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油菜茎基溃疡病菌LAMP-HNB检测方法的建立 被引量：4
1
作者 龙阳 马新华 +4 位作者 袁俊杰 卢乃会 杨卓瑜 魏霜 王卫芳 《广东农业科学》 CAS 2017年第10期66-69,175,共5页
油菜茎基溃疡病菌是油菜上最严重的真菌病害之一,是我国重要的检疫性有害生物。因此为防范其危害我国油菜产业生产安全,建立油菜茎基溃疡病菌的快速筛查方法具有重要意义。基于环介导等温扩增法(LAMP),以ITS(内转录间隔区)为靶序列并结... 油菜茎基溃疡病菌是油菜上最严重的真菌病害之一,是我国重要的检疫性有害生物。因此为防范其危害我国油菜产业生产安全,建立油菜茎基溃疡病菌的快速筛查方法具有重要意义。基于环介导等温扩增法(LAMP),以ITS(内转录间隔区)为靶序列并结合指示剂羟基萘酚蓝(HNB)建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的油菜茎基溃疡病菌的快速检测方法,并对其特异性、灵敏性进行评价以及实际样品进行检测。结果显示,该方法在62℃等温条件下仅需80 min即可通过肉眼直接目测试验结果。LAMP-HNB法与标准PCR检测方法对比显示其具有良好的特异性以及更高的灵敏度,利用该方法对10批油菜籽样品进行检测,共检出5批阳性样品,与标准中PCR检测方法结果一致。该方法的建立为油菜茎基溃疡病菌的检疫鉴定提供了新途径。 展开更多
关键词 油菜 茎基溃疡病菌 环介导等温扩增 羟基萘酚蓝 检疫
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加拿大进境油菜籽茎基溃疡病菌的检测与鉴定 被引量：11
2
作者 王振华 杨武 +5 位作者 赵晖 曾宪东 李凤新 蔡翔 王瀚昌 余浩 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期66-69,共4页
从加拿大进境油菜籽中随机选取船载油菜籽样品,通过特异引物的PCR扩增检测和病原菌分离鉴定,观察了油菜茎基溃疡病菌Leptosphaeria maculans的发生情况。结果表明:所有来自3艘轮船的15份油菜籽样品的油菜茎基溃疡病菌PCR检测都呈阳性;... 从加拿大进境油菜籽中随机选取船载油菜籽样品,通过特异引物的PCR扩增检测和病原菌分离鉴定,观察了油菜茎基溃疡病菌Leptosphaeria maculans的发生情况。结果表明:所有来自3艘轮船的15份油菜籽样品的油菜茎基溃疡病菌PCR检测都呈阳性;随机选择的3份阳性样品的病原菌分离、鉴定与致病性测试结果证实了PCR的检测结果。 展开更多
关键词 油菜茎基溃疡病菌 检测 鉴定
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油菜茎基溃疡病菌与黑胫病菌菌丝的生长动态 被引量：1
3
作者 叶芸 张建坤 +2 位作者 王琴 徐雪 王振华 《湖北农业科学》 2016年第18期4708-4710,4770,共4页
比较了油菜茎基溃疡病菌（Leptosphaeria maculans）和油菜黑胫病菌（L.biglobosa）在不同培养温度和2种培养基上的菌丝生长动态。结果表明,在PDA和V8培养基平板上都生长良好,油菜茎基溃疡病菌培养温度在28℃时,油菜黑胫病菌培养温度在2... 比较了油菜茎基溃疡病菌（Leptosphaeria maculans）和油菜黑胫病菌（L.biglobosa）在不同培养温度和2种培养基上的菌丝生长动态。结果表明,在PDA和V8培养基平板上都生长良好,油菜茎基溃疡病菌培养温度在28℃时,油菜黑胫病菌培养温度在25℃或28℃时,在PDA平板上菌丝生长最好;油菜黑胫病菌与油菜茎基溃疡病菌菌落生长速度相比,在最适培养温度（25℃或28℃）和相同的培养时间（21 d）内,二者在PDA平板上的菌落生长速度分别为5~7 mm/d和2.0 mm/d,前者的菌落直径约90 mm,是后者的2倍。因此,在温度为25℃或28℃的条件下,PDA培养基最适合这2种病菌的生长。 展开更多
关键词 油菜茎基溃疡病菌(Leptosphaeria maculans) 油菜黑胫病菌(L.biglobosa) 菌丝生长
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油菜茎基溃疡病菌基因组DNA提取方法的比较 被引量：3
4
作者 王振华 赵晖 +5 位作者 宋祺 李凤新 冯汉利 杨武 余浩 王瀚昌 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第3期511-513,共3页
比较了油菜茎基溃疡病菌基因组DNA的尿素提取法、SDS-CTAB提取法、CTAB提取法和试剂盒提取法的提取过程、DNA纯度和对PCR扩增的影响,旨在筛选能替代昂贵试剂盒法的方法。结果表明,尿素提取法可以满足DNA的PCR扩增要求,并取得与试剂盒提... 比较了油菜茎基溃疡病菌基因组DNA的尿素提取法、SDS-CTAB提取法、CTAB提取法和试剂盒提取法的提取过程、DNA纯度和对PCR扩增的影响,旨在筛选能替代昂贵试剂盒法的方法。结果表明,尿素提取法可以满足DNA的PCR扩增要求,并取得与试剂盒提取法相似的效果。尿素提取法还具有操作简便、成本低廉等优点,在植物检验检疫中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 油菜茎基溃疡病菌 PCR 基因组DNA 提取方法
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进境澳大利亚大麦夹杂油菜茎基溃疡病菌的检疫鉴定 被引量：1
5
作者 张慧丽 李雪莲 +2 位作者 陈先锋 吕燕 段维军 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期52-58,共7页
采用常规平板分离法,从进境澳大利亚大麦中夹杂的油菜籽上获得1株疑似油菜茎基溃疡病菌的菌株01829。通过致病性测定、形态学观察、特异性引物扩增、ITS序列比对分析,对01829进行了种类鉴定。结果表明:菌株01829在PDA培养基上生长较慢,... 采用常规平板分离法,从进境澳大利亚大麦中夹杂的油菜籽上获得1株疑似油菜茎基溃疡病菌的菌株01829。通过致病性测定、形态学观察、特异性引物扩增、ITS序列比对分析,对01829进行了种类鉴定。结果表明:菌株01829在PDA培养基上生长较慢,菌落边缘不整齐,产生大量分生孢子器和分生孢子;采用特异性引物对LMR1-D和Lmb分别进行PCR检测,结果均有预期扩增片段产生;基于ITS序列构建的系统发育树中,菌株01829和GenBank中其他油菜茎基溃疡病菌相关序列聚在同一分支;菌株01829接种油菜子叶和茎基部,在子叶和茎基部接种部位分别引起叶斑和凹陷溃疡斑。根据上述试验结果,将菌株01829鉴定为油菜茎基溃疡病菌,这是我国口岸首次从进境澳大利亚大麦中截获油菜茎基溃疡病菌。 展开更多
关键词 油菜茎基溃疡病菌 形态特征 系统发育分析 致病性测定 鉴定
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加拿大进境油菜籽茎基溃疡病菌的生物学特性
6
作者 潘玲玲 王峰 +4 位作者 莫斌 单彬 左天荣 张艳玲 颜超廷 《江苏农业科学》 2018年第10期96-99,共4页
油菜茎基溃疡病菌(Leptosphaeria maculans)是危害油菜等十字花科植物的世界性真菌病害,在我国尚无发现,被列为检疫性有害生物。为了解从加拿大进境油菜籽中分离的油菜茎基溃疡病菌的生物学特性,分别在不同温度、pH值、培养基成分和光... 油菜茎基溃疡病菌(Leptosphaeria maculans)是危害油菜等十字花科植物的世界性真菌病害,在我国尚无发现,被列为检疫性有害生物。为了解从加拿大进境油菜籽中分离的油菜茎基溃疡病菌的生物学特性,分别在不同温度、pH值、培养基成分和光暗条件下研究该菌株的生长和产孢情况及该菌株孢子的热致死温度。结果表明,加拿大进境油菜茎基溃疡病菌在5~37℃下均可进行营养生长,最适营养生长温度为25℃,分生孢子的热致死温度为54℃;在pH值为4~10的V8培养基中均可生长和产孢,生长情况除pH值为5外,其余没有显著性差异,但产孢量受pH值影响较大,最适pH值为7;病原菌在持续光照、持续黑暗、光暗交替条件下生长良好,持续黑暗利于产孢;V8培养基最适合该病原菌的生长。 展开更多
关键词 油菜茎基溃疡病菌 菌丝生长 产孢量 光温 pH值 培养基 生物学特性 热致死温度 营养生长
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重组酶介导的油菜茎基溃疡病菌荧光核酸扩增检测体系的建立
7
作者 陈吴健 张巧琦 +5 位作者 魏晓洁 朱青青 郭利川 应清界 梅高甫 曹栋栋 《浙江农业科学》 2023年第1期79-82,共4页
本文通过重组酶介导的核酸扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)建立一种快速检测油菜茎基溃疡病菌的方法。根据油菜茎基溃疡病菌的特异基因LMR1-D保守序列设计引物和探针,分析建立的RAA方法的灵敏度和特异性。该方法在39℃下... 本文通过重组酶介导的核酸扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)建立一种快速检测油菜茎基溃疡病菌的方法。根据油菜茎基溃疡病菌的特异基因LMR1-D保守序列设计引物和探针,分析建立的RAA方法的灵敏度和特异性。该方法在39℃下,反应时间段(<20 min),检测下限可达10拷贝·mL^(-1),与油菜黑胫病菌等近似种无交叉反应,具有良好的特异性。本研究建立的RAA方法反应速度快、特异性强、灵敏度高,适用于油菜茎基溃疡病菌的快速检测。 展开更多
关键词 核酸扩增技术 油菜 茎基溃疡病菌 重组酶介导扩增 种传病害
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甘蓝型油菜几丁质酶基因家族进化及其应答病菌的表达分析（英文） 被引量：4
8
作者 徐文 周腾胜 +3 位作者 鲁丹丹 安素妨 侯锦娜 栗根义 《河南农业科学》 北大核心 2020年第2期89-103,共15页
黑胫病和菌核病是造成世界油菜产量下降的2种主要病害,分别由油菜茎基溃疡病菌和核盘菌引起。几丁质酶基因家族被认为是一类病害相关蛋白质,在植物抵抗病菌和非生物胁迫应答过程中发挥着重要作用。然而,甘蓝型油菜中关于几丁质酶基因家... 黑胫病和菌核病是造成世界油菜产量下降的2种主要病害,分别由油菜茎基溃疡病菌和核盘菌引起。几丁质酶基因家族被认为是一类病害相关蛋白质,在植物抵抗病菌和非生物胁迫应答过程中发挥着重要作用。然而,甘蓝型油菜中关于几丁质酶基因家族进化及其应答黑胫病和菌核病的表达研究尚未有报道。本研究在甘蓝型油菜基因组中共鉴定了68个几丁质酶基因,分为5个不同的类,分布在15条染色体上。进化分析表明,甘蓝型油菜中几丁质酶基因家族成员的扩张主要是由片段复制和串联重复所致。此外,利用转录组测序数据分析了甘蓝型油菜几丁质酶基因家族应答2种病菌胁迫的表达谱。结果表明,在2种病菌侵染下,几丁质酶基因家族中有一些成员的表达均被诱导,也存在一些几丁质酶基因家族成员被特异地诱导表达。由此可见,甘蓝型油菜中几丁质酶基因家族不同成员的功能在长期进化过程中发生了分化,在应答不同病害胁迫中发挥特异的作用。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 几丁质酶基因家族 表达模式 油菜茎基溃疡病菌 核盘菌
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2种十字花科检疫性病菌快速检测方法的建立
9
作者 于璇 魏霜 +1 位作者 姜子德 王卫芳 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第9期1962-1971,共10页
【目的】人工构建一段随机序列并作为扩增内标(Internal amplification control,IAC)添加进实时荧光PCR体系中,建立含有扩增内标的十字花科细菌性黑斑病菌(Pseudomonas syringae pv.maculicola)和油菜茎基溃疡病菌(Leptosphaeria macula... 【目的】人工构建一段随机序列并作为扩增内标(Internal amplification control,IAC)添加进实时荧光PCR体系中,建立含有扩增内标的十字花科细菌性黑斑病菌(Pseudomonas syringae pv.maculicola)和油菜茎基溃疡病菌(Leptosphaeria maculans)的多重实时荧光PCR方法,检测上述2种检疫性病菌,旨在在提高检测通量的同时,指示PCR假阴性问题。【方法】通过对实时荧光PCR体系中各个引物及探针比例进行优化,从特异性、灵敏度以及实际样品检测等多个方面对该方法进行系统评价。【结果】在20.0μL体系中加入1.114×10^(3)拷贝的IAC不影响靶目标的扩增,特异性强,对十字花科细菌性黑斑病菌及油菜茎基溃疡病菌的灵敏度分别为6.9×10^(-4)、1.6×10^(-4)ng/μL。应用该方法对52批进口油菜籽和十字花科蔬菜种子样品进行检测,结果显示可以实现上述2种检疫性病菌的快速检测,同时有效指示PCR反应的假阴性。【结论】两种检疫性病菌含IAC多重实时荧光PCR检测方法不仅能提高检测准确性而且能防止漏检,在口岸进口种子检疫中具有良好的推广应用前景,对引种安全具有重要意义。 展开更多
关键词 油菜籽 油菜茎基溃疡病菌 细菌性黑斑病菌 扩增内标
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