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草甘膦N-乙酰转移酶反应动力学研究: 1; 作者卢维维洪玉枝刘子铎《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期805-808,共4页; 草甘膦N-乙酰转移酶(glyphosate N-acetytransferase,GAT)是一种能够通过转乙酰基的反应将草甘膦代谢为低毒物质乙酰草甘膦的酶,在抗除草剂转基因作物中具有潜在的应用价值。通过将地衣芽孢杆菌Ba-cillus licheniformis(Weigmann)Cheste... 展开更多; 关键词草甘膦N-乙酰转移酶亲和层析连续分光光度分析法酶反应动力学; 在线阅读下载PDF 职称材料

膦丝菌素乙酰转移酶的表达及单克隆抗体制备被引量：5: 2; 作者高旭东王永志 +8 位作者时圣凤李忠鹏李小宇徐文静张正坤路扬张佳诗李启云王金刚《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期500-503,共4页; 目的表达有生物活性的膦丝菌素乙酰转移酶(PAT),制备PAT蛋白单克隆抗体(mAb)。方法通过PCR克隆bar基因编码区全长,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建重组质粒pET28-bar并转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),经IPTG诱导目的蛋白表达,利... 展开更多; 关键词膦丝菌素乙酰转移酶 BAR基因蛋白表达活性抗体制备; 在线阅读下载PDF 职称材料

源于Halomonas sp.抗草甘膦EPSPS的克隆、鉴定及应用: 3; 作者丁宁何云浩 +2 位作者吴琳绯李婵娟吴高兵《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期158-166,共9页; 为培育高抗草甘膦作物以应对草甘膦杂草进化,从海洋细菌中筛选到1株高抗草甘膦的盐单胞菌属菌株(Halomonassp.),通过基因组测序及生物信息学分析,确定该菌株的EPSPS基因,在Escherichiacoli(DE3)中对fHoEPSPS、mfHoEPSPS(G384A位点突变)... 展开更多; 关键词抗除草剂作物抗草甘膦5-烯醇式莽草酸-3-磷酸合成酶草铵膦乙酰转移酶双抗除草剂作物基因聚合; 在线阅读下载PDF 职称材料

进口转基因抗Basta^(TM)除草剂油菜籽检测方法研究被引量：23: 4; 作者潘良文沈禹飞 +2 位作者陈家华胡永强陶军《粮食与油脂》 2001年第5期36-37,共2页; 建立了从油菜籽中提取总ＤＮＡ和用ＰＣＲ技术检测外源基因的方法，用该方法从进口油菜籽中检出外源的草丁膦乙酰转移酶基因（ＰＡＴ）、新霉素磷酸转移酶基因（ＮｐｔＩＩ）、花椰菜花叶病毒３５Ｓ启动子（ＣａＭＶ３５Ｓ）。; 关键词油菜籽草丁膦乙酰转移酶基因新霉素磷酸转移酶基因 CaMV35S启动子外源基因检测方法进口农产品; 在线阅读下载PDF 职称材料

抗除草剂Bar基因的优化及PAT蛋白的表达: 5; 作者李葱葱李飞武 +3 位作者谭喜昌夏蔚邵改革龙丽坤《湖北农业科学》 2015年第10期2516-2518,2521,共4页; 利用生物信息学方法优化了适用于原核表达的Bar基因序列密码子,克隆了Bar基因序列并构建了p ET28a-Bar融合表达载体,并转入大肠杆菌宿主菌BL21(DE3)。结果表明,融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式表达膦丝菌素乙酰转移... 展开更多; 关键词 BAR基因膦丝菌素乙酰转移酶原核表达分离纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

热处理对转基因秸秆中重组蛋白和重组DNA的降解作用: 6; 作者颜晶莹倪亮 +1 位作者沈星宇李玉《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第9期2079-2088,共10页; 随着转基因作物种植面积的不断扩大,如何高效处理转基因秸秆成为了一个重要的科学问题。未经处理的转基因秸秆中的重组蛋白和重组DNA可以在土壤中存在很长时间,并对土壤生物多样性产生潜在负面影响。因此寻找一个既节约成本又对环境无... 展开更多; 关键词转基因秸秆重组蛋白重组DNA 草胺膦乙酰转移酶(PAT) 5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因(Cp4-EPSPS) BT基因; 在线阅读下载PDF 职称材料

以还原氧化石墨烯和纳米二氧化锆为DNA探针固定平台电化学测定转基因玉米中特定基因序列（英文）: 7; 作者王学亮王朝霞 +1 位作者汪涛戴晓辉《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期839-846,共8页; 草胺膦乙酰转移酶基因(PAT)是一种转基因植物的外源DNA片段。本文以还原氧化石墨烯和纳米二氧化锆(nanoZrO2)的复合物作为固定DNA探针的平台,建立了一种灵敏地检测PAT基因的方法。首先,氧化石墨烯直接在电极表面进行电化学还原,然后将一... 展开更多; 关键词微分脉冲伏安法还原氧化石墨烯纳米氧化锆草胺膦乙酰转移酶基因转基因玉米; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名草甘膦N-乙酰转移酶反应动力学研究: 1; 作者卢维维洪玉枝刘子铎; 机构华中农业大学农业微生物学国家重点实验室; 出处《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期805-808,共4页; 基金国家自然科学基金项目(30370027 30350057)资助; 文摘草甘膦N-乙酰转移酶(glyphosate N-acetytransferase,GAT)是一种能够通过转乙酰基的反应将草甘膦代谢为低毒物质乙酰草甘膦的酶,在抗除草剂转基因作物中具有潜在的应用价值。通过将地衣芽孢杆菌Ba-cillus licheniformis(Weigmann)Chester AB 94036中的草甘膦N-乙酰转移酶(glyphosate N-acetyltransferase,GAT)基因克隆到大肠杆菌中,获得含有重组质粒pGEX 6p-1-gat的重组菌株。对重组菌株进行诱导表达,经过GST亲和层析纯化,获得约17 ku的目的蛋白。通过酶标仪和连续分光光度分析法,对GAT蛋白进行了酶反应动力学测定。研究表明GAT的催化常数kcat为6.420 min-1,米氏常数KM为1.162 mmol/L,由此得出其催化效率kcat/KM为5.52 L/(mmol.min)。; 关键词草甘膦N-乙酰转移酶亲和层析连续分光光度分析法酶反应动力学; Keywords glyphosate N-acetyltransferase affinity chromatogram continuous spectrophotometric assay enzyme kinetic; 分类号 Q555.3 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名膦丝菌素乙酰转移酶的表达及单克隆抗体制备被引量：5: 2; 作者高旭东王永志时圣凤李忠鹏李小宇徐文静张正坤路扬张佳诗李启云王金刚; 机构东北农业大学园艺学院吉林省农业科学院吉林农业大学生命科学院; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期500-503,共4页; 基金农业部转基因专项"抗病虫转基因大豆新品种培育"(2011ZX08004-004) 中青年科技领军人才及优秀创新团队项目"吉林省农业微生物研究与利用研究创新团队"(20121812) 吉林省农业微生物重点实验室平台建设项目(20122105); 文摘目的表达有生物活性的膦丝菌素乙酰转移酶(PAT),制备PAT蛋白单克隆抗体(mAb)。方法通过PCR克隆bar基因编码区全长,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建重组质粒pET28-bar并转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子亲和层析纯化PAT蛋白,分析PAT蛋白活性。免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾脏与Sp2/0细胞融合,经间接ELISA筛选分泌抗PAT蛋白抗体杂交瘤细胞。结果在大肠杆菌中以可溶形式表达出重组PAT蛋白,纯化的重组PAT蛋白具有乙酰转移酶活性,制备了9株抗PAT蛋白mAb。结论表达的PAT蛋白可以用于除草剂解除剂研究,制备的mAb可能用于转基因产品的检测研究。; 关键词膦丝菌素乙酰转移酶 BAR基因蛋白表达活性抗体制备; Keywords phosphinothricin acetyltransferase bar gene protein expression activity monoclonal antibody; 分类号 R392.121 [医药卫生—免疫学] S41 [农业科学—植物保护]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名源于Halomonas sp.抗草甘膦EPSPS的克隆、鉴定及应用: 3; 作者丁宁何云浩吴琳绯李婵娟吴高兵; 机构华中农业大学植物科学技术学院武汉设计工程学院食品与生物科技学院华中农业大学生命科学技术学院; 出处《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期158-166,共9页; 基金国家自然科学基金项目(31971383); 文摘为培育高抗草甘膦作物以应对草甘膦杂草进化,从海洋细菌中筛选到1株高抗草甘膦的盐单胞菌属菌株(Halomonassp.),通过基因组测序及生物信息学分析,确定该菌株的EPSPS基因,在Escherichiacoli(DE3)中对fHoEPSPS、mfHoEPSPS(G384A位点突变)和mHoEPSPS(mfHoEPSPS N端缺失PDT)进行重组表达和纯化,并运用自切割肽LP4/2A介导的基因聚合策略,将抗草铵膦的酶(Repat)置于mHoEPSPS的N端,构建了双抗草甘/铵膦酶(RLH),将其编码基因导入烟草后赋予草甘/铵膦复合抗性。结果显示,该菌株的EPSPS基因(fHoEPSPS)可编码一个N段融合了预苯酸脱水酶(PDT)的双功能酶。草甘膦抗性分析显示mfHoEPSPS的抗性比fHoEPSPS提高了19倍,将mHoEPSPS基因导入烟草后可赋予烟草3倍推荐剂量的草甘膦耐受性,转RLH基因的烟草能够耐受3~5倍推荐剂量的草甘/铵膦复合除草剂。结果表明,源于Halomonas sp.的抗草甘膦EPSPS是一种新型草甘膦耐受酶,通过G384A的位点突变可提高酶活;利用自切割肽介导的基因堆叠策略获得的转RLH基因烟草表现出较高草甘/铵膦复合抗性。; 关键词抗除草剂作物抗草甘膦5-烯醇式莽草酸-3-磷酸合成酶草铵膦乙酰转移酶双抗除草剂作物基因聚合; Keywords herbicide-resistant crops glyphosate-resistant 5-enolshikimate-3-phosphate synthase glufosinate acetyltransferase dual herbicide-resistant crops gene pyramiding; 分类号 S188 [农业科学—农业基础科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名进口转基因抗Basta^(TM)除草剂油菜籽检测方法研究被引量：23: 4; 作者潘良文沈禹飞陈家华胡永强陶军; 机构上海出入境检验检疫局; 出处《粮食与油脂》 2001年第5期36-37,共2页; 基金国家出入境检验检疫局科研项目; 文摘建立了从油菜籽中提取总ＤＮＡ和用ＰＣＲ技术检测外源基因的方法，用该方法从进口油菜籽中检出外源的草丁膦乙酰转移酶基因（ＰＡＴ）、新霉素磷酸转移酶基因（ＮｐｔＩＩ）、花椰菜花叶病毒３５Ｓ启动子（ＣａＭＶ３５Ｓ）。; 关键词油菜籽草丁膦乙酰转移酶基因新霉素磷酸转移酶基因 CaMV35S启动子外源基因检测方法进口农产品; 分类号 F762.2 [经济管理—产业经济] TS222.1 [轻工技术与工程—粮食、油脂及植物蛋白工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗除草剂Bar基因的优化及PAT蛋白的表达: 5; 作者李葱葱李飞武谭喜昌夏蔚邵改革龙丽坤; 机构吉林省农业科学院; 出处《湖北农业科学》 2015年第10期2516-2518,2521,共4页; 基金全国博士后面上项目(2011M500626); 文摘利用生物信息学方法优化了适用于原核表达的Bar基因序列密码子,克隆了Bar基因序列并构建了p ET28a-Bar融合表达载体,并转入大肠杆菌宿主菌BL21(DE3)。结果表明,融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式表达膦丝菌素乙酰转移酶(PAT蛋白质),并通过镍离子亲和层析纯化后获得了PAT蛋白质,该纯化蛋白质的获得为利用酶联免疫法定量检测和筛选转基因植物提供了必要前提。; 关键词 BAR基因膦丝菌素乙酰转移酶原核表达分离纯化; Keywords Bar gene phosphinothricin acetyltransferase prokaryotic expression separation and purification; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名热处理对转基因秸秆中重组蛋白和重组DNA的降解作用: 6; 作者颜晶莹倪亮沈星宇李玉; 机构浙江大学农业试验站; 出处《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第9期2079-2088,共10页; 基金浙江大学实验技术研究项目(SYB202138) 国家自然科学基金(32000195)。; 文摘随着转基因作物种植面积的不断扩大,如何高效处理转基因秸秆成为了一个重要的科学问题。未经处理的转基因秸秆中的重组蛋白和重组DNA可以在土壤中存在很长时间,并对土壤生物多样性产生潜在负面影响。因此寻找一个既节约成本又对环境无害的秸秆处理方法非常重要。高温处理是降解转基因秸秆重组蛋白和重组DNA的有效手段,但目前对处理温度和处理时间的选择还缺乏系统的研究。本研究通过试纸条、聚合酶链反应(PCR)等方法检测不同温度和时间处理的转基因作物秸秆中重组蛋白和重组DNA的水平。结果表明,转基因大豆、棉花、玉米、水稻的秸秆在50℃处理3 h后,其体内的抗除草剂蛋白草胺膦乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase, PAT)等重组蛋白基本降解;但相同温度下,重组DNA的降解则需要4 d时间;提高处理温度可以在一定程度上缩短重组蛋白和重组DNA降解所需的时间。50℃处理4 d的条件在实际生产中通过堆肥就能实现。本研究从分子生物学的角度为转基因秸秆处理提供了依据。; 关键词转基因秸秆重组蛋白重组DNA 草胺膦乙酰转移酶(PAT) 5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因(Cp4-EPSPS) BT基因; Keywords transgenic straw recombinant protein recombinant DNA phosphinothricin acetyltransferase(PAT) CP45-enolpyruvyl-shikimate-3-phosphate synthase gene(Cp4-EPSPS) Bacillus thuringiensis(Bt)gene; 分类号 S141.4 [农业科学—肥料学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名以还原氧化石墨烯和纳米二氧化锆为DNA探针固定平台电化学测定转基因玉米中特定基因序列（英文）: 7; 作者王学亮王朝霞汪涛戴晓辉; 机构菏泽学院化学化工学院山东农业大学化学与材料科学学院; 出处《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期839-846,共8页; 基金 Supported by the National Natural Science Foundation of China(No.21105023) the Natural Science Foundation Committee of Shandong Province,China(No.ZR2017MB062,No.ZR2015BL014)~~; 文摘草胺膦乙酰转移酶基因(PAT)是一种转基因植物的外源DNA片段。本文以还原氧化石墨烯和纳米二氧化锆(nanoZrO2)的复合物作为固定DNA探针的平台,建立了一种灵敏地检测PAT基因的方法。首先,氧化石墨烯直接在电极表面进行电化学还原,然后将一层nanoZrO2涂覆于其表面,利用DNA中的磷酸基团与nanoZrO2中氧的亲和作用固定DNA探针。通过微分脉冲伏安法检测DNA探针与PAT基因片段的杂交,构建了用于检测PAT基因片段的电化学生物传感器。该传感器具有稳定性好,重复性好的特点,可灵敏地检测转基因玉米中的PAT基因,检测限达2.0×10^-15mol/L。; 关键词微分脉冲伏安法还原氧化石墨烯纳米氧化锆草胺膦乙酰转移酶基因转基因玉米; Keywords differential pulse voltammetry reduced graphene oxide nano zirconia phosphinothricin acetyltransferase gene transgenic maize; 分类号 O657.1 [理学—分析化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	草甘膦N-乙酰转移酶反应动力学研究	卢维维洪玉枝刘子铎	《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2007	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	膦丝菌素乙酰转移酶的表达及单克隆抗体制备	高旭东王永志时圣凤李忠鹏李小宇徐文静张正坤路扬张佳诗李启云王金刚	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2013	5	在线阅读下载PDF 职称材料
3	源于Halomonas sp.抗草甘膦EPSPS的克隆、鉴定及应用	丁宁何云浩吴琳绯李婵娟吴高兵	《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	进口转基因抗Basta^(TM)除草剂油菜籽检测方法研究	潘良文沈禹飞陈家华胡永强陶军	《粮食与油脂》	2001	23	在线阅读下载PDF 职称材料
5	抗除草剂Bar基因的优化及PAT蛋白的表达	李葱葱李飞武谭喜昌夏蔚邵改革龙丽坤	《湖北农业科学》	2015	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	热处理对转基因秸秆中重组蛋白和重组DNA的降解作用	颜晶莹倪亮沈星宇李玉	《浙江农业学报》 CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
7	以还原氧化石墨烯和纳米二氧化锆为DNA探针固定平台电化学测定转基因玉米中特定基因序列（英文）	王学亮王朝霞汪涛戴晓辉	《应用化学》 CAS CSCD 北大核心	2019	0	在线阅读下载PDF 职称材料