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油菜茎基溃疡病菌LAMP-HNB检测方法的建立 被引量:4
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作者 龙阳 马新华 +4 位作者 袁俊杰 卢乃会 杨卓瑜 魏霜 王卫芳 《广东农业科学》 CAS 2017年第10期66-69,175,共5页
油菜茎基溃疡病菌是油菜上最严重的真菌病害之一,是我国重要的检疫性有害生物。因此为防范其危害我国油菜产业生产安全,建立油菜茎基溃疡病菌的快速筛查方法具有重要意义。基于环介导等温扩增法(LAMP),以ITS(内转录间隔区)为靶序列并结... 油菜茎基溃疡病菌是油菜上最严重的真菌病害之一,是我国重要的检疫性有害生物。因此为防范其危害我国油菜产业生产安全,建立油菜茎基溃疡病菌的快速筛查方法具有重要意义。基于环介导等温扩增法(LAMP),以ITS(内转录间隔区)为靶序列并结合指示剂羟基萘酚蓝(HNB)建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的油菜茎基溃疡病菌的快速检测方法,并对其特异性、灵敏性进行评价以及实际样品进行检测。结果显示,该方法在62℃等温条件下仅需80 min即可通过肉眼直接目测试验结果。LAMP-HNB法与标准PCR检测方法对比显示其具有良好的特异性以及更高的灵敏度,利用该方法对10批油菜籽样品进行检测,共检出5批阳性样品,与标准中PCR检测方法结果一致。该方法的建立为油菜茎基溃疡病菌的检疫鉴定提供了新途径。 展开更多
关键词 油菜 茎基溃疡病菌 环介导等温扩增 萘酚蓝 检疫
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进境澳大利亚大麦夹杂油菜茎基溃疡病菌的检疫鉴定 被引量:1
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作者 张慧丽 李雪莲 +2 位作者 陈先锋 吕燕 段维军 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期52-58,共7页
采用常规平板分离法,从进境澳大利亚大麦中夹杂的油菜籽上获得1株疑似油菜茎基溃疡病菌的菌株01829。通过致病性测定、形态学观察、特异性引物扩增、ITS序列比对分析,对01829进行了种类鉴定。结果表明:菌株01829在PDA培养基上生长较慢,... 采用常规平板分离法,从进境澳大利亚大麦中夹杂的油菜籽上获得1株疑似油菜茎基溃疡病菌的菌株01829。通过致病性测定、形态学观察、特异性引物扩增、ITS序列比对分析,对01829进行了种类鉴定。结果表明:菌株01829在PDA培养基上生长较慢,菌落边缘不整齐,产生大量分生孢子器和分生孢子;采用特异性引物对LMR1-D和Lmb分别进行PCR检测,结果均有预期扩增片段产生;基于ITS序列构建的系统发育树中,菌株01829和GenBank中其他油菜茎基溃疡病菌相关序列聚在同一分支;菌株01829接种油菜子叶和茎基部,在子叶和茎基部接种部位分别引起叶斑和凹陷溃疡斑。根据上述试验结果,将菌株01829鉴定为油菜茎基溃疡病菌,这是我国口岸首次从进境澳大利亚大麦中截获油菜茎基溃疡病菌。 展开更多
关键词 油菜茎基溃疡病菌 形态特征 系统发育分析 致病性测定 鉴定
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重组酶介导的油菜茎基溃疡病菌荧光核酸扩增检测体系的建立
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作者 陈吴健 张巧琦 +5 位作者 魏晓洁 朱青青 郭利川 应清界 梅高甫 曹栋栋 《浙江农业科学》 2023年第1期79-82,共4页
本文通过重组酶介导的核酸扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)建立一种快速检测油菜茎基溃疡病菌的方法。根据油菜茎基溃疡病菌的特异基因LMR1-D保守序列设计引物和探针,分析建立的RAA方法的灵敏度和特异性。该方法在39℃下... 本文通过重组酶介导的核酸扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)建立一种快速检测油菜茎基溃疡病菌的方法。根据油菜茎基溃疡病菌的特异基因LMR1-D保守序列设计引物和探针,分析建立的RAA方法的灵敏度和特异性。该方法在39℃下,反应时间段(<20 min),检测下限可达10拷贝·mL^(-1),与油菜黑胫病菌等近似种无交叉反应,具有良好的特异性。本研究建立的RAA方法反应速度快、特异性强、灵敏度高,适用于油菜茎基溃疡病菌的快速检测。 展开更多
关键词 核酸扩增技术 油菜 茎基溃疡病菌 重组酶介导扩增 种传病害
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