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GFP标记溶磷草木樨中华根瘤菌CHW10B及其定殖
被引量：
16
1
作者
任嘉红
刘辉
+3 位作者
姜楠
魏玉宏
张冰
王莹
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期74-79,I0001,共7页
【目的】为有效利用草木樨中华根瘤菌CHW10B菌株,对绿色荧光蛋白（GFP）标记的菌株在南方红豆杉根际及其根部的定殖进行研究。【方法】采用修改的反复冻融转化方法,将穿梭载体p GFP4412质粒转化进入草木樨中华根瘤菌CHW10B细胞,对该菌...
【目的】为有效利用草木樨中华根瘤菌CHW10B菌株,对绿色荧光蛋白（GFP）标记的菌株在南方红豆杉根际及其根部的定殖进行研究。【方法】采用修改的反复冻融转化方法,将穿梭载体p GFP4412质粒转化进入草木樨中华根瘤菌CHW10B细胞,对该菌株进行GFP标记,筛选荧光表达强烈且稳定遗传的转化子,对转化子的细胞及菌落形态特征进行观察,并采用钼锑抗比色法对其溶磷能力进行测定。在此基础上,以GFP基因标记和抗性标记作为示踪手段,将GFP标记的CHW10B菌株接种到南方红豆杉1年生盆栽实生苗根表面,借助荧光显微镜及稀释涂布技术,对根际土壤中GFP标记菌株进行定期回收检测。【结果】成功获得CHW10B菌株荧光表达强烈且稳定遗传的GFP转化子,该转化子及野生菌株均为革兰氏阴性（G-）,短杆菌,但二者在LB固体平板上的菌落形态有一定差别。野生菌株菌落呈圆形、边缘整齐,表面湿润黏稠,为乳白色;而标记菌株CHW10B-GFP2菌落表面为浅棕色,其他一致;标记菌株溶磷能力与野生菌株接近,发酵液上清液中可溶性磷含量分别为639.12和656.57 mg·L-1。GFP标记菌株在南方红豆杉根际的数量变化幅度较大,接种1天根际土壤中CHW10B转化子菌数为6.08×107cfu·g-1,随后细菌数量迅速减少,15天后标记细菌数量开始增多,25~40天菌体数量升高并呈平稳趋势。用荧光显微镜对接种40天后南方红豆杉的根部进行观察,发现在根系表面及其内部有大量发绿色荧光的GFP标记细胞存在。【结论】GFP基因标记的CHW10B菌株在南方红豆杉幼苗根际土壤中具有持久性定殖的能力;另外,该标记菌株能在根表面和内部定殖,具有内生性。
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关键词
南方红豆杉
草木樨中华根瘤菌
定殖
绿色荧光蛋白基因
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题名
GFP标记溶磷草木樨中华根瘤菌CHW10B及其定殖
被引量：
16
1
作者
任嘉红
刘辉
姜楠
魏玉宏
张冰
王莹
机构
长治学院生物科学与技术系
安徽师范大学环境科学与工程学院
出处
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期74-79,I0001,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31100471)
山西省高校重点学科建设专项资金项目(20111051
+1 种基金
20131008)
山西省大学生创新项目(2013365)
文摘
【目的】为有效利用草木樨中华根瘤菌CHW10B菌株,对绿色荧光蛋白（GFP）标记的菌株在南方红豆杉根际及其根部的定殖进行研究。【方法】采用修改的反复冻融转化方法,将穿梭载体p GFP4412质粒转化进入草木樨中华根瘤菌CHW10B细胞,对该菌株进行GFP标记,筛选荧光表达强烈且稳定遗传的转化子,对转化子的细胞及菌落形态特征进行观察,并采用钼锑抗比色法对其溶磷能力进行测定。在此基础上,以GFP基因标记和抗性标记作为示踪手段,将GFP标记的CHW10B菌株接种到南方红豆杉1年生盆栽实生苗根表面,借助荧光显微镜及稀释涂布技术,对根际土壤中GFP标记菌株进行定期回收检测。【结果】成功获得CHW10B菌株荧光表达强烈且稳定遗传的GFP转化子,该转化子及野生菌株均为革兰氏阴性（G-）,短杆菌,但二者在LB固体平板上的菌落形态有一定差别。野生菌株菌落呈圆形、边缘整齐,表面湿润黏稠,为乳白色;而标记菌株CHW10B-GFP2菌落表面为浅棕色,其他一致;标记菌株溶磷能力与野生菌株接近,发酵液上清液中可溶性磷含量分别为639.12和656.57 mg·L-1。GFP标记菌株在南方红豆杉根际的数量变化幅度较大,接种1天根际土壤中CHW10B转化子菌数为6.08×107cfu·g-1,随后细菌数量迅速减少,15天后标记细菌数量开始增多,25~40天菌体数量升高并呈平稳趋势。用荧光显微镜对接种40天后南方红豆杉的根部进行观察,发现在根系表面及其内部有大量发绿色荧光的GFP标记细胞存在。【结论】GFP基因标记的CHW10B菌株在南方红豆杉幼苗根际土壤中具有持久性定殖的能力;另外,该标记菌株能在根表面和内部定殖,具有内生性。
关键词
南方红豆杉
草木樨中华根瘤菌
定殖
绿色荧光蛋白基因
Keywords
Taxus chinensis var.mairei
Sinorhizobium meliloti
colonization
GFP
分类号
Q939.99 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GFP标记溶磷草木樨中华根瘤菌CHW10B及其定殖
任嘉红
刘辉
姜楠
魏玉宏
张冰
王莹
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2015
16
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