养液培养细胞48和72 h后,细胞内SCAT3的光谱没有明显改变,表明消癌平作用细胞24 h内没有显著激活细胞内的caspase-3。 展开更多

关键词 消癌平 荧光光谱 caspae-3 荧光共振能量转移(fret) 激光共聚焦荧光显微镜

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紫杉醇诱导不依赖于Caspase-3细胞类似Paraptosis的荧光光谱分析 被引量：6

15

作者 陈同生 王小平 +2 位作者 孙磊 王会营 王龙祥 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2623-2627,共5页

研究了紫杉醇(Taxol)诱导人肺腺癌细胞(ASTC-a-1)类似Paraptosis的特征和机理。采用CCK-8技术检测了抑制细胞活性的特性,结果表明大于70μmol.L-1浓度的紫杉醇可以显著抑制细胞活性;采用激光共聚焦扫描荧光成像从形态上检测了紫杉醇诱... 研究了紫杉醇(Taxol)诱导人肺腺癌细胞(ASTC-a-1)类似Paraptosis的特征和机理。采用CCK-8技术检测了抑制细胞活性的特性,结果表明大于70μmol.L-1浓度的紫杉醇可以显著抑制细胞活性;采用激光共聚焦扫描荧光成像从形态上检测了紫杉醇诱导细胞死亡的形态特征,表明紫杉醇诱导了类似副凋亡(Paraptosis)特征的细胞肿胀和细胞质空泡化,而且没有细胞膜皱褶、细胞核浓缩等细胞凋亡的特征;通过基因质粒转染在细胞转染稳定表达基于荧光共振能量转移(FRET)质粒SCAT3,并利用FRET受体光漂白技术和荧光光谱检测分析技术研究了紫杉醇诱导细胞类似Paraptosis过程中Caspase-3的活化特性,结果表明在紫杉醇诱导细胞质肿胀和细胞死亡的过程中Caspase-3没有被活化。以上研究结果表明紫杉醇可以通过类似Paraptosis的方式明显诱导细胞程序性死亡,该过程不依赖于Caspase-3的活性。 展开更多

关键词 紫杉醇(Taxol) Paraptosis 荧光光谱 Caspae-3 荧光共振能量转移(fret) 激光共聚焦荧光显微镜

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新型SARS-CoⅤ 3CL蛋白酶荧光多肽底物的设计、制备及其酶动力学研究 被引量：3

16

作者 万惠新 陈莉莉 +4 位作者 李欣 王昕 胡定宇 沈旭 沈竞康 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期79-82,共4页

以邻氨基苯甲酸(Abz)为荧光发射基团、2,4-二硝基苯基乙二胺(Eddnp)为荧光猝灭基团,设计合成了SARS-CoⅤ3CL蛋白酶的新型荧光多肽底物:H2N-E(Eddnp)STLQSGLK(Abz)-CONH2.用液相色谱-质谱(LC-MS)联用技术进行了表征,表明该多肽底物能被SA... 以邻氨基苯甲酸(Abz)为荧光发射基团、2,4-二硝基苯基乙二胺(Eddnp)为荧光猝灭基团,设计合成了SARS-CoⅤ3CL蛋白酶的新型荧光多肽底物:H2N-E(Eddnp)STLQSGLK(Abz)-CONH2.用液相色谱-质谱(LC-MS)联用技术进行了表征,表明该多肽底物能被SARS-CoⅤ3CL蛋白酶识别,并在QS之间被专一性酶解.另外,利用该多肽底物的荧光共振能量转移(FRET)特性,对SARS-CoⅤ3CL蛋白酶的酶解动力学性质进行了研究,结果表明,此荧光多肽底物可以作为荧光探针,应用于SARS-CoⅤ3CL蛋白酶活性的测定及其抑制剂的筛选. 展开更多

关键词 荧光共振能量转移(fret) SAPS-CoY 3CL蛋白酶 荧光探针 液相色谱 质谱

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荧光寿命成像及其在生物医学中的应用 被引量：12

17

作者 刘立新 屈军乐 +3 位作者 林子扬 陈丹妮 郭宝平 牛憨笨 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2005年第2期133-141,共9页

荧光寿命取决于荧光分子所处的微环境, 通过对样品荧光寿命的测量和成像可以定量获取样品的功能信息. 介绍荧光寿命成像(fluorescencelifetimeimaging, FLIM) 技术原理、实现途径、发展现状及其在生物医学中的应用. 提出一种基于皮秒扫... 荧光寿命取决于荧光分子所处的微环境, 通过对样品荧光寿命的测量和成像可以定量获取样品的功能信息. 介绍荧光寿命成像(fluorescencelifetimeimaging, FLIM) 技术原理、实现途径、发展现状及其在生物医学中的应用. 提出一种基于皮秒扫描相机、梯度折射率微透镜阵列、棱镜分光光谱仪、飞秒钛宝石激光器和荧光显微物镜的新型五维荧光显微成像技术, 该系统具有多光谱分辨功能以及很高的时间和空间分辨率, 能够实现三维多光子荧光强度、光谱分辨强度和寿命测量, 将在高通量生化分析、组织鉴别、胞内生理学和荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer, FRET) 等领域获得广泛应用. 展开更多

关键词 荧光寿命 生物医学 应用 荧光共振能量转移 皮秒扫描相机 显微成像技术 钛宝石激光器 光谱分辨 微透镜阵列 梯度折射率 分光光谱仪 空间分辨率 荧光分子 技术原理 实现途径 显微物镜 荧光强度 寿命测量 生化分析 微环境

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罗丹明B多层荧光纳米微球对Hg^2＋的检测

18

作者 米超 张纪梅 +2 位作者 张志秋 范咏梅 蔡宇玲 《化工新型材料》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期98-101,105,共5页

利用水热法合成了掺杂锌的碲化镉量子点(CdTe∶Zn QDs),并采用反相微乳法将SiO_2包覆在量子点表面形成多层SiO_2纳米微球。通过接枝方法将罗丹明B衍生物连接在硅球上,利用Hg^(2+)可以使罗丹明B衍生物的螺环结构发生开环反应并产生荧光... 利用水热法合成了掺杂锌的碲化镉量子点(CdTe∶Zn QDs),并采用反相微乳法将SiO_2包覆在量子点表面形成多层SiO_2纳米微球。通过接枝方法将罗丹明B衍生物连接在硅球上,利用Hg^(2+)可以使罗丹明B衍生物的螺环结构发生开环反应并产生荧光增强这一特性,构建了荧光共振能量转移(FRET)的比率探针,并成功实现了对水溶液中Hg^(2+)的比率检测。结果表明,该探针在波长为521nm和577nm时对Hg^(2+)具有良好的灵敏度和选择性,检测限是0.5μM。 展开更多

关键词 荧光共振能量转移(fret) 罗丹明B CdTe∶Zn量子点 汞离子检测

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基于CdSe/ZnS量子点荧光生物传感器构建与应用 被引量：3

19

作者 唐志英 孙泽坤 +2 位作者 冯泳林 邵丽萍 白忠臣 《传感器与微系统》 CSCD 2019年第7期150-153,共4页

设计了一种由CdSe/ZnS量子点和荧光染料Cy3(C31H37KN2O8S2)基于荧光共振能量转移(FRET)原理的生物传感器,并进行了该体系下不同浓度和不同pH溶液中荧光转移强度的实验。实验表明:CdSe/ZnS荧光半导体量子点作为供体对Cy3(C31H37KN2O8S2)... 设计了一种由CdSe/ZnS量子点和荧光染料Cy3(C31H37KN2O8S2)基于荧光共振能量转移(FRET)原理的生物传感器,并进行了该体系下不同浓度和不同pH溶液中荧光转移强度的实验。实验表明:CdSe/ZnS荧光半导体量子点作为供体对Cy3(C31H37KN2O8S2)染料的荧光增强作用明显。在CdSe/ZnS量子点与Cy3的比例为1∶1.2时,荧光转移效率达到83.68%,对细胞外液p H值荧光变化敏感(pH=5.93~8.36)。此外,该生物传感器可以清楚地识别前列腺癌细胞。该实验结果对前列腺癌细胞的早期诊断和前列腺癌生物传感器的设计提供了一种新的方法。 展开更多

关键词 生物传感器 荧光共振能量转移体系(fret) CdSe/ZnS量子点 Cy3荧光染料

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基于FRET原理构建AtLHT1转运底物筛选探针 被引量：1

20

作者 李志伟 李本杰 +3 位作者 刘志兵 林菲 徐汉虹 舒薇 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期77-84,共8页

【目的】为提高导向药物筛选通量,加快导向农药分子设计、合成、筛选等研发速度,构建基于拟南芥氨基酸转运蛋白AtLHT1的荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)探针作为导向农药筛选平台。【方法】构建CFP-LHT1... 【目的】为提高导向药物筛选通量,加快导向农药分子设计、合成、筛选等研发速度,构建基于拟南芥氨基酸转运蛋白AtLHT1的荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)探针作为导向农药筛选平台。【方法】构建CFP-LHT1-YFP的三明治探针,分别在大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3)原核细胞和BY4741酵母细胞中进行表达、鉴定和纯化。采用荧光酶标仪和激光共聚焦检测FRET效率的变化。【结果】CFPAtLHT1-YFP融合蛋白探针纯化后,分别与供试氨基酸和草甘膦混合,供试氨基酸和草甘膦的加入导致探针蛋白的FRET比率发生明显变化,草甘膦处理使D535 nm/D480 nm升高7%~12%,其变化趋势与阳性配体甘氨酸和谷氨酸接近,而加入阴性配体精氨酸则没有明显变化。同时,FRET比率呈现底物浓度依赖。样品中分别加入1、5和30 mmol/L的草甘膦溶液,20 min后检测到D535 nm/D480 nm分别升高3%、1%和13%,阳性配体也存在FRET比率随着底物浓度上升而升高的趋势,而阴性配体变化不规则。利用光漂白法检测到氨基酸或草甘膦处理后单个酵母细胞的FRET效率发生明显变化。加入阳性对照的甘氨酸和谷氨酸后,FRET效率变化明显,其中,甘氨酸和谷氨酸的FRET效率分别达到30%和26%;加入草甘膦处理的FRET效率与谷氨酸接近,达26%;含PBS的空白对照组没有明显的FRET效率变化。【结论】AtLHT1-FRET探针可以与中性氨基酸甘氨酸和酸性氨基酸谷氨酸结合,但不结合碱性氨基酸精氨酸;FRET效率因不同底物有所差异,且具有一定的底物浓度依赖性;同时,证明了草甘膦能够被氨基酸转运蛋白AtLHT1转运。 展开更多

关键词 荧光共振能量转移 AtLHT1 fret探针 导向农药

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